Спектрофотометрия в фармакопейном анализе
Дипломная работа - Медицина, физкультура, здравоохранение
Другие дипломы по предмету Медицина, физкультура, здравоохранение
ода одной лампы. При помощи вращающегося непрозрачного диска лучи разбиваются на отдельные порции. Таким образом, на детектор падает излучение, интенсивность которого меняется в пределах I и I0, и его выход меняется с той же скоростью, что и скорость вращения диска. Это создает напряжение, амплитуда которого будет пропорциональна разнице в интенсивности двух лучей. Дальнейшее измерение напряжения, соответствующего интенсивности лучей, зависит от конструкции прибора.
Обычно для получения спектров требуется от 0,1 до 100 мг вещества в зависимости оу молярного коэффициента поглощения. Растворы, применяемые в спектрофотометрии, являются очень разведенными, что обусловливает необходимость точного взвешивания образца и точного отмеривания раствора при последующих разведениях. Подходящей для измерений концентрацией является та, которая обеспечивает показания поглощения между 0,2 и 0,7, что соответствует пропускаемости от 65 до 20%.
Определенное повышение точности спектрофотометрического анализа достигается путем, так называемой дифференциальной фотометрии. Этот метод основан на сравнении поглощения неизвестного раствора и поглощения стандартного раствора, последний подобран таким образом, что разница в поглощениях будет находиться в пределах, в которых измерение может быть выполнено с достаточной точностью. Дифференциальный способ принят Скандинавской фармакопеей в качестве основного метода для спектрофотометрических определений.
Согласно одному из вариантов дифференциального метода, называемого иногда ?Е или ?? методом, измерение проводится путем сравнения .неизвестного вещества при определенной величине рН к той же концентрации вещества, но при другой, отличной от первой, величине рН. Например, для определения фенолов разводят часть раствора щелочным, буфером, а другую часть кислотным буфером. Измеряют поглощение более щелочного раствора, используя для сравнения кислотный раствор. Рассчитывают содержание фенолов, применяя ?Е значение, найденное для чистого вещества в той же паре буферных растворов.
Таким образом определяется содержание гексахлорофена в жидком мыле по Фармакопее США XVII. Так как ряд веществ не показывает изменений в спектральных характеристиках при изменении рН, дифференциальный метод для фенолов можно считать более специфичным, чем химический метод.
.4 Кривые поглощения
Электронные спектры молекул графически изображаются |В виде кривых поглощения. Для этого наносят по оси ординат единицы поглощения, а по оси абiисс - единицы длин волн. Единицы поглощения обычно выражают в виде абсолютного поглощения А, удельного показателя поглощения Е (1%, 1 см) или молярного показателя поглощения, или в процентах пропускания Т. Значения волн выражают в нанометрах (нм), иногда в волновых числах (см-1) и редко в ангстремах ().
Так как величина поглощения зависит от концентрации раствора и толщины слоя, то при построении кривых поглощения рекомендуют переводить ее в молярный показатель поглощения, который является характерным для вещества (рис. 3).
Однако при условии постоянной толщины слоя и одинаковой концентрации построение графика зависимости поглощение - длина волны является наиболее удобным для быстрого установления характера спектра и количественных определений. Последний способ изображения принят большинством фармакопей (рис. 4).
Электронные спектры поглощения неорганических и органических веществ издаются в разных странах периодически в виде отдельных сборников. Число таких спектров достигает обычно нескольких сотен, что затрудняет работу аналитиков, интересующихся спектрами лекарственных веществ и близких к ним соединений. Данное обстоятельство говорит о целесообразности выпуска атласов ультрафиолетовых спектров лекарственных веществ.
.5 Калибровка спектрофотометров
Приборы следует проверять время от времени в отношении шкалы длин волн и точности фотометрической шкалы поглощения (разрешающая способность прибора).
Наилучшим источником для калибровки шкалы длин волн является ртутно-кварцевая лампа, линии которой при 239,95, 248,30, 253,65, 280,4, 302,25, 313,16, 334,15, 365,48, 404,66, 435,83, 546,1, 578,0, 623,44, 671,52 и 690,72 нм рекомендуются большинством фармакопей. Линии спектра газоразрядной водородной лампы при 486,13 и 656,28 нм могут быть также использованы. Шкалу длин волн проверяют при помощи подходящих стеклянных фильтров, которые имеют характерные полосы поглощения в видимой и ультрафиолетовой областях. Рекомендованы стандартные стекла, содержащие дидимий (смесь редкоземельных элементов празеодимия и неодимия). Известно также применение для этих целей стекла, содержащего холмий.
Шкалу поглощения проверяют, по цветным фильтрам, имеющим стандартное поглощение, или по стандартным растворам щелочного хромата калия или подкисленного бихромата калия. Рекомендуются также растворы сульфата меди и сульфата кобальт-аммония. Наиболее удобен раствор бихромата калия, так как он поглощает не только в ближней, ультрафиолетовой, но и в видимой области.
.6 Отклонение от закона Ламберта - Бера
Отклонения от закона Ламберта - Бера могут быть обусловлены различными изменениями с анализируемым веществом или относятся к недостаткам прибора. Нарушение закона иногда является результатом изменения концентрации растворенного вещества вследствие ассоциации между молекулами растворенного вещества или между молекулами растворенного вещества и