Bulletin of siberian medicine
| Вид материала | Тезисы |
- Divinity School Bulletin 2011-2012, Norris,, 56.2kb.
- Програма конференції «Актуальні питання клінічної медицини» програма конференції «Мікроелементози, 8571.39kb.
- Proof for the 2012-2013 Duke University Bulletin of Undergraduate Instruction,, 630.47kb.
- Le Bulletin du, 144.67kb.
- Novosibirsk Siberian University of Consumer’s Cooperation Appendix to the Diploma No., 62.78kb.
- «адаптация к изменениям энергетического метаболизма при старении как стратегия долгожительства», 119.04kb.
- Кто не имеет возможность сделать аборт, если его доступность ограничивается двенадцатью, 17.02kb.
- «Regenerative Medicine: New Approaches to Healthcare», 124.43kb.
- Interdisciplinary Congress «Neuroscience for Medicine and Psychology», 85.02kb.
- St Siberian International Psychoanalytical Conference, 385.9kb.
Анфиногенова Я.Д., Килин А.А., Бородин Ю.Л., Гусакова С.В., Попов А.Г., Медведев М.А.
Сибирский государственный медицинский университет
(г. Томск)
Методом двойного «сахарозного моста» изучался вклад Na+K+2Cl¯-котранспорта и хлорной проводимости мембраны в действие гистамина и мезатона на вызванные электрическим стимулом потенциалы действия (ПД) и сокращения (С) гладкомышечных клеток мочеточника (ГМК) морской свинки. Если, гистамин и мезатон (10 мкМ) увеличивали длительность ПД и амплитуду С ГМК до 161±25 и 204±23 %, 151±19 и 188±28 % (n=16; р<0,01) соответственно, то на фоне ингибитора Na+K+2Cl¯-котранспорта буметанида (10 мкМ) их активирующий С эффект снижался до величин 135±26 и 120±12 % (n=11; р<0,01). На фоне мезатона и гистамина возрастание концентрации буметанида от 10 до 100 мкМ усиливало угнетающий С ГМК эффект с 89±8 до 67±12 % и с 64±18 до 44±10 % (n=9; р<0,01). В присутствии мезатона угнетающий С ГМК эффект блокаторов Сa2+-активируемых и объем–зависимых хлорных каналов – нифлумовой кислоты (НК) и SITS (50мкМ) – достоверно усиливался: с 50,8±15 и 84,5±5,2 % до 25±10,3 и 50,8±15 % (n=11; р<0,01) соответственно. В гиперосмотической среде (объем-зависимая активация Na+K+2Cl¯-котранспорта) блокаторы хлорных токов проявляли свою угнетающую активность уже в концентрации 10 мкМ, а при 50 мкМ НК (полностью) и SITS (значительно) угнетали С и ПД ГМК. Наоборот, применение 10 мкМ Б отменяло угнетающее влияние даже 200 мкМ НК на ПД и С ГМК. По-видимому, в активирующем влиянии гистамина и мезатона на ПД и С ГМК мочеточника морской свинки участвует Na+K+2Cl¯-котранспорт, модулирующий Сa2+-зависимую хлорную проводимость мембраны.
Поиск потенциальных сайтов фосфорилирования и гликозилирования
РНК-полимеразы III человека с помощью компьютерных программ
Никитина Т.В., Тищенко Л.И.
Санкт-Петербургский государственный университет
(г. Санкт-Петербург)
РНК-полимераза III считывает гены стабильных нетранслируемых клеточных РНК, таких как 5S рРНК, тРНК, U6 мяРНК, 7SK РНК, 7SL РНК, Alu-РНК и других (гены класса III). Эти РНК играют значительную роль в таких важных процессах в клетке, как рост, пролиферация и дифференцировка, и поэтому транскрипция, осуществляемая РНК-полимеразой III, находится в клетке под строгим контролем множества регуляторных путей. Имеющиеся данные позволяют предположить, что в этой регуляции участвуют протеинкиназы и протеинфосфатазы. Однако до сих пор отсутствуют прямые данные о модификациях субъединиц РНК-полимеразы III человека. Полный субъединичный состав этой полимеразы из клеток человека и первичная структура всех ее 17 субъединиц были выяснены лишь недавно. Появление этих данных позволило поставить задачу об исследовании принципиальной возможности модификации субъединиц РНК-полимеразы III человека. С помощью компьютерных программ, осуществляющих поиск потенциальных сайтов посттрансляционных модификаций белков (MotifScan, NetPhos 2.0 и YinOYan 1.2), в составе всех 17 субъединиц РНК-полимеразы III человека нами идентифицированы возможные сайты фосфорилирования и в составе 13 субъединиц – сайты реципрокного фосфорилирования и гликозилирования (сайты «инь-янь»). Из идентифицированных сайтов консервативными для человека (S. cerevisiae и Sch. pombe) являются 17 сайтов фосфорилирования в составе 7 субъединиц, из них 2 сайта в составе двух субъединиц являются также и сайтами «инь-янь».
Работа поддержана грантом «Университеты России» ур.07.01.334.
сократительная активность
гладких мышц легочной артерии
и активность ферментов крови
при сенсибилизации морских свинок овальбумином
Носарев А.В., Зайцева Т.Н., Давлетьярова К.В.,
Капилевич Л.В.
Сибирский государственный медицинский университет
(г. Томск)
Изучались механизмы регуляции механического напряжения (МН) легочной артерии и активность ферментов эритроцитов морских свинок в норме и при сенсибилизировании овальбумином. При исследовании влияния гистамина на МН сегментов легочной артерии амплитуда сократительных реакций деэндотелизированных сегментов была выше амплитуды сегментов с интактным эндотелием. Амплитуда сокращения деэндотелизированных сегментов в группе контроля была ниже, чем у сенсибилизированных животных. Наличие интактного эндотелия сегментов обеспечивало более высокую амплитуду сокращения в экспериментальной группе по сравнению с контролем. Изучение влияния фенилэфрина на МН показало дозозависимое сокращение. Максимальная амплитуда сокращения деэндотелизированных сегментов составила 246,4 %, сегментов с интактным эндотелием – 71,5 %. В экспериментальной группе амплитуда сокращения была ниже по сравнению с контролем. При использовании карбахолина и пилокарпина в обеих группах были отмечены сократительные реакции деэндотелизированных сегментов, амплитуда которых была незначительной. При воздействии холиномиметиков на сегменты с интактным эндотелием ожидаемая эндотелийзависимая релаксация гладких мышц нами не наблюдалась. Проведение биохимического исследования эритроцитов крови сенсибилизированных животных показало снижение активности глутатион-S-трансферазы, глутатион-редуктазы и каталазы на 36, 34 и 52 % соответственно.
ОСОБЕННОСТИ ГАМК-ЕРГИЧЕСКОГО ВОЗДЕЙСТВИЯ НА МЕМБРАННЫЙ ПОТЕНЦИАЛ ПОКОЯ
В СОМАТИЧЕСКИХ МЫШЕЧНЫХ КЛЕТКАХ ДОЖДЕВОГО ЧЕРВЯ
Нуруллин Л.Ф., Сaбирова А.Р., Волков Е.М.
Казанский государственный медицинский университет
(г. Казань)
Ранее было установлено, что в формировании мембранного потенциала покоя (МПП) мышечных клеток дождевого червя Lumbricus terrestris существенную роль играют амперогенные ионные насосы, в том числе вторично-активный котранспорт Cl-. Также установлено, что гиперполяризующий мембрану эффект ГАМК реализуется через активацию электрогенных ионных насосов при участии Cl-. Кривая зависимости величины МПП от внешнего K+ приобретает «классические» очертания только в безнатриевой среде или в присутствии в растворе уабаина. В растворах с 2-ной и 3-ной концентрацией внешнего K+ ГАМК в меньшей, а баклофен в большей степени увеличивают МПП мышечных клеток дождевого червя. Иными словами, и в условиях «возбужденной» ионной помпы ГАМКергическая активация сохраняет способность вызывать гиперполяризующий мембрану эффект, хотя это влияние снижается по сравнению с действием ГАМК и баклофена на МПП в растворах нормального ионного состава. Удаление из раствора Cl- устраняет эту способность. Присутствие уабаина – ингибитора Na+K+-АТФазы также элиминирует влияние ГАМК на МПП. Можно думать, что хотя котранспорт Cl- тесно связан и зависит от работы Na+K+-помпы, тем не менее, последний, по-видимому, обладает некоторой автономией, по крайней мере, в части собственных специфических механизмов его активации. Одним из таких входов может служить ГАМКергический механизм.
Работа поддержана грантом РФФИ 03-04-48303.
Механизмы электромеханического
и фармакомеханического сопряжения
в гладкомышечных клетках воротной вены морских свинок
Патюков А.Г., Лукьяненко Д.Ф., Сукач Л.И., Аверин Э.М.
Омская государственная медицинская академия
(г. Омск)
В работе излагаются материалы о влиянии аденозинтрифосфата, брадикинина, гистамина, серотонина, L-аргинина, нитропруссида натрия, системы гуанилатциклазацГМФ на гладкомышечные клетки (ГМК) воротной вены морской свинки. Исследования выполнены методом двойного сахарозного мостика. Установлено, что аденозинтрифосфат, брадикинин, гистамин, серотонин вызывают дозозависимые изменения электрической и сократительной активности ГМК, выражающиеся деполяризацией мембраны, увеличением амплитуды медленной волны, её продолжительности, повышением частоты генерации спайков, силы сократительных ответов. Причём гистамин оказывает на все показатели более выраженное действие. На фоне блокады кальциевых каналов никелем они не оказывали возбуждающего действия на электрическую и сократительную активность ГМК воротной вены. Показано, что L-аргинин и нитропруссид натрия оказывают тормозящее влияние на электрическую и сократительную активность ГМК воротной вены. При этом тормозящий эффект нитропруссида развивается быстро и продолжается в течение значительного времени. Для выяснения механизма действия L-аргинина и нитропруссида натрия на ГМК изучалось их влияние на фоне блокады цГМФ метиленовым синим. В этих условиях цГМФ ингибирует действие L-аргинина и нитропруссида натрия, что проявляется угнетением спайковой активности и сокращений и связано с активацией цГМФ-зависимой калиевой проводимости мембраны. Однако, нельзя исключить воздействия цГМФ на кальциевую проницаемость. Таким образом, в механизме действия аденозинтрифосфата, брадикинина, гистамина, серотонина на ГМК воротной вены большая роль принадлежит кальциевым каналам. Учитывая определённую синергичность действия донаторов оксида азота и метиленового синего в высоких концентрациях, установлена активация гуанилатциклазы, что, по-видимому, не единственный механизм их тормозящего влияния на ГМК.
ИССЛЕДОВАНИЕ РОЛИ Са 2+ – АКТИВИРУЕМЫХ КАЛИЕВЫХ КАНАЛОВ В ИЗМЕНЕНИИ ОБЪЕМА ЭРИТРОЦИТОВ ЧЕЛОВЕКА
Петрова И.В., Кремено С.В., Ситожевский А.В.,
Мормышева В.А.
Сибирский государственный медицинский университет
(г. Томск), НИИ кардиологии ТНЦ СО РАМН (г. Томск)
Методом измерения светорассеяния (длина волны 800 нм) изучались изменения объема эритроцитов в условиях варьирования осмолярности среды инкубации клеток при активации Са2+-активируемых калиевых каналов – К+(Са2+)-каналов. В работе использовалась кровь практически здоровых доноров. Снижение осмолярности среды инкубации клеток до 220 мосм осуществлялось за счет уменьшения концентрации NaCl, повышение осмолярности до 420 и 520 мосм достигалось добавлением соответствующих концентраций сахарозы к изоосмотическому раствору (320 мосм). Инкубация клеток в гипоосмотической среде приводила к набуханию эритроцитов. Повышение осмолярности среды инкубации сопровождалось сжатием эритроцитов. Стимуляция К+(Са2+)-каналов мембраны эритроцитов проводилась либо добавлением кальциевого ионофора А23187, либо внесением искусственной электронно-донорной системы аскорбат-феназинметосульфат. В обоих случаях происходило уменьшение объема клеток, что подтверждалось увеличением светорассеяния суспензии. Наиболее вероятной причиной сжатия клеток является дегидратация эритроцитов вследствие выхода ионов калия. Добавление к суспензии эритроцитов блокатора К+(Са2+)-каналов клотримазола подавляло А23187 индуцированное снижение объема клеток, что указывает на участие К+(Са2+)-каналов в изменении объема эритроцитов. Для выяснения роли в регуляции К+(Са2+)-каналов основного белка цитоскелета эритроцитов спектрина проводили необратимую тепловую денатурацию белка путем инкубации клеток при 50ºС в течение 10 минут. Как в изоосмотических, так и в гипо- и гиперосмотических условиях изменение объёма клеток, подвергнутых тепловой обработке, при добавлении Са 2+-ионофора было более выражено по сравнению с интактными клетками. Эти данные, по-видимому, свидетельствуют об участии спектрина в процессах активной стабилизации объема эритроцитов.
ВЫЯВЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ МАТРИКСНЫХ МЕТАЛЛОПРОТЕАЗ В ПЕРВИЧНОЙ КУЛЬТУРЕ ЭМБРИОНАЛЬНЫХ ФИБРОБЛАСТОВ
Потеряева О.Н., Короленко Т.А., Жанаева С.Я.,
Ярыгина Е.С., Шилов А.Г.
ГУ НИИ физиологии СО РАМН,
Институт цитологии и генетики СО РАН (г. Новосибирск)
Матриксные металлопротеиназы (ММП) относятся к семейству цинковых металлопротеиназ, функция которых связана с обменом соединительно-тканного матрикса. ММП играют решающую роль при развитии таких физиологических процессов, как морфогенез, резорбция и ремоделирование тканей, ангиогенез, миграция, адгезия, а также при патологических состояниях (ревматоидный артрит, гломерулонефрит, цирроз печени и др.). Цель исследования: изучить активность ММП в первичной культуре эмбриональных фибробластов мыши и человека. В работе использовали флуоресцентный субстрат МСА-Pro-Leu-Gly-DPA-Ala-Arg-NH2 (ICN, USA) для определения общей активности всех присутствующих матриксных металлопротеаз. Активность ММП выражали в мкмоль МСА/л/ час на количество клеток (1х106). Для приготовления клеточных лизатов к клеткам добавляли 0,2 % тритон Х-100. Выявлена линейная зависимость активности ММП в интервале клеток от 2·106 до 4·104 (разведение в 50 раз). В эмбриональных фибробластах мыши и человека обнаружены сходные значения активности ММП, причем в последних она в 1,3 раза выше (или на 25 %) и составила 313,0±65,2 мкмоль МСА/л/час на 1·106 клеток. Изучение активности ММП в фибробластах позволит исследовать их участие во многих физиологических и патологических процессах соединительной ткани. Мы использовали этот показатель как маркер при генерализации инвазии и метастазирования опухолей у
мышей.
Проникновение и распределение Липопротеинов высокой плотности
в печени при ожирении у крыс
Потеряева О.Н., Курганова И.В., Максимов В.Ф.
ГУ НИИ физиологии СО РАМН (г. Новосибирск)
Прослежены захват и распределение ЛПВП в непаренхимных клетках печени у крыс с нормальной массой тела и в модели алиментарного ожирения. Животным под нембуталовым наркозом в портальную вену вводили меченные коллоидным золотом ЛПВП в физиологической концентрации. Через 10, 30 и 60 минут забирали образцы печени для исследования под электронным микроскопом и стереоморфометрии. У крыс с избыточной массой тела количество и размеры клеток Купфера значительно меньше, чем у контрольных животных. Контуры клеток сглажены, количество лизосом и митохондрий уменьшено, но в 6 раз больше жировых включений. У контрольных животных за час эксперимента в макрофагах накапливалось в среднем 134 гранулы меченых ЛПВП на 0,01 мкм2 среза, что в 6 раз больше, чем в эндотелиоцитах. Максимальная скорость накопление метки наблюдалась в первые 10 минут, причем 50 % ее располагалось на поверхности в опушенных инвагинациях клеточной оболочки, остальные – в эндосомах и лизосомах. К 30 минуте общее количество метки в макрофагах снижалось в 4 раза, происходило ее перераспределение в лизосомы, где к концу опыта было сосредоточено 95 % метки. У крыс с ожирением в тех же условиях вклад эндотелиоцитов в транспорт ЛПВП был минимальным. Плотность метки в макрофагах сохранялась на высоком уровне и превышала контрольные показатели на 30-й минуте в три, а на 60-й минуте – в 4 раза. При этом 90 % ее локализовалось в лизосомах в виде крупных скоплений по 60-150 гранул. Таким образом, при ожирении изменяется механизм поглощения ЛПВП (с рецептор-опосредованного на простой эндоцитоз), задерживается их трансформация и замедляется выведение из макрофагов.
ВЛИЯНИЕ ДИАЗЕПАМА НА АКТИВНОСТЬ
ФМСФ-ИНГИБИРУЕМОЙ КАРБОКСИПЕПТИДАЗЫ
В ОТДЕЛАХ МОЗГА КРЫС
Правосудова Н.А., Генгин М.Т., Сметанин В.А.
Пензенский государственный педагогический университет
им. В.Г. Белинского (г. Пенза)
Диазепам как экзогенный лиганд бензодиазепиновых рецепторов изменяет уровень многих нейропептидов, в частности, кортикотропин-рилизинг гормона, АКТГ, энкефалинов, а также эндогенных лигандов бензодиазепиновых рецепторов – эндозепинов. Однако молекулярные механизмы этого явления не изучены. Регуляторные пептиды синтезируются в виде высокомолекулярных неактивных предшественников, которые активируются путем протеолитического процессинга. В конечной стадии процессинга участвуют ферменты, отщепляющие остатки аргинина и лизина с С-конца пропептидов. Нами открыта новая фенилметилсульфонилфторид-ингибируемая карбоксипептидаза (ФМСФ-КП), специфичность действия которой позволяет предположить ее участие в процессинге нейропептидов. Цель нашей работы – исследование влияния однократного воздействия диазепама на активность ФМСФ-КП в отделах мозга. Установлено, что через 24 часа после введения активность фермента достоверно снизилась по сравнению с соответствующими значениями контрольной группы в гипоталамусе, мозжечке, стриатуме и больших полушариях. В четверохолмии и гиппокампе активность была ниже, чем у контрольных животных, через 4 и 24 часа после воздействия. Таким образом, однократное введение диазепама вызвало существенное снижение активности ФМСФ-КП в отделах мозга, которое сохранялось на протяжении 24 часов. Отсюда можно предположить, что диазепам понижает уровень ряда регуляторных пептидов через изменение активности фермента их обмена.
ВЛИЯНИЕ ЖИРНЫХ КИСЛОТ НА К+-КАНАЛЫ
В ПЕРИТОНЕАЛЬНЫХ МАКРОФАГАХ КРЫСЫ
Рощина Н.Г., Крутецкая З.И., Лебедев О.Е.
Санкт-Петербургский государственный университет
(г. Санкт-Петербург)
С помощью метода пэтч-клэмп в конфигурации «whole-cell» исследована роль свободных жирных кислот в регуляции К+-каналов выходящего выпрямления в перитонеальных макрофагах крысы. Показано, что внеклеточные цис-полиненасыщенные (арахидоновая, С20:4; докозатриеновая, С22:3; линолевая, С18:2), цис-мононенасыщенные (олеиновая, С18:1) и насыщенные (миристиновая, С14:0) жирные кислоты в концентрации 10-50 мкМ вызывают дозо-зависимое уменьшение пиковой амплитуды и ускорение кинетики активации и инактивации К+-токов в широкой области мембранных потенциалов. Предварительная инкубация макрофагов с ингибитором циклооксигеназ индометацином (10 мкМ) или ингибитором липоксигеназ нордигидрогуаретиковой кислотой (10 мкМ) не предотвращает эффект арахидоновой и докозатриеновой кислот. Выявлена корреляция между числом двойных связей в молекуле кислоты (степенью ненасыщенности) и ее эффективностью. Наиболее эффективными модуляторами активности К+-каналов оказались полиненасыщенные жирные кислоты: арахидоновая, докозатриеновая, линолевая. Эффект жирных кислот обращается при добавлении в наружную среду 0,1 % альбумина (который имеет связывающие участки для жирных кислот). Полученные данные свидетельствуют о прямом модулирующем действии арахидоновой и других жирных кислот на К+-каналы в мембране перитонеальных макрофагов крысы.
Работа поддержана грантом РФФИ № 03-04-49091 и грантом Минобразования «Развитие научного потенциала высшей школы» № 4681 (2005 г.).
ОБРАЗОВАНИЕ КОМПЛЕКСА МЕМБРАННЫХ БЕЛКОВ В МИТОХОНДРИЯХ КАК ОДИН ИЗ ПУСКОВЫХ МЕХАНИЗМОВ НАРУШЕНИЯ ФУНКЦИЙ
ЖИЗНЕННО-ВАЖНЫХ ОРГАНОВ ПРИ СТАРЕНИИ
Самарцев В.Н., Кожина О.В., Каратецкова М.П.,
Полищук Л.С.
Марийский государственный университет
(г. Йошкар-Ола)
Согласно одной из теорий старения, ведущую роль в развитии с возрастом нарушений функций жизненноважных органов играют митохондрии, как один из основных источников активных форм кислорода (АФК) в клетках. Проведенные нами исследования показали, что в митохондриях печени старых животных (крысы-самцы в возрасте 24–28 месяцев) в процессе разобщения окислительного фосфорилирования жирными кислотами наблюдается образование комплекса при участии белков-переносчиков метаболитов внутренней мембраны: ADP/ATP- и аспартат/глутаматного антипортеров. Образованию комплекса препятствуют антиоксиданты: ионол и тиомочевина, что свидетельствует об участии АФК в этом процессе. Полученные результаты рассматриваются как свидетельство о том, что одним из механизмов нарушений функций жизненноважных органов при старении является, вызванное АФК, образование комплекса мембранных белков в митохондриях, что приводит к формированию неспецифической проницаемости внутренней мембраны и, в свою очередь, вызывает гибель клеток по типу апоптоза или некроза.
Работа выполнена при финансовой поддержке научной программы «Университеты России» (УР.07.01.110).
ДИНАМИКА ПРОЦЕССОВ ПЕРЕКИСНОГО ОКИСЛЕНИЯ ЛИПИДОВ (ПОЛ)
ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ АДЕНОМАХ ЛЕГКИХ ПОД ВЛИЯНИЕМ МЕКСИДОЛА
Сипров А.В., Плотникова Н.А., Шулигина И.В.,
Кузнецова В.А.
Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарева
(г. Саранск)
Цель работы – оценка изменений процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) в сыворотке крови при экспериментальных аденомах легких на фоне введения мексидола. Материалы и методы: опыты проведены на 90 нелинейных белых мышах массой 18-20 г. Уретан вводился однократно внутрибрюшинно в дозе 1,0 г/кг. Мексидол – в дозах 10,0; 1,0 и 0,1 мг/кг ежедневно внутримышечно в течение 4 месяцев со дня введения уретана в соответствующих сериях. В качестве препарата сравнения использовали а-токоферол в дозе 50 мг/кг. Как показали наши исследования, введение уретана сопровождалось достоверным ростом уровня МДА в сыворотке крови с 1,44±0,02 (у интактных мышей) до 4,7±0,03 мкмоль/л. Активность каталазы не отличалась от уровня здоровых животных, но тенденция к ее повышению отмечалась. Уровень МДА в сыворотке крови достоверно снизился до 2,95±0,02, 2,1±0,01 и 1,32±0,04 мкмоль/л при введении мексидола в дозах 10,0, 1,0 и 0,1 мг/кг соответственно. Активность каталазы при этом сохранялась на уровне показателя здоровых животных и была достоверно ниже такового в контрольной серии; α-токоферол в меньшей степени снижал концентрацию МДА – до 3,15±0,15 мкмоль/л. Положительная динамика показателей ПОЛ коррелирует с уменьшением среднего количества аденом в легких: если в контроле число их составляло 22,0±3,2, то на фоне мексидола в дозах 10,0; 1,0 и 0,1 мг/кг – 11,5=Ь2,75; 10,68±1,4 и 8,7±1,57 соответственно. Таким образом, под влиянием мексидола наблюдается достоверная положительная динамика ПОЛ в сыворотке крови в условиях экспериментального опухолевого роста.