Geum.ru

Разработка лабораторных экспресс-методов и технологии производства иммунодиагностических препаратов для выявления возбудителей листериоза и кампилобактериоза 03. 00. 07 Микробиология 03. 00. 23 Биотехнология

Вид материалаАвтореферат

Содержание


Список основных работ, опубликованных
Подобный материал:
1   2   3




Полиакриламидный гель или органокремнеземная основа с магнитным материалом





Иммунофлуоресцентные (для РИФ, РНИФ)

Эритроцитарные (для РНГА, РТНГА, РНАг)


Лиофилизация

К4;К5,В




К4;К5,

ОБТК



Этикетировка, упаковка

Хранение готовой продукции






Рисунок 3. Алгоритм процесса производства и контроля различных иммунобиологических диагностических препаратов


Обозначения: К-К5 - критические контрольные точки; К- входной контроль;К1 – контроль чистоты культуры; К2 –контроль специфичной стерильности; К3 – количественный контроль; К4 – контроль специфичности; К5 – контроль специфической активности и чувствительности ; В – внутренний контроль; ОБТК – контроль, производимый отделом биологического и технологического контроля предприятия



Диагностическую ценность разработанных нами МИБП подтвердили многочисленные лабораторные и полевые испытания. Так, например, возбудители кампилобактериоза (К) и листериоза (Л) были выделены от 6,7% и 3,8% больных с диагнозом ОКИ соответственно. Наличие этих возбудителей определены в 14,1% (К) и 19,7 % (Л) пищевых продуктов; 56,7 % (К) и 6,7 % (Л) смывов с рук ветеринарных работников; 9 % (К) и 12,5% (Л) проб почвы; 25 % (К) и 24,3 % (Л) проб воды; 23,3 % (К) и 16,7 % (Л) у диких птиц; 1,3 % (К) и 15 % (Л) у грызунов. Результаты бактериологических и серологических исследований материала от людей, животных, домашних и диких птиц, грызунов, пищевых продуктов, воды водоемов, сточных вод, почвы и других объектов показали многообразие резервуаров и источников листериозной и кампилобактериозной инфекций и свидетельствуют о широком распространении Campylobfcter jejuni и L.mjnocytogenes и о совпадающих путях циркуляции и передачи этих возбудителей (рисунок 4).

Таким образом, нами создан алгоритм технологического процесса производства диагностических препаратов для индикации и идентификации возбудителей кампилобактериоза и листериоза, который в дальнейшем позволит унифицировать схему лабораторной диагностики этих инфекций.


ВЫВОДЫ

1. Разработаны транспортная, селективные и накопительные питательные среды для возбудителей кампилобактериоза и листериоза.

2. Определены методические приемы и их последовательность для извлечения специфических антигенов белковой природы из микробных масс возбудителей кампилобактериоза и листериоза для использования их при конструировании медицинских иммунобиологических препаратов.

3. Разработаны эффективные производственные схемы получения полигрупповых кампилобактриозных и листериозных иммунных сывороток с использованием иммунокорректора - тимогена и проведена сравнительная оценка методов выделения из них иммуноглобулинов для дальнейшего их применения в качестве биологического сырья при производстве иммубиологических препаратов.

4. Определены оптимальные параметры биотехнологии производства иммуноферментных и иммунофлуоресцентных кампилобактериозных и листериозных иммуноглобулиновых конъюгатов.

Дикие животные, грызуны, хищные, парнокопытные

Членистоногие

Дикие птицы

Дикие

животные

Выпас скота

Силос

Сельскохозяйственные животные

Фекалии

Сельскохозяйственные животные, домашние птицы, домашние животные

Овощи

Почва

Сточные воды

Овощехранилища

Вода питьевая

Стоячие водоемы

Реки

Море (океан)

Хладокомбинаты, холодильники

Речные и морские продукты


Сельскохозяйственные, пастбищные растения



Переработка продуктов животноводства и птицеводства






Продукты (молоко, сыр, масло, птица и т.д.)







Человек


Человек








Рисунок 4. Схема циркуляции возбудителей листериоза и кампилобактериоза во внешней среде и пути заражения человека и животных


5. Впервые сконструированы кампилобактериозные и листериозные магноиммуносорбентные тест – системы для иммуноферментного и количественного иммунофлуоресцентного анализов, позволяющие исследовать пробы из внешней среды с высокой степенью загрязнения неограниченного объема, низкой концентрацией патогена, с чувствительностью в 1000 и более раз превышающей традиционные, что значительно повышает достоверность как положительных, так и отрицательных результатов. Применение магнитоуправляемых твердофазных аффинных сорбентов позволило повысить выявляемость возбудителей кампилобактериоза и листериоза в объектах внешней среды на 9,4 – 11,8 %.

6. Определены оптимальные параметры лиофильного высушивания МИБП и биологического сырья для их производства при сокращении времени сублимации с 24 до 16 часов, позволяющие одномоментно лиофилизировать биополимеры с различными характеристиками при сохранении их исходных свойств.

7. Лабораторные, клинические и полевые испытания разработанных кампилобактериозных и листериозных МИБП показали их высокую специфичность, чувствительность, экспрессность, информативность, что в совокупности повышает эффективность лабораторной диагностики и свидетельствует о перспективности их использования в лабораториях практического здравоохранения.


^ СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ

ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

  1. Тюменцева, И.С. Способ получения диагностической сыворотки / И.С. Тюменцева, А.Е. Афанасьев, В.И. Ефременко, И.А. Базиков, Е.В.Алиева //Патент на изобретение №2135210. Зарегестрировано в Гос. Реестре изобретение РФ 27 августа 1999 г. Бюл. № 24 от 27.08.1999 .
  2. Алиева, Е.В. Проблемы листериоза на территории Ставропольского края / Е.В.Алиева, Т.И.Егшатян // Сборник научных трудов. Здоровье (проблемы теории и практики) УДК 61:157.7 (3) ISBN – 5 – 89822 –029 – 1. Ставрополь,2001, с. 472 – 473.
  3. Егшатян, Т.И. Циркуляция возбудителя листериоза в экологической системе /Т.И.Егшатян, Е.Н.Афанасьев, И.С.Тюменцева, Е.В.Алиева //Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт. – Ставрополь, 2001. – 7 с. Депонировано в ВИНИТИ 07.01. № 1668 – В2001.
  4. Егшатян, Т.И. Биотехнология приготовления эритроцитарного, антигенного, листериозного диагностикума / Т.И.Егшатян, Е.В.Жданова И.С.Тюменцева, Е.Н.Афанасьев, Е.В.Алиева // Проблемы биологии и химии на Северном Кавказе. Материалы научной конференции посвященной 70-летию биолого-химического факультета СГУ. Ставрополь, 2001. –С.39.

  5. Алиева, Е.В. Некоторые аспекты современного состояния эпидемиологии и лабораторной диагностики кампилобактериоза / Е.В.Алиева // Материалы научной конференции Ставропольской государственной медицинской академии. Ставрополь, 2002.- С.135-136

  6. Алиева, Е.В. Магнитоуправляемая тест-система при диагностике листериоза /Е.В.Алиева // Известия высших учебных заведений. Северо-Кавказский регион. Естественные науки. Приложение. - №2(2) – Ростов-н/Д, 2003. -С. 43-45.
  7. Алиева, Е.В. Опыт применения новых препаратов для экспресс-индикации возбудителей кишечных инфекций в условиях чрезвычайных ситуаций / Е.В.Алиева // ЖМЭИ. – 2003. – Приложение. – С.86-88.
  8. Алиева, Е.В. Технология получения Fab-фрагментов IgG из полигрупповых листериозных сывороток /Е.В.Алиева // Биоресурсы, биотехнологии, инновации Юга России: Материалы международной научно-практической конференции (22-24 октября,2003 г.) - Ставрополь-Пятигорск, 2003. – Ч.1. - С. 21-24.
  9. Алиева, Е.В. Основные причины возникновения острых кишечных инфекций на территории Ставропольского края /Е.В.Алиева, Е.В.Гурнович // 11 итоговая (межвузовская) конференция студентов и молодых ученых - Ставрополь, 2003, С. 278-279.
  10. Афанасьев, Е.Н. Листериоз и некоторые аспекты распространения и диагностики / Е.Н.Афанасьев, И.С.Тюменцева, Е.В.Алиева, Т.И. Егшатян //. Вестник ветеренарии. – Ставрополь, 2003. - №3. С. 4-7.
  11. Жарникова, И.В. Магноиммуносорбентные методы диагностики / И.В.Жарникова, Е.В.Алиева, М.Н.Касторная // Известия высших учебных заведений. Северо-Кавказский регион. Естественные науки. - Приложение. - №2(2). – Ростов-н/Д, 2003. С. 51 -53.
  12. Алиева, Е.В. Кампилобактериоз. Лабораторная диагностика (Обзор литературы) /Е.В.Алиева // Ставрополь, 2004. – Деп. в ВИНИТИ 15.07.2004, №1227. – В2004.
  13. Алиева, Е.В. Разработка кампилобактериозных аффинных магносорбентов для обследования объектов внешней среды /Е.В.Алиева // Вестник СГУ. Вып. 42.- Ставрополь, 2005.-С.163-166.
  14. Алиева Е.В. Совершенствование методов экспресс-диагностики кампилобактериоза /Е.В.Алиева // Материалы научно-практической конференции «Опыт работы учреждений Роспотребнадзора в Ставропольском крае по обеспечению санэпидблагополучия и защите прав потребителей» 9-я ежегодная Неделя медицины Ставрополья. Ставрополь, 2005. – С.180-183.
  15. Алиева, Е.В. Анализ заболеваемости и состояния лабораторной диагностики острых кишечных инфекций на территории Ставропольского края /Е.В.Алиева // Ставрополь, 2006. – 11 с. – Деп. в ВИНИТИ 21.08.2006, №1084. – В2006.
  16. Алиева, Е.В. Получение диагностикумов полигрупповых цветных листериозного и кампилобактериозного для реакции агглютинации / Е.В.Алиева, Е.Н.Афанасьев // Чрезвычайные ситуации международного значения в общественном здравоохранении и санитарная охрана территории государств-участников СНГ: Материалы седьмой межгосударственной научно-практической конференции государств-участников СНГ (3-5-октября 2006 г., Оболенск, Московская обл.) /Под ред. Академика РАМН Г.Г.Онищенко, члена корреспондента РАМН В.В.Кутырева, доктора мед. наук, профессора И.А.Дятлова. –Протвино: А – ПРИНТ ЗАО, 2006. – С.172-173.
  17. Алиева, Е.В. Получение диагностических поливалентных агглютинирующих сывороток / Е.В.Алиева, Е.Н.Афанасьев // Чрезвычайные ситуации международного значения в общественном здравоохранении и санитарная охрана территории государств-участников СНГ: Материалы седьмой межгосударственной научно-практической конференции государств-участников СНГ (3-5-октября 2006 г., Оболенск, Московская обл.) /Под ред. Академика РАМН Г.Г. Онищенко, члена корреспондента РАМН В.В. Кутырева, доктора мед.наук, профессора И.А.Дятлова. –Протвино: А – ПРИНТ ЗАО, 2006. – С.171-172
  18. Алиева, Е.В. Разработка биотехнологии приготовления эритроцитарных листериозного и кампилобактериозного диагностикумов /Е.В.Алиева, Е.Н.Афанасьев // Чрезвычайные ситуации международного значения в общественном здравоохранении и санитарная охрана территории государств-участников СНГ: Материалы седьмой межгосударственной научно-практической конференции государств-участников СНГ (3-5-октября 2006 г., Оболенск, Московская обл.) /Под ред. Академика РАМН Г.Г. Онищенко, члена корреспондента РАМН В.В.Кутырева, доктора мед.наук, профессора И.А.Дятлова. –Протвино: А – ПРИНТ ЗАО, 2006. – С.170-171.
  19. Алиева, Е.В. Экология возбудителей кампилобактериоза и листериоза / Е.В.Алиева, Е.Н.Афанасьев //Ставрополь, 2006. – 13 с. - Деп. в ВИНИТИ 09.11.2006. - № 1352 – В2006.
  20. Алиева, Е.В. Новое в диагностике кампилобактериоза и листериоза / Е.В.Алиева, Е.Н.Афанасьев, И.С.Тюменцева // Вестник Российской военно-медицинской академии. – СПб., 2006. – Приложение 1(15). – С.221.
  21. Алиева, Е.В. Получение высокоактивных антигенных фракций из бакмасс возбудителя кампилобактериоза /Е.В. Алиева, И.В.Жарникова, Е.В.Жданова, И.В.Юркина, С.А.Курчева //Естествознание и гуманизм. Сборник науч. работ – Т.3, №1. – Томск, 2006. – С.86-87.
  22. Алиева, Е.В. Современное состояние изученности и лабораторной диагностики возбудителя листериоза (обзор литературы) / Е.В.Алиева, И.В.Ковальчук //Ставрополь, 2006. – 24 с. Деп. в ВИНИТИ, 09.11.2006. - №1351-В2006.
  23. Алиева, Е.В. Унификация и разработка тест-систем диагностических для мониторинга возбудителей бактериальной (кампилобактериоз, туляремия, лептоспироз) и вирусной (лихорадка Западного Нила) природы /Е.В. Алиева, А.В.Таран, Е.Н. Афанасьева, С.А.Курчева, Т.В. Жарникова, И.С.Тюменцева, И.В.Самарина // Вестник Ставропольского государственного университета. – Вып. 47. – Ставрополь, 2006.- С. 292-298.
  24. Алиева, Е.В. Острые кишечные инфекции на территории Ставропольского края / Е.В.Алиева, И.В.Ковальчук // Чрезвычайные ситуации международного значения в общественном здравоохранении и санитарная охрана территории государств-участников СНГ: Материалы седьмой межгосударственной научно-практической конференции государств-участников СНГ (3-5-октября 2006 г., Оболенск, Московская обл.)/Под ред. Академика РАМН Г.Г.Онищенко, члена корреспондента РАМН В.В.Кутырева, доктора мед.наук, профессора И.А.Дятлова. –Протвино: А – ПРИНТ ЗАО, 2006. – С.12-13.
  25. Алиева, Е.В. Конструирование и характеристика листериозных и кампилобактериозных полигрупповых иммуноглобулиновых конъюгатов / Е.В. Алиева, И.С.Тюменцева // Ставрополь, 2006. – 28 с. – Деп. в ВИНИТИ 21.08.2006, №1085. – В2006.
  26. Алиева, Е.В. Разработка биотехнологии получения листериозных и кампилобактериозных антигенных диагностических иммунобиологических препаратов / Е.В. Алиева, И.С.Тюменцева // Ставрополь, 2006. – 26 с. – Деп. в ВИНИТИ 21.08.2006, №1083. – В2006.
  27. Алиева, Е.В. Разработка и получение и получение питательных сред для культивирования кампилобактерий и листерий / Е.В. Алиева, И.С.Тюменцева //Ставрополь, 2006. – 14 с. - Деп. в ВИНИТИ №09.11.2006. – №1353. – В.2006.
  28. Алиева, Е.В. Питательные среды для культивирования кампилобактерий и листерий / Е.В. Алиева, И.С.Тюменцева, Е.Н.Афанасьев // Вестник Российской военно-медицинской академии. – СПб., 2006. – Приложение 1(15). – С.482-483.
  29. Алиева, Е.В. Разработка схем иммунизации животных кампилобактериозными и листериозными антигенами / Е.В. Алиева, И.С.Тюменцева, Е.Н.Афанасьев //Вестник Российской военно-медицинской академии. – СПб., 2006. – Приложение 1(15). – С.192.
  30. Алиева, Е.В. Разработка и применение иммуноглобулинов диагностических флуоресцирующих для выявления возбудителей кампилобактериоза и листериоза /Е.В. Алиева, И.С.Тюменцева, И.В.Жарникова и др. //Медицинский вестник Северного Кавказа.- Ставрополь,2006. - №1. – С.12-14.
  31. Алиева, Е.В. Выделение кампилобактериозного водорастворимого антигенного комплекса белковой природы /Е.В. Алиева, И.С.Тюменцева, И.В.Жарникова // Холера и патогенные для человека вибрионы. Сборник материалов проблемной комиссии Научного совета по санитарно-эпидемиологической охране территории Российской Федерации.- Вып. № 19. - Ростов-на-Дону.-2006. - С.89-91.
  32. Афанасьев, Е.Н. Кампилобактериоз и листериоз. /Е.Н.Афанасьев, Е.В.Алиева, И.В.Ковальчук //Вестник Российской военно-медицинской академии. – СПб., 2006. – Приложение 1(15). – С.483-485.
  33. Ефременко, Д.В. Способ проведения иммуноферментного анализа (ИФА) / Д.В.Ефременко, И.В.Жарникова, А.А.Ефременко, И.В. Гаркуша, Е.В.Жданова, И.В.Юркина, Е.В.Алиева, Е.Е.Афанасьева. //Патент РФ на изобретение № 2290641, опубл. 27.12.2006. Бюл. №36. - 5 с.
  34. Жарникова, И.В. Разработка и применение иммуноглобулинов диагностических флуоресцирующих для выявления возбудителя кампилобактериоза, лептоспироза / И.В.Жарникова, И.С.Тюменцева, Е.В.Алиева, А.В.Таран, Е.В.Жданова, И.В.Юркина //Медицинский вестник Северного Кавказа. – Ставрополь, 2006. – С.12-14.
  35. Алиева, Е.В. Аффинные сорбенты для экспресс-диагностики различных заболеваний / Е.В.Алиева, И.С.Тюменцева, Е.Н.Афанасьев, Н.Е.Афанасьев, М.П.Лаврешин, Е.Е.Афанасьева, Т.Н.Орлова //Курский научно-практический вестник «Человек и его здоровье». – 2008. - №1. – С.5-9.
  36. Алиева, Е.В. Опыт получения иммунных сывороток для производства диагностических препаратов / Е.В.Алиева, И.С.Тюменцева, Е.Н.Афанасьев, М.П.Лаврешин, Н.Е.Афанасьев, Е.А.Горобец, А.А.Семирчева // Курский научно-практический вестник «Человек и его здоровье». – 2008. - №1. – С.10-13.
  37. Алиева, Е.В. Опыт применения твердофазных иммобилизованных систем с магнитными свойствами в экспрессных иммуноанализах некоторых заболеваний инфекционной и неинфекционной природы / Е.В.Алиева, И.С.Тюменцева, Е.Н.Афанасьева, М.П.Лаврешин, Е.Н.Афанасьев, Т.Н.Орлова // «Технологии живых систем». – 2008.- № 2-3.- том 5.-С.47-45.