Авторефераты по всем темам >>
Авторефераты по биологии
Разработка и совершенствование биотехнологических процессов при промышленном производстве биопрепаратов
Автореферат докторской диссертации по биологии
|
Страницы: | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | |
СКАЧАТЬ ОРИГИНАЛ ДОКУМЕНТАаа 2.2.1. 2. Разработка технологической линииа промышленного
производства трипсина
Нами разработанаа технологическая линия промышленного производства трипсина, включающая эффективное современное оборудование: реакторы с автоматическим перемешиванием суспензии и регулированием температурного режима, оборудование для разделенияа суспензии после экстрагирования и высаливания, оборудование для высушивания конечного продукта. За счет применения современной техники обеспечен наиболее высокий уровень механизации, автоматизации процессов, что способствовало получению более активного трипсина, повышению производительности труда. Предполагаемый экономический эффект от организации производства трипсина сухого (ТС) для вирусологических целей на 1000 кг в год равен 118 млн. руб.
Освоение технологии изготовления трипсина проводили в ГНУ ВНИТИБП и НПО УСинтезФ (г. Курган), на Алма-Атинском и Омском биокомбинатах. Опытно-промышленные серии трипсина использованы для получения культур клеток при изготовлении вакцин против болезни Марека, чумы плотоядных, болезни Ауески и трансмиссивногоа гастроэнтерита свиней. Пригодность опытно-промышленных серий трипсина для получения культур клеток противовирусных препаратов была подтверждена на Омском, Алма-Атинском биокомбинатах и Курской биофабрике.
2.2.1.3. Использование трипсина при культивировании клетока в производстве противовирусных вакцин
Опытно-промышленные образцы фермента проверялись при культивировании на широком спектре культур клеток совместно с сотрудниками ВГНКИ и на биопредприятиях. Установлена эффективность использования трипсина для получения различных видов первичных культур клеток (выход клеток с 1 г. ткани для ФЭК, ПЭК, ТБ, ПКЩ, ПЩ, ПК составил 137,2; 72; 166; 93,5; 57; 121 млн.кл. соответственно) и перевиваемых культур клеток MDBK, MDCK, СПЭВ.
Клеточные культуры, изготовленные с использованием растворов опытно-промышленных серий трипсина, по чувствительности и уровню накопления вирусов: штаммов: - БУК-628 вируса болезни Ауески; МВА 1/77 вируса парагриппа-3 (ПГ-3); МВА 1/80 вируса инфекционного ринотрахеита (ИРТ) крупного рогатого скота, штаммы С и Д парвовирусного энтерита собак (ПВЭС), по морфологии и срокам проявления ЦПД были сходны с контрольными культурами клеток (Дифко), что говорит о равноценности и перспективности растворов фермента для практического использования.
Трипсин был испытан на Омском биокомбинате для диспергирования ткани перепелиных эмбрионов (ПЭ) при получении культуры клеток ФЭП и вакцины против болезни Марека из штамма ФС-126 герпеса индеек. Фермент обладал равной с контролем диспергирующей активностью в отношении ткани ПЭ и обеспечивал выход 45,8-68,9 млн. кл/г, равноценный контролю, са жизнеспособностью клеток 95-97%. Опытные и контрольные культуры клеток ФЭП характеризовались равноценной чувствительностью и были пригодными для получения штамма УЭПМФ вируса чумы плотоядных в производственных условиях.
Таким образом, отечественный фермент трипсин, полученный по усовершенствованной технологии, пригоден для культивирования клеток и вирусов и не уступает по эффективности импортному препарату.
2.2.2. Разработка и применение полимерных композиций в
технологии производства биопрепаратов
2.2.2. 1. Разработка способа иммобилизации трипсина а
на полимерном носителе
Для консервации трипсина, с целью сохранения его диспергирующих свойств и протеолитической активности, нами разработан способ иммобилизации ана фторсодержащем полимерном носителе (СКФ-26 и СКФ-260 ВРТ) с высокой химической, биологической стойкостью и инертностью (табл. 2).
Таблица 2
Влияние иммобилизованного трипсина на получение клеточных культура аа ааn=5
N |
Наименование фермента |
Наименование носителя |
Протеолитическая активность, ЕД |
ПЭ |
КЭ |
||
Выход клеток с 1 г. ткани млн. |
Жизнеспособность клеток,а % |
Выход клеток с 1 г. ткани млн. |
Жизнеспособно сть клеток,а % |
||||
I |
Нативный трипсин |
235 |
85 |
96 |
120 |
97 |
|
II |
Иммобилизованный трипсин |
СКФ-26 |
235 |
125 |
97 |
150 |
97 |
СКФ-260ВРТ |
235 |
145 |
96 |
160 |
97 |
||
Испытания иммобилизованного фермента на полимерном носителе в качестве диспергирующего агента показали возможность использования егоа при дезагрегации тканей перепелиных и куриныха эмбрионов (ПЭ и КЭ), выход клеток с единицы ткани превышал уровень контроля. Полученные клетки были жизнеспособны при монослойном культивировании. При соблюдении стерильности рост клеток аКЭ был выше уровня контроля на 25-33%, а рост клеток ПЭ на 47-70%.
Таким образом, разработан способ иммобилизации трипсина на полимерном носителе, обеспечивающий сохранение свойств фермента, его протеолитическую и диспергирующую активность. Жизнеспособность клеток, полученных с использованием иммобилизованного фермента, была на уровне контроля, а выход клеток с единицы ткани превышал его.
2.2.2. 2. Разработка полимерных материалов для
биотехнологического оборудования
Полимеры с повышенной термической стабильностью, химической стойкостью и биологической инертностью, такие как фторкаучуки,а использовали не только как носители при иммобилизации протеолитического фермента трипсина, но и как конструкционные материалы для биологического оборудования (авторские свидетельства: № 701129, УРезиновая смесь на основе фторуглеродных каучуковФ, бюл. - 1979. - № 44. - С.193.; № 770126, УРезиновая смесь на основе фторкаучукаФ, бюл. - 1980. - № 37. - С.308; №а 783311, УРезиновая композиция на основе сополимера винилиденфторидаФ, бюл. -а 1980. - № 44. - С.110).
Испытание деформационных свойств полимеров при длительном старении в течение 502 сут. при комнатной температуре показало, что накопление остаточной деформации у фторуглеродной резины составляло - 16 %, у силиконовой резины - 23 - 25 % (в зависимости от наполнения). Высокая сопротивляемость полимеров при 20% сжатии позволила рекомендовать их для уплотнительныха и герметизирующих изделий.
В результате проведенных исследований были разработаны новые полимерные материалы, обладающие теплостойкостью, агрессивостойкостью, инертностью на основе фторкаучука СКФ-26 и СКФ-260 Д. Технологичность фтористых резиновых смесей улучшали при использовании совмещенных композиций с фторсиликоновыми смесями и олигомерными фторсодержащимиа соединениями, обладающими повышенной теплостойкостью при 200оС. Потеря массы при вуланизации у этих композиций составляли 4-2%. Усадка изделий была 2-1,5 %, в то время акак у контрольной смеси с дибутилсебацинатом потери массы и усадка составили соответственно 12% и 10%. Применение совмещенных композиций на основе фторкаучуков и фтосиликоновых смесей, фторсодержащего пластификатора обеспечивало вулканизацию под давлением в прессе, в котле и в воздушной среде термостата или в трубе агрегата непрерывной вулканизации, с последующим термостатированием. В качестве совулканизата бифургина или его замены были предложены новые вулканизующие агенты: производные дитиомочевины иа соединение 1,4 бис (2-меркаптобензтиазолилметилен) - пиперазина, позволяющие получать теплостойкие материалы. Для уплотнительных прокладок нами были разработаны пресс-формы, аизготовленные на Ставропольском ОЗТО и испытанные воа ВНИТИБП и Щелковском биокомбинате.
|
Страницы: | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | |
Авторефераты по всем темам >>
Авторефераты по биологии