Авторефераты по всем темам >>
Авторефераты по биологии
Разработка и совершенствование биотехнологических процессов при промышленном производстве биопрепаратов
Автореферат докторской диссертации по биологии
|
Страницы: | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | |
СКАЧАТЬ ОРИГИНАЛ ДОКУМЕНТААпробация работы. Материалы исследований доложены и обсуждены:
- на заседаниях Ученого совета ГНУ ВНИТИБП (1980-2009 гг.) в виде ежегодных отчетов по заданиям научно-технической программы (НТП) (1980-2009 гг.), фундаментальных и приоритетных прикладных исследований по научному обеспечению развития агропромышленного комплекса (АПК) Российской Федерации (РФ) на 2006-2010 гг.;
- на 23 Всесоюзных, Республиканских, Международных аи Всероссийских, совещаниях, семинарах, аконференциях, посвященных научным и практическим проблемам технологии промышленного производства ветеринарных биологических препаратов и биотехнологии, проводившихся в Москве, Владимире, Щелкове, Волжске, Курске, Сергиев-Посаде, Покрове, Краснодаре, (1981-2009 гг.);
- на секции УВетеринарная биотехнологияФ (2011 г).
Публикации. Материалы диссертации опубликованы в 71 научной работе, в том числе 11 в рецензируемых изданиях, входящих в переченьа ВАК Минобрнауки РФ для публикации материалов докторской диссертации. Получено 6 авторских свидетельства и патентов.
Объем и структура диссертации.а Диссертация изложена на 292 страницах и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, включающих материалы и методы, результаты, выводы и практические предложения, приложения, содержит 40 таблиц и 52 рисунка. Список литературы включает 457 наименований, из которых 358 отечественных и 99 зарубежных. В приложении представлены копии документов, подтверждающиеа достоверность работы, ее научную и практическую значимость.
Автор выражает признательностьа академику РАСХН А.Я. Самуйленко за научно-методическую помощь в организации и проведении исследований.
Искреннюю благодарность за руководство НИР и ОКР автор приносит А.И. Гуславскому, Е.Э. Школьникову, В.П. Гайденко, Б.В. Соловьеву, И.Н. Матвеевой, а также В.А. Лукиной, В.С. Иванову, Е.А. Рубану.
Практическую и консультативную помощь в выполнении некоторых разделов диссертации оказывали сотрудники института Н.И. Гвозденко, Н.М. Пухова, Л.А. Скороходова, В.Н. Егорова, А.А. Раевский, А.А.Потемкин, В.Н. Качалов, Е.И. Ярыгина, Е.П. Сапегина, Ю.Д. Фролов, В.Н. Еремец, Л.В. Анисимова, С.М. Панферова, Н.И. Назаркина, И.Б. Пивикова, А.Б Абрамов, В.Е. Васько, М.А. Фролова, а также сотрудники ВГНКИ В.Т. Ночевный, Н.А. Башашкина, Ставропольской биофабрики - А.П. Сурмило, НПО порошковой металлургииа - М.П. Анащенко, ВНИИ ЦБП - А.В. Канарский.
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
а2. 1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Работа выполнена в 1980-2010 гг. согласно планам НИР и ОКР ГНУ ВНИТИБП в соответствии с отраслевыми научными программами, в рамках Российской научно-технической программы фундаментальных и приоритетных прикладных исследований по научному обеспечению развития агропромышленного комплекса Российской Федерации.
Экспериментальныеа исследования осуществляли в лабораториях и отделах института, во Всероссийском государственном центре качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов (ВГНКИ). Практическую реализацию научно-исследовательских разработок осуществляли ана Щелковском, Омском и Алма-Атинском биокомбинатах, Ставропольской, Курской, Краснодарской биофабриках, НПО УСинтезФ (г. Курган).
2.1. 1. Материалы
Питательные среды и растворы. В работе использовали культуральные среды Игла, 199, гидролизат лактальбумина; растворы Хенкса и Эрла; трипсин импортного (УDifkoФ, УFerakУ, УMerkУ) и отечественного производства ТУ 9358013.00008064Ц96; сыворотки крупного рогатого скота (КРС), овец; защитные среды: сахарозо-альбуминовую (СФГА) и сахарозо-желатозную (СФГЖ); разбавитель вируса и раствор концентрата разбавителя для противовирусных вакцин (ТУ 9384-001-93840700-00).
Для изготовления вакцины против лептоспироза животных применяли питательную среду ГНКИ, в которой использовали альбуминовую фракцию сыворотки крови овец; для культивирования Staphylococсus aureus -а бульон Хоттингера и мясопептонный бульон (МПБ).а
Культуры клеток. В экспериментах использовали первичные культуры клеток (ПКК) различного происхождения - почек крольчат (ПК), щенков (ПЩ), кошек (ПКШ), эмбрионов коров (ПЭК), фибробластов эмбрионов кур (ФЭК) и перепелов (ФЭП); а также перевиваемые линии клеток: почки сирийского хомячка (ВНК-21), почки теленка (ПТ-80), почки крупного рогатого скота (MDBK), почки собаки (MDCK), почки свиньи (СПЭВ) (Ночевный В.Т., Башашкина Н.А., 1996-1999).
В качестве доноров были взяты: 1-4 а- недельные крольчата, 1-2 - месячные щенки и котята, 3-9 - месячные эмбрионы коров, 6-10 - дневные перепелиные и 6-14 - дневные куриные эмбрионы.
Вирусы. Оценивалиа чувствительность тест-культур клеток к вирусам болезни Ауески (ВБА) штамма БУК-682, парагриппа -3 (ПГ-3) - штаммаа МВА 1/44, инфекционного ринотрахеита (ИРТ) крупного рогатого скота - штамма МВА 1/80, энтерита собака (ПВЭС) - штамма С и Д, болезни Марека, вируса герпеса индеек (ВГИ) - штамма ФС-126, инфекционной бурсальной болезни (ИББ)а птиц - штамма УБио-92Ф, чумы плотоядныха - штамма (ЭЛМ). Работы проводилась совместно с ВГНКИ.
Staphylococсus aureus (St. aureus). Штамм золотистого стафилококка А-676 использовали для выделения протеина А (Государственный НИИ стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А. Тарасевича).
Микрофильтрационные мембраны УВладипорФ, изготовленные из ацетатацеллюлозы и регенерированной целлюлозы - МФА-А с размером пор 0,2-0,5 мкм, МФА-МА (0,2-0,5 мкм) и МФЦа (0,15; 0,2; 0,45 мкм), а также капроновые мембраны УМифиФ производства АН Белорусской ССР (г. Минск) и г. Таллин (5,0; 3,0 и 0,2 мкм), мембраны фирм УMilliporФ и УPallФ (0,45 и 0,22 мкм и микропористые ядерные фильтры (от 0,03 до 8 мкм) использовали для очистки биологических жидкостей и растворов.
Ультрафильтрационные мембраны УАМ-50, 100, 150, 200, 300, 500 с диаметром пор - 0,005; 0,01; 0,015; 0,02; 0,03; 0,05 мкм (ацетат целлюлозы) и полупроницаемые мембраны в виде полых волокон типа ВПУ-5ПА, ВПУ-15ПА, ВПУ-50ПА, ВПУ-100ПА из полиамида с пределом задержания по белку 5, 15, 50, 100 кДа применяли для очистки и концентрирования биологически активных веществ.
Глубинные фильтры. При фильтровании биологических жидкостей применяли материалы на безасбестовой основе в виде пластин и картона: - фильтр-пластины - ФП (предварительной очистки), ФТ (тонкой очистки), ФC (стерилизующие), ФД (для удаления пирогенов) и картон КФМП и КФБЖ, разработанные по нашим техническим требованиям Марийским филиалом Волжского научно-исследовательского института целлюлозно-бумажной промышленности для медико-биологических целей (Канарский А.В., 2000).
Ионообменные мембраны. В работе применяли катионитовые мембраны МК-40 и анионитовые мембраны МА-41 из полиэтилена и ионитов.
Полимерные композиции. Сополимеры винилиденфторида и гексафторпропилена (фторкаучуки СКФ-26) и винилиденфторида и перфторметилвинилового эфира (СКФ-260) использовали для получения полимерных композиций и при иммобилизации трипсина; и кремнийорганические фторсилоксановые каучуки CКТФТ-100, CКТФТ-50.
2.1.2. Оборудование
Оборудование для культивирования клеток, вирусов, амикроорганизмов и ферментов. Для получения первичных культур клеток и выращивания вирусов использовали роллерные аппараты. Монослойное культивирование клеток осуществляли на многотрубчатом культиваторе V=0,006 м3 в отделе вирусологии и культур клеток. Культивирование клеток и вирусов в суспензии и на микроносителях осуществляли в спиннере объемом 0,001 м3 и ферментерах (биореакторах) объемом 0,005; 0,025; 0,1; 0,25 м3, разработанных ГНУ ВНИТИБП и Иркутским НИИХМ, выполненных из нержавеющей стали, оснащенных магнитным приводом / Гуславский А.И./, датчиками температуры, рН, еН, рО2а /Рубан Е.А., Раевский А.А., Абрамов А.Б., Потемкин А.А./.
В технологической обвязке использовали запорную,а запорно-регулирующую арматуру (малогабаритные вентили сильфонные проходные МВСП и угловые вентили МВСУ, разработанные ЦКБарматуростроения; электроисполнительные механизмы ЭИМ и запорные клапаны с электромагнитным приводом ПТ 26525, разработанные ВНИИэлектропривод и ЦКБарматуры по технико-экономическим требованиям ГНУ ВНИТИБП и изготовленные ПО ФПензтяжпромарматураУ). Для очистки, стерилизации и обезвреживания отработанных газов использовали фильтры предварительной и тонкой очистки с фильтроэлементами диаметром 46; 75; 90; 120 мм из фторопласта - 4 и титан (с диаметром пор 12-20 мкма и а2-6 мкм).
Глубинное культивирование штамма St. aureus, применяемого для выделения протеина А, проводили в лабораторном биореакторе АК-210 (объемом 0,01м3), с автоматическим контролем и регулированием температуры, скорости перемешивания, аэрации, рН.а
При получении трипсина использовали следующее оборудование: электромясорубку МП, эмалированные и нержавеющие реакторы (объемом 0,060-1,0м3), нутч-фильтры, центрифуги (осадительно-фильтрующие ОФСст 0,1 и 0,2 м3/час; суперцентрифугу ОТР-101К; шнековую ОГШ), саморазгружающиеся и камерные сепараторы. Сушку фермента проводили на распылительных установках РС - 1,2/09 БК РСЦ-10 и УМинорФ фирмы УНиро-АтомайзерФ и сублимационных - аТГ-15, ТГ-50.
|
Страницы: | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | |
Авторефераты по всем темам >>
Авторефераты по биологии