Программа фундаментальных исследований Президиума ран

Вид материала

Программа

Содержание Разработка нового способа комплексной молекулярной диагностики субклинического гипотиреоза Оценка индивидуальной радиочувствительности онкологических больных на основе морфометрического мониторинга

Подобный материал:

• Программа фундаментальных исследований президиума ран «Биоразнообразие» 2005-2008,, 173.94kb.
• Распоряжение Президиума ран от 23 сентября 2008 г. №10104-653 "Об утверждении Порядка, 422.29kb.
• Программа отчетной конференции по программе фундаментальных исследований Президиума, 123.52kb.
• Программа Ассоциация этнографов и антропологов России Институт этнологии и антропологии, 1172.05kb.
• Программа ростов-на-Дону 2007 Конференция осуществляется при финансовой поддержке Российского, 406.02kb.
• Российская академия наук Программа фундаментальных исследований Президиума ран фундаментальные, 9808.28kb.
• Российская академия наук Программа фундаментальных исследований Президиума ран фундаментальные, 3754.56kb.
• П. П. Ширшова ран мгту им. Н. Э. Баумана XII международная научно-техническая конференция, 200.72kb.
• Проекты программы межрегиональных и межведомственных фундаментальных исследований (совместные, 423.42kb.
• Тезисы докладов, 3726.96kb.

^ РАЗРАБОТКА НОВОГО СПОСОБА КОМПЛЕКСНОЙ МОЛЕКУЛЯРНОЙ ДИАГНОСТИКИ СУБКЛИНИЧЕСКОГО ГИПОТИРЕОЗА

Д.Г. Матишов, Е.Ф. Шин, А.В. Ларичкин

Южный научный центр РАН, Ростов-на-Дону

В настоящее время актуальным является сравнительный анализ специфичности и чувствительности результатов стандартных клинических методов исследования и современных биоаналитических методов диагностики субклинического гипотиреоза (СГ).

Поэтому целью настоящей работы явился масс-спектральный анализ протеомного профиля плазмы крови для выявления основных белков-биомаркеров прогрессирования гипотиреоза на различных стадиях его развития, а также белков, участвующих во всасывании, распределении и метаболизме левотироксина у пациентов с СГ.

В исследование включено 26 пациентов с СГ (I исследуемая группа, средний возраст 43±3,2 года, соотношение мужчин и женщин 1:2), принимавшие левотироксин в дозе 50 мкг/сутки; 29 пациентов с СГ (II исследуемая группа, средний возраст 44±2,6 года, соотношение мужчин и женщин 1:2), принимавшие левотироксин в дозе 50 мкг/сутки. Контрольную группу составили 15 условно здоровых лиц. Оценку прогрессирования гипотиреоза и эффективности лечения в I группе пациентов проводили стандартным методом диагностики (анализ уровней тиреотропного гормона (ТТГ), тироксина (Т₄), трийодтиронина (Т₃) (ИФА), иммунологических параметров – CD3+; CD4+; CD8+; CD16+; CD25+; CD72+; CD95+ (проточная цитометрия), IL-1, TNF-α (моноклональные антитела), Ig G, M, A (метод радиальной иммунодифффузии); во II группе - стандартным диагностическим и новым биомолекулярным методом (протеомный анализ плазмы крови - с помощью двумерного электрофореза в полиакриламидном геле (2D-PAGE, BioRad), трипсинолиза (Promega) с поcледующим масс-спектрометрическим детектированием (MALDI-TOF-MS, Bruker), идентификацией в поисковой базе данных (Mascot) и измерением относительной плотности белков (PDQuest, Bio-Rad)). Качество жизни оценивалось по шкале Zulewski-Bulewich (BI). Длительность исследования составила 3 месяца.

Обнаружен достоверный регресс клинической симптоматики в обеих группах исследования. В I группе пациентов обнаружено достоверным снижением ТТГ(p<0,005) и повышением Т4 (p<0,001). Средние уровни гормональных показателей во II группе пациентов не отличались от таковых здоровых лиц. В I группе пациентов средние значения уровней CD3+ (p<0,05); CD4+ (p<0,05); CD8+ (p<0,001); CD16+ (p<0,05); CD25+ (p<0,001), Ig A (p<0,05) статистически значимо увеличились, CD72+ (p<0,05); CD95+ (p<0,05), IL-1(p<0,001), TNF-α (p<0,001), Ig G (p<0,05), Ig M (p<0,05) – уменьшились. На фоне приема левотироксина во II группе пациентов зарегистрировано достоверное повышение интенсивности патогенетических белков: Na+/I- - симпортера (p<0,001); белка, связывающий тиреоидный гормон внутри клетки (p<0,001); тиреопероксидазы (ТПО) (p<0,001), ферментов дейодиназы DIO I (p<0,001), II (p<0,05), III (p<0,05) типа, рецепторов к тиреоидным гормонам типа β (p<0,001) и α (p<0,001), УДФ-глюкуронозилтрансферазы (p<0,05) при одновременном подавлении экспрессии рецепторов к ТТГ (рТТГ) (p<0,001), тироксин-связывающего глобулина (ТСГ) (p<0,001). Данные белки играют важную роль на различных уровнях патологического пути передачи сигнала в тиреоцитах, транспорте и метаболизме тиреоидных гормонов и реализации эффекта гормонов на уровне органов-мишеней.

Следовательно, обнаруженное увеличение интенсивности таких показателей протеомного профиля плазмы крови, как Na+/I--симпортера, белка, связывающий тиреоидный гормон внутри клетки, ТПО, DIO I, II, III, рецептора к тиреоидному гормону подтип β1 и α, УДФ-глюкуронозилтрансферазы и подавлении ТСГ и экспрессии рецепторов к ТТГ на фоне приема левотироксина, вероятно, свидетельствует об маркерной значимости биомолекулярных эффектов трийиодтиронина в органах-мишенях.

^ ОЦЕНКА ИНДИВИДУАЛЬНОЙ РАДИОЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ОНКОЛОГИЧЕСКИХ БОЛЬНЫХ НА ОСНОВЕ МОРФОМЕТРИЧЕСКОГО МОНИТОРИНГА

Г.М. Попова, Ю.О. Дружинин, В.Н. Степанов, И.Ф. Дятчина¹⁾

Альбицкий И.А., А.Н. Богомазова, Е.И. Новикова, Н.Н. Новицкая, Г.П. Снигирёва²⁾

¹⁾Институт проблем управления им. В.А. Трапезников РАН, Москва.

²⁾ФГУ «Российский научный центр рентгенорадиологии Росздрава», Москва.

Одним из чувствительных методов, которые могут применяться для оценки индивидуальной радиочувствительности онкологических больных, проходящих лучевую терапию, является метод «комет». В рамках Программы РАН «Фундаментальные науки медицине» на 2006 г. для определения чувствительности данного метода, была разработана программа-анализатор кометообразных структур, позволяющая наглядно и эффективно определять и выделять неповрежденные и поврежденные ядра, а также оценивать морфометрические параметры изображений «комет»

В процессе работы программа – анализатор «комет» подверглась модернизации, повысившей скорость и удобство проведения анализа. Была добавлена программа поддержки камер стандарта PVCAM для прямого захвата изображения и предусмотрена возможность изменения масштаба просмотра изображения комет.

На основе анализатора изображений микрообъектов был организован морфометрический мониторинг препаратов комет, который позволил оценить состояние репарационного аппарата клеток крови онкологических больных перед прохождением лучевой терапии. Были обследованы 31 пациент с диагнозом «рак предстательной железы». На больших выборках «комет» с помощью морфометрических параметров их изображений удалось установить связь между эффективностью репарации радиационно-индуцированных повреждений ДНК и наличием или отсутствием поздних лучевых повреждений. Проведенные исследования показали, что существует достоверная связь между клиническими осложнениями (поздний лучевой ректит) и показателями эффективности репарации в клетках крови. Показано, что наибольшую прогностическую значимость имеет показатель, характеризующий долю отрепарированных повреждений ДНК спустя 60 минут после облучения образцов крови in vitro.

В процессе исследований было выявлено, что на результаты анализа методом «комет» оказывают существенное влияние ряд факторов (условия проведения электрофореза и предподготовки препаратов), которые необходимо учитывать для повышения надежности, достоверности и воспроизводимости полученных результатов. С этой целью в рамках настоящего проекта были выполнены экспериментальные исследования по оценке влияния условий проведения анализа методом «комет» на воспроизводимость его результатов.

Для верификации полученных с помощью метода «комет» результатов, а также для выбора наиболее чувствительного теста индивидуальной радиочувствительности, основанном на изучении репарационной способности клеток, начаты исследования с помощью иммуногистохимического метода с использованием антител к фосфорилированному гистону -H2AX и белку Rad50.

В докладе будут представлены результаты проведенных экспериментальных исследований.