Влияние стимулятора роста нового поколения полизон на откорм свиней и выращивание цыплят-бройлеров 06. 02. 08-Кормопроизводство, кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов
| Вид материала | Автореферат |
- Влияние различных способов повышения питательности зерна пшеницы и продуктов его переработки, 450.28kb.
- Программа-минимум кандидатского экзамена по специальности 06. 02. 02 «Кормление сельскохозяйственных, 80.45kb.
- Программа-минимум кандидатского экзамена по специальности 06. 02. 02 «Кормление сельскохозяйственных, 75.09kb.
- Программа-минимум кандидатского экзамена по специальности [Кормление сельскохозяйственных, 73.76kb.
- Темы рефератов для поступления в аспирантуру по научной специальности 06. 02. 08 кормопроизводство,, 23.77kb.
- Программа вступительных экзаменов в аспирантуру по специальности 06. 02. 08 Кормопроизводство,, 163.01kb.
- Эффективность использования биологически активных веществ и полнорационных комбикормов, 1317.55kb.
- Эффективность использования пувмкк «золотой фелуцен» №3092 при выращивании бычков, 415.9kb.
- Влияние скармливания минерально-витаминнойкормовой добавки на изменение живой массы, 782.61kb.
- Программа вступительного экзамена в аспирантуру по специальной дисциплине 06. 02., 48.66kb.
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Лабораторные исследования
3.1.1. Изучение тератогенных, эмбриотоксических, мутагенных и пирогенных свойств Полизона на лабораторных животных
Тератогенную и эмбриотоксическую активность изучали на белых крысах. Тестирование проводили на половозрелых совершенно здоровых животных, которые содержались в оптимальных условиях, предусмотренных для содержания подопытных животных.
Самок подсаживали к самцам вечером из расчёта подсадки 1 самца к 2-3 самкам массой 180-250 г и исследовали мазок из их влагалища утром следующего дня. День обнаружения сперматозоидов во влагалищном мазке у крыс учитывали как первый день беременности. После этого самцов отсаживали.
Основной целью исследования являлась оценка степени влияния Полизона на репродуктивную функцию организма.
Полизон в дозе 285 мг/кг массы тела вводили крысам внутрь в два срока беременности: первой группе (12 самкам) – с первых по 13 – сутки с охватом предымплантационного периода (1 – 4 сут.); периодов имплантации (5 – 9 сут.), плацентации и органогенеза (10 – 13 сут.); второй (12 самкам) – с 14 по 20-е сутки, или плодный период. Третья группа (12 особей) служила контролем. Животным этой группы вводили внутрь воду в том же объёме, что и взвесь препарата. За животными вели ежедневное наблюдение.
Лабораторные исследования выявили, что показатели репродуктивной функции крыс были практически одинаковы в контрольной и опытных группах. У плодов всех трёх групп визуальным осмотром не выявлено дефектов развития кожных покровов, аномалий развития лицевого, мозгового отделов черепа и конечностей.
После применения препарата Полизон у всех эмбрионов (167 экземпляров) тщательно исследованы органы. Выявлено при этом следующее. Носовые щели не искривлены, сращены. Твёрдое нёбо без признаков расщепления. Язык свободно размещался во рту. Глазные яблоки парные, расположены на одном уровне. Отделы головного мозга развиты пропорционально, боковые, а также 3-й и 4-й желудочки мозга без отклонения от нормы. Кольца трахеи хорошо развиты. Пищевод без стенозов. Целостность стенок кровеносных сосудов не нарушена. Спинной мозг, слюнные железы без признаков патологических изменений.
У всех плодов топография и конфигурация органов грудной полости обычные. Сердце 4-х камерное, его перегородки и коронарные сосуды без дефектов. Лёгкое двудольное, ячеистое.
Печень обычной консистенции с чётко выраженными долями без кровоизлияний. Слизистая оболочка желудка нежно-складчатая, петли кишечника без заворотов. Селезёнка обычной конфигурации и расположения. Поджелудочная железа компактная, уже дифференцированная на головку, тело и хвост. Надпочечники крупные, бобовидной формы. Почка имеет корковый и мозговой слои, почечные лоханки в норме. Прямая кишка и половые органы без каких-либо аномалий.
Результаты исследований показали, что препарат Полизон не изменял соотношение между самцами и самками, а их краннио-каудальные размеры были близки к контрольным показателям.
При исследовании скелетной системы эмбрионов (всего просмотрено 167 эмбрионов) определяли характер оссификации черепа, скелета и конечностей, форму и пространственное расположение костей, число закладок метакарпальных и метатарзальных костей, участки оссификации в грудном и тазовом поясах.
В результате исследования костей черепа не выявлено никаких пороков развития ни у одного из просмотренных эмбрионов. Темпы окостенения, закладок тел и дуг позвонков во всех отделах позвоночника не различались по группам. Сам позвоночный столб прямой, разрывов на каком-либо уровне не наблюдалось.
Скелет верхних конечностей не имел признаков патологии развития ни одного из просмотренных эмбрионов.
Анализируя данные, можно сделать вывод, что специфических аномалий в состоянии внутренних органов и тканей, а также в развитии черепа, скелета туловища и конечностей, которые можно было бы квалифицировать как проявление тератогенного действия препарата Полизон, не выявлено.
Таким образом, на основании экспериментов, в которых было исследовано 36 беременных самок и 341 эмбрион, можно сделать вывод, что препарат Полизон не оказывает отрицательного влияния на репродуктивную функцию крыс и развитие эмбрионов, на основании чего мы провели исследования на птице.
3.1.2 Оценка эмбриотоксической и тератогенной активности препарата Полизон на эмбрионах цыплят
Исследования проводили на 7-дневных эмбрионах цыплят. Препарат Полизон вводили в трёх дозах: 1/2, 1/10 и 1/100 LD50 для эмбрионов, установленных ранее при изучении острой токсичности.
Перед введением изучаемого вещества произвели овоскопию эмбрионов и обвели карандашом на скорлупе границу воздушного пространства, а также обозначали место нахождения зародыша. Перед введением препарата боковую поверхность и тупой конец яйца протёрли сначала 5%-ной настойкой йода, а затем спиртом. В этих местах специально заточенным скальпелем в виде копья сделали по одному отверстию. Проникающее в воздушную камеру отверстие необходимо для того, чтобы введённое в желточный мешок вещество не вытекало обратно. При горизонтальном положении яйца через отверстие в боковой поверхности на глубине 2-3 см вводили иглу и при помощи однограммового шприца (с делением 0,01 мл) инъецировали препарат Полизон в объёме 0,1-0,2 мл. После инъекции раствора отверстия в скорлупе заливали стерильным расплавленным парафином.
Препарат Полизон вводили в желточный мешок в различных дозах (3 дозы по 10 эмбрионов на каждую дозу). Параллельно с этим равному количеству подопытных эмбрионов (30 штук) в желточный мешок вводили изотонический раствор натрия хлорида. Эмбрионов инкубировали в течение 14 дней по общепринятому режиму инкубации куриных яиц.
Ежедневно проводили овоскопирование, что позволяло определять их жизнеспособность.
На 19-е сутки инкубации умерщвлённые в морозильной камере плоды взвешивали, измеряли их кранио-каудальный размер, длину передних и задних конечностей. При наружном осмотре не выявлено различий между плодами контрольных и опытных групп. Длина передних и задних конечностей, масса тела также не имели статистически достоверных отличий. Не наблюдалось видимых изменений в скелете грудных (свободного крыла) и тазовых конечностей, в лицевом черепе.
После внешнего осмотра половину эмбрионов фиксировали в жидкости Буэна для последующего изучения состояния внутренних органов, другую половину в 96%-ном спирте для изучения скелета. Внутренние органы исследованы по методу Вильсона, модифицированному в отделе эмбриологии Института экспериментальной медицины АМН СССР. Декальцинировали ткани эмбрионов в жидкости Буэна (перенасыщенный раствор пикриновой кислоты – 15 частей, 40%-ный формалин – 3 части, ледяная уксусная кислота – 1 часть). Эмбрионов в этой жидкости выдерживали 10 суток, после чего на столике острым скальпелем делали сегментарные срезы: 1 – носовые пазухи, 2 – большие полушария, 3 – мозжечок, продолговатый мозг, 4 – трахея, пищевод, сосуды, 5 – сердце, лёгкие, 6 – кишечник, печень, 7 – почки.
При исследовании внутренних органов и скелетной системы контрольных эмбрионов и тех, которым вводили максимальные дозы Полизона, на серии параллельных разрезов тела, шеи и голов, а также на тотальных препаратах выявлялась следующая картина.
В области дна ротоглотки определяются вход в гортань, гортанные сосочки и мускулы, в области крыши – вход в слуховые трубы, глоточные железы. Носовая полость состоит из извитых раковин. Отклонений от нормы не выявлено.
При осмотре обонятельных луковиц и глазных яблок никаких изменений патологического характера не обнаружено. Глазные яблоки овальные и крупные. Радужная оболочка равномерно пигментирована.
Все отделы конечного и промежуточного мозга выражены достаточно чётко и соответствуют норме.
На всех разрезах мозжечка и продолговатого мозга выявлялось нормальное развитие.
Подводя итог проведённым исследованиям, можно заключить, что препарат Полизон не вызывает у эмбрионов кур отклонений в топографии и морфологии внутренних органов, в скорости оссификации костей скелета и их пространственной ориентации.
Таким образом, изучаемый нами препарат Полизон не обладает эмбриотоксическими свойствами и не оказывает тератогенного влияния, что снижает возможные ограничения Полизона, как добавки к рационам для сельскохозяйственных животных и птицы.
3.1. 3. Мутагенная активность препарата Полизон.
Для выявления генных мутаций при применении препарата Полизон опыты были проведены на индикаторных штаммах в условиях метаболической активации и без неё. В первом случае, в отличие от метаболической активации, параллельно включали варианты с полной микросомальной активирующей смесью (ПМАС) и неполной микросомальной активирующей смесью (НМАС). В состав первой входили суспензия бактерий, исследуемый препарат, гомогенат и кофакторы (НАДФ, глюкозо-6-фосфат). В вариантах с НМАС вместо кофакторов вносили воду в соответствующем объёме.
В вариантах с НМАС может быть зарегистрировано действие прямых мутагенов, то есть препаратов, проявляющих мутагенный эффект за счёт активности исходной структуры вещества. Действие же промутагенов, то есть соединений, эффект которых связан с образованием метаболитов, может быть учтён при сравнении результатов, полученных при испытании Полизона с НМАС и ПМАС (табл. 1).
Данные, приведённые в таблице 1, характеризуют индукцию генных мутаций испытуемых соединений в условиях метаболической активации на
индикаторные штаммы бактерий с помощью теста Salmonella/микросомы. Из таблицы видно, что Полизон в дозе 0,1; 1; 10; 100; 1000 мкг/чашку не вызывал превышения числа ревертантов. Так, число ревертантов равнялось соответственно 12, 14, 11, 15, 14 против 15 в контроле в варианте с НМАС и 13, 14, 14, 14, 16 против 15 в контроле в варианте с ПМАС на штамме ТА1950. На другом штамме ТА98 число ревертантов равнялось соответственно 25, 26, 24, 30, 32 против 34 в контроле с НМАС и 37, 34, 35, 29, 39 против 38 в контроле с ПМАС. На штамме ТА 100 число ревертантов равнялось соответственно 122, 120, 125, 128, 130 против 127 в контроле с НМАС и 115, 118, 124, 124, 132 против 164 в контроле с ПМАС.
Таблица 1.-Результаты влияния Полизона на индикаторные штаммы микроорганизмов
| Препарат мкг/чашку | Оценка среднего числа ревертантов на чашку | |||||
| НМАС | ПМАС | |||||
| Опыт: | | | | | | |
| Полизон 0,1 | 12 | 25 | 122 | 13 | 37 | 115 |
| 1 | 14 | 26 | 120 | 14 | 34 | 118 |
| 10 | 11 | 24 | 125 | 14 | 35 | 124 |
| 100 | 15 | 30 | 128 | 14 | 29 | 124 |
| 1000 | 14 | 32 | 130 | 16 | 39 | 132 |
| Контроль | 15 | 34 | 127 | 15 | 38 | 164 |
Сравнивая результаты тестирования мутагенной активности испытываемых соединений в опытах без метаболической активации можно сказать, что в каждом варианте исследования не выявлено статистически достоверных различий между опытными и контрольными данными. Следовательно, Полизон на индикаторных штаммах сальмонелл без метаболической активации показал отсутствие мутагенного эффекта.
3.1.4. Определение пирогенности препарата Полизон
Определение производили на 3 здоровых кроликах обоего пола весом 1,5-2,5 кг, содержащихся на полноценном рационе.
Кроликов отбирали за 5 дней до опыта и взвешивали. Каждого кролика помещали в отдельную клетку. При взвешивании животных их оберегали от возбуждения (избегали шума, стука и резких движений).
Взвешивание кроликов производили через день до дачи корма, всего не менее 3 раз. В течение срока, предшествующего опыту, кролики не должны были терять в весе. Животные, теряющие в весе, к опыту были непригодны. В течение 3 суток перед опытом у каждого подопытного кролика измеряли температуру в прямой кишке. Измерения производили ежедневно утром до дачи корма, при помощи медицинского термометра. Термометр вводили на глубину 4 – 5 см (за внутренний сфинктер) на время, необходимое для достижения максимальной температуры, но не менее чем на 5 минут. Исходная температура подопытных кроликов должна быть в пределах 38,2 – 39,5°С. Животные с более высокой или более низкой температурой для опыта были непригодны.
Определение производили в отдельной комнате, изолированной от шума, с постоянной температурой 18 - 22°С. Вечером накануне опыта у животных отбирали корм. В день опыта животные корма не получали (воду давали без ограничения).
До введения Полизона, но не более чем за 30 минут, производили определение исходной температуры. При измерении температуры оберегали кроликов от излишнего возбуждения.
Полизон вводили подогретым до 37°С в количествах, указанных в наставлении.
Для введения растворов в вену применяли стерильные и апирогенные шприцы и иглы. Каждому кролику введение производили при помощи отдельной иглы.
Препарат исследовали на 3 кроликах. Введение раствора производили через 30 минут после измерения исходной температуры. Затем температуру измеряли 3 раза с промежутками 1 час (всего 3 раза) после введения.
Полизон считается непирогенным, если после введения ни у одного из подопытных животных ни при одном из 3 измерений не наблюдалось повышения температуры более чем на 0,6°С по сравнению с исходной температурой. Если хотя бы у одного из 3 кроликов температура при одном из измерений повысилась более чем на 0,6°С, опыт повторяют на 5 кроликах. Если ни у одного из этих кроликов не наблюдалось повышения температуры более чем на 0,6°С, препарат считают непирогенным; если у двух или более кроликов температура повысилась более чем на 0,6°С, его считают пирогенным, непригодным для парентерального применения.
Исследования показали, что препарат Полизон является непирогенным.
3.2. Разработка оптимальной дозы введения препарата Полизон в рацион свиней
- Влияние дозы введения препарата Полизон на эффективность откорма свиней
При введении препарата Полизон в рацион свиней в дозах 3, 5 и 7 мг на 1 кг живой массы было выяснено, что стимулятор роста нового поколения Полизон оказал положительное влияние на эффективность откорма в зависимости от дозы (табл. 2).
Среднесуточный прирост живой массы свиней I, II и III опытных групп повысился с их аналогами контрольной группы соответственно на 41, 38 и 34%. Разница в среднесуточном приросте живой массы у свиней I, II и III опытных групп достоверна. Максимальный среднесуточный прирост был отмечен у свиней I опытной группы (440 г), при дозе препарата Полизон 3 мг/кг живой массы.
Затраты корма на 1 кг прироста живой массы свиней I, II и III опытных групп составили соответственно 4,99; 5,31 и 5,49 кг, что ниже, чем у свиней контрольной группы, на 25,8; 21,0 и 18,3%.
Таблица 2.-Показатели продуктивности свиней на откорме в зависимости от дозы ввода препарата Полизон в рацион (в среднем на 1 гол) (Х±Sx)
| Показатели | Группы | |||
| Опытная I | Опытная II | Опытная III | Контроль-ная | |
| Доза ввода | 3 мг/кг | 5 мг/кг | 7 мг/кг | − |
| Количество голов | 8 | 8 | 8 | 8 |
| Дней содержания | 180 | 180 | 180 | 180 |
| Живая масса 1 гол. в среднем, кг: при постановке на опыт при снятии с опыта | 30,7±1,15 110±1,57*** | 30,1±0,97 108±1,61*** | 30,6±1,00 106±1,50*** | 30,8±1,06 87±1,56 |
| Прирост за опыт: общий, кг среднесуточный, г | 79,3 440±5,12*** | 77,9 435±4,70*** | 75,4 419±7,12*** | 56,2 309±4,19 |
| В % к контрольной группе | 142 | 141 | 136 | 100 |
| Среднесуточное потребление комбикорма в среднем на 1 гол., кг | 2,2 | 2,3 | 2,3 | 2,1 |
| Затраты корма на 1 кг прироста, кг | 4,99 | 5,31 | 5,49 | 6,72 |
| В % к контрольной группе | 74,2 | 79,0 | 81,7 | 100 |
Примечание: *** Р<0,001 по сравнению с контрольной группой.
Исследования показали, что наиболее оптимальной дозой введения препарата Полизон в рацион свиней, является доза 3 мг/кг живой массы.
3.2.2. Проверка иммунного и гормонального статуса свиней после получения препарата Полизон в разных дозировках
Препарат Полизон в составе комбикормов для свиней оказал иммуностимулирующее действие (табл. 3). Это выражается в существенном увеличении содержания в крови лейкоцитов, лимфоцитов, в том числе Т - и В - лимфоцитов, в возрастании показателей активности фагоцитов (поглотительная активность, способность к активации кислородзависимых микробицидных систем в условиях их индукции объектами фагоцитоза).
Показатели гуморального иммунитета – как неспецифического (комплемент), так и специфического (гетероагглютинины) у свиней, получавших препарат Полизон были выше на достоверную величину по сравнению с контрольными животными.
Таким образом, применение препарата Полизон в кормлении свиней, вызывает устойчивую тенденцию к стимуляции у них клеточных и фагоцитарных механизмов иммунной защиты.
В результате исследования установлено, что концентрация гормонов трийодтиронина (Т-3), свободной фракции тироксина (FТ-4), тиреостимулирующего гормона (TSH) в сыворотке крови опытных и контрольных животных находятся в пределах статистически значимых результатов, что свидетельствует об отсутствии отрицательного влияния Полизона на гормональный статус свиней.
Таблица 3.-Показатели иммунного статуса (Х±Sx)
| Основные показатели иммунограммы | контроль-ная группа | I опытная группа «Полизон» 3 мг/кг живой массы тела | II опытная группа «Полизон» 5 мг/кг живой массы тела | III опытная группа «Полизон» 7 мг/кг живой массы тела |
| Лейкоциты (х 109/л) | 11,86±1,31 | 13,24±1,60* | 14,53±2,1* | 12,36±2,84* |
| Лимфоциты (х 109/л) | 4,49±0,22 | 5,37±0,30* | 5,58±0,2* | 4,52±0,48х |
| Е-РОК – Т-лимф. (х 109/л) | 3,79±0,14 | 4,14±0,15* | 4,25±0,2* | 4,10±0,18* |
| ЕАС-РОК – В- лимф. (х 109/л) | 0,88±0,10 | 1,11±0,32* | 1,24±0,30* | 0,95±0,25х |
| Фагоцитарный показатель (%) | 58,17±4,21 | 66,80±3,87* | 67,44±4,11* | 65,77±1,85* |
| НСТ спонтанный (%) | 6,69±0,93 | 7,92±0,67* | 8,25±1,74* | 8,55±1,70* |
| НСТ идуцированный (%) | 41,79±5,35 | 46,07±3,70* | 48,09±12,2* | 44,65±3,64* |
| Комплемент (ЕД) | 45,00±3,69 | 48,00±2,66* | 46,82±3,8* | 45,00±15,00 |
| Содержание гетероагглютининов (log 2 титров) | 4,10±0,41 | 4,63±0,41* | 4,58±0,1* | 4,25±0,17* |
Примечание: * Р<0,05; х Р>0,05 по сравнению с контрольной группой.
Вместе с тем, концентрация адренокортикотропного гормона (ACTH) несколько превышает контроль, что способствует повышению адаптации организма свиней к стресс-факторам в результате кормления их с добавлением препарата Полизон. При этом изменения по адренокортикотропному гормону статистически не выходили за пределы физиологической нормы для данной популяции.