Встатье данной статье представлен подробный отчет об этапах разработки, испытаний и внедрении вакцины Гриппол гриппозная вакцина нового поколения гриппол петров Р. В., Хаитов Р. М., Некрасов А. В., Иванова А. С., Пучкова Н. Г

Вид материала

Отчет

Содержание Результаты биологического контроля производственной серии вакцины Гриппол, использованной для вакцинации школьников Оценка реактогенности, безвредности и иммунопрофилактической эффективности вакцины Гриппол у детей и подростков школьного возрас Результаты оценки профилактической эффективности вакцины Гриппол у школьников Исследования безвредности и иммуногенности вакцины Гриппол при вакцинации детей дошкольного и младшего школьного возраста Исследование реактогенности и выбор оптимальной дозы и схемы иммунизации вакциной Гриппол детей в возрасте от 6 месяцев до 3 лет

Подобный материал:

• Дства «Гриппол» для взрослых и «Гриппол плюс» для детей, при введении которой создается, 159.67kb.
• Лекция №3. Тема: профилактика туберкулеза, 67.13kb.
• Общие вопросы Обработки от паразитов, вакцинация, 98.62kb.
• Методические разработки адресуются руководителям, заведующим кафедрами, преподавателям,, 793.61kb.
• Аннотация: Встатье рассмотрена сущность энергетического менеджмента и роль мотивации, 253.08kb.
• Блох Илья Игоревич, Дураков Андрей Викторович пгниу, ул. Букирева, 15 Аннотация Вданной, 97.49kb.
• «У меня военная семья…», 98.69kb.
• Of any enterprise to have an effective quality assurance system enabling the manufacturing, 299.81kb.
• А. Е. Петрова Уважаемый Владимир Иванович! Уважаемый Олег Юрьевич! Уважаемые коллеги, 121.82kb.
• Ангарск Бином Ньютона одна из тем, рассмотрение которых способствует глубинному пониманию, 63.21kb.

Результаты биологического контроля производственной серии вакцины Гриппол, использованной для вакцинации школьников

Контроль безопасности вакцины Гриппол серии 20, которую предполагалось использовать для вакцинации школьников, был проведен в ГИСК им.Л.А.Тарасевича и в лаборатории лекарственно-диагностических форм ГНЦ Института иммунологии МЗ РФ.

Исследования проводились в соответствии с требованиями Временной фармакопейной статьи 42-2728-96 на вакцину Гриппол, а также” Методических указаний по проведению контроля противогриппозных препаратов”, утвержденных ГУКИ МЗ СССР от 16.11.84 и “ Методических рекомендаций по определению примесей бактериальный эндотоксинов в гриппозных вакцинах “, утвержденных Главным управлением по производству бактерийных и вирусных препаратов МЗ СССР от 01.08.83 года.

Производился контроль подлинности, рН, механических включений, стерильности, пирогенности, токсичности, специфической безвредности и наличие примесей эндотоксинов, специфической активности, антигенной активности, определялось содержание белка, иммуностимулятора полиоксидоний, овальбумина, детергента цетилтриметиламмония бромида (ЦТБА), реактогенности и иммуногенности.

В результате контроля установлено, что гриппозная полимер-субъединичная тривалентная вакцина Гриппол серии 20 контрольный номер 3115 производства НПО “ Иммунопрепарат” в одной дозе в 0,5 мл содержит: гемагглютинина типа А-1 - 11,5 мкг/мл , типа А-2 - 10,6 мкг/мл , типа В - 9,9 мкг/мл.

Раствор вакцины имеет рН равный 7,0. Вакцина стерильна, не содержит живого вируса гриппа, апирогенна: у кроликов массой 2,5 кг при внутривенном введении им человеческой дозы не вызывала подъема температуры.

Содержание белка, полиоксидония, ЦТАБ соответствовало норме: 77 мкг/мл белка, 1,1 мг/мл Полиоксидония, 6,0 мкг/ мл ЦТАБ.

Вакцина Гриппол высоко очищенный по содержанию куриного белка - овальбумина препарат: в вакцине овальбумина содержится в 12,5 раз ниже допустимой нормы, а именно 0,008 мкг/мл.

Контроль на содержание примесей бактериальных эндотоксинов и на остаточную токсичность проводился на мышах, предварительно премированных дактиномицином в дозе 750 мкг/ кг. Предварительная обработка мышей дактиномицином повышает их чувствительность к бактериальным эндотоксинам в 40 - 100 тысяч раз, позволяя выявить тысячные доли мкг. По чувствительности метод не уступает общеизвестному Limuius - тесту, но не имеет его недостатков: компоненты некоторых лекарственных средств препятствуют желированию лизата Limulus в присутствии эндотоксинов, давая ложно отрицательные результаты. Кроме того, преимуществом метода является также возможность выявить не только бактериальные эндотоксины, но и остаточную токсичность исследуемого препарата. Этот вывод основан на известных данных о механизме действия дактиномицина, который подавляет окислительные ферменты печени, то есть ингибирует обезвреживающую функцию печени, тем самым, повышая в тысячи раз чувствительность организма животного к любому токсическому действию. Контроль вакцины Гриппол серии 20 в указанном тесте показал, что вакцина является высокоочищенным препаратом, не содержит примесей бактериальных эндотоксинов или каких либо других веществ, способных вызвать токсические реакции. Следует отметить, что данный контроль проводился в сравнении с другими коммерческими гриппозными отечественными и зарубежными вакцинами. Проведенный сравнительный контроль показал, что технология производства вакцины Гриппол обеспечивает данному препарату очистку, значительно превосходящую таковую в коммерческих гриппозных цельновирионных инактивированных и сплит вакцинах.

Возможность индукции аллергических реакций немедленного типа, сопряженных с появлением гомоцитотропных антител в ответ на введение вакцины Гриппол, оценивали на морских свинках в системной анафилактической реакции, развивающейся, как известно, при повторном контакте с веществами, содержащими аллерген.

Сенсибилизацию морских свинок массой тела 250-300 г проводили по оптимальной для выявления аллергизации схеме: 3- кратно через день по 1 человеческой дозе (1 инъекция подкожно, две последующие внутримышечно). На 21 сутки от начала сенсибилизации внутрисердечно вводили разрешающую дозу вакцин соответствующую трехкратной иммунизирующей или раствор оваальбумина в дозе 2 мг в мл.

Оценку реакции проводили на основании принятой 4-балльной системы, регистрируя в течение 10 минут после разрешающей инъекции различную степень проявления системной анафилактической реакции (от почесывания мордочки до смерти животного) с вычислением среднего анафилактического индекса /Weigleet.al.,J.Immunol.,1960,95,5.

Полученные результаты показали, что ни при разрешении животных вакциной указанных серий, ни при введении им оваальбумина, признаков развития анафилактической реакции не было выявлено.

Сравнительное изучение иммуногенности вакцины Гриппол по сравнению с другими гриппозными вакцинами был проведен на мышах.

Вакцины вводили мышам (CBAхC57BI/6) F₁ внутрибрюшинно в одной человеческой дозе, то есть 0,5 мл. Через две недели после вакцинации в сыворотке крови мышей оценивали титры антител к гемагглютинину в реакции РТГА. Установлено, что несмотря на то, что в вакцине Гриппол доза гемагглютинина в три раза ниже, чем в сплит- вакцине Ваксигрипп фирмы Пастер Мерье, и в два раза ниже, чем в инактивированной цельновирионной вакцине фирмы НПО “ Иммунопрепарат”, по титрам антител к антигенам типов H1N1, H2N3 вакцина Гриппол не уступает сплит-вакцине и чуть ниже, чем в цельновирионной вакцине.

Таким образом, проведенный контроль вакцины Гриппол серии 20 с использованием широкого спектра методов показал, что вакцина данной серии является безопасным высокоочищенным препаратом, обладающим выраженными иммуногенными свойствами, и может быть рекомендована для использования в испытаниях безопосности, реактогенности и профилактической эффективности у школьников.

Гриппозные эпидемии начинаются, как правило, со школьников. Учащиеся являются своеобразным детонатором, занося инфекцию в семьи, после чего заболевают дошкольники и взрослые. Вакцинация школьников и дошкольников может не только существенно снизить размах эпидемии, но и защитить детей от тяжелых, свойственных этому возрасту осложнений, при этом особенно важна проблема вакцинации детей, имеющих различные патологии, в частности аллергозаболевания.


Оценка реактогенности, безвредности и иммунопрофилактической эффективности вакцины Гриппол у детей и подростков школьного возраста (7 - 17 лет)

Исследования проводились специалистами следующих научных и медицинских учреждений:

1. ГНЦ Институт иммунологии МЗ РФ
   
2. Государственный институт стандартизации и контроля медицинских и иммунобиологических препаратов им. Л.А.Тарасевича.
   
3. Центр государственного санитарно-эпидемиологического надзора Федерального управления медико-биологических и экстремальных проблем МЗ РФ.
   
4. Медсанчасть N8 г. Обнинск Московской области.
   
5. Участковые врачи-педиатры, школьные врачи и медсестры г.Обнинска
   

Поставленные задачи решались в рамках установленных законодательством России и требованиями МЗ РФ к проведению испытаний вакцинных препаратов у детей. Было осуществлено организационное и материальное обеспечение комплекса мероприятий по проведению иммунизации контингентов детей и подростков вакциной Гриппол.


На 1-ом этапе на ограниченном контингенте в школе-интернате была оценена реактогенность и безвредность вакцины Гриппол при иммунизации двух групп школьного возраста: 17 - 14 лет, 14-7 лет. Прививки в этих группах проводили последовательно, начиная с более старшей группы.

За привитыми было установлено медицинское наблюдение с целью сбора материалов, характеризующих наличие, частоту и интенсивность общих и местных поствакцинальных реакций.

Итоги наблюдения показали, что повышение температуры у привитых как в старшей группе, так и в младшей группе встречалось в единичных случаях (в 3,3% и в 2,5% соответственно), причем отмечали только слабые температурные реакции (табл. 1 и 2). В основном же, как у привитых (в 96,6% - 97,5%), так и в группах контроля (в 83,3%-100%) температура не повышалась выше нормы.

При оценке общего состояния привитых субъективные жалобы на нарушение общего характера зарегистрированы в старшей группе у привитых в 43,3%, в контрольной группе в 50%, однако разница между показателями статистически недостоверна (Р> 0,05).

Местные реакции были отмечены только в старшей школьной группе в 9 случаях из 30 привитых, и выражались они в болезненности кожи в месте инъекции. По продолжительности симптом болезненности наблюдали не более 48 часов.

Наряду с изучением общих и местных реакций определенный интерес для суждения о реактогенности представляла оценка состояния периферической крови и мочи привитых до и после вакцинации.

Результаты сравнительного анализа в динамике у лиц из 2-х групп привитых и из контрольной группы показали, что колебания показателей содержания форменных элементов периферической крови, а также показателей, характеризующих качественный состав мочи, в основном, были в пределах нормы.

Таким образом, результаты изучения общих и местных реакций, а также тестов, определяющих безвредность препаратов, у привитых и лиц из контрольной группы в возрасте 17-14 лет и 14-7 лет показали, что вакцина Гриппол обладает низкой реактогенностью и безвредна при вакцинации детей старшего и младшего школьного возраста.

Результаты оценки профилактической эффективности вакцины Гриппол у школьников

С целью формирования опытных и контрольных групп предварительно во всех школах города был проведен анализ заболеваемости гриппом и ОРЗ за 5 последних лет. Результаты этого анализа легли в основу выбора двух групп школ с относительно одинаковым уровнем заболеваемости, при этом эти группы были сопоставлены и по количеству учащихся в них. К основной группе были отнесены три школы с общим числом учащихся 2.836 человек, и в контрольную группу также были включены три школы с общим числом учащихся 2.391 человек.

Для проведения прививок в школах, отнесенных к основной группе, были созданы прививочные бригады, в которые были включены врачи педиатры и прививочные медсестры. Врачи педиатры осуществляли предварительный врачебный осмотр детей перед вакцинацией, а также решали вопрос об отсутствии или наличии медицинских отводов в каждом конкретном случае.

В результате проведенной работы в 36,9 % случаев у детей были установлены медицинские отводы, которые, в основном, носили временный характер и были связаны с недостаточным интервалом после последней прививки или с периодом выздоровления после острого заболевания. Отказы родителей от иммунизации детей против гриппа наблюдались очень редко - в 7,2% случаев и 3,8% детей по тем или иным причинам в момент проведения прививочной компании отсутствовали.

Таким образом, всего было привито вакциной “Гриппол” 1494 учащихся школ, отнесенных к основной группе, что составляет 52,7  от общего числа учеников в этой группе. В связи с этим можно предполагать, что по-видимому ежегодно в предэпидемический сезон заболеваемости гриппом (в октябре-ноябре), когда проводится прививочная кампания против гриппа, одномоментно в школах могут быть охвачены прививками только 50  учащихся.

В дальнейшем с декабря по апрель в основной группе (в школах, где проводили прививки против гриппа) и в контрольной группе (в школах, где иммунизация не планировалась и не проводилась) был организован учет и ежемесячный сбор и анализ данных заболеваемости гриппом и ОРЗ, а также другими соматическими и другими инфекционными заболеваниями.

Кроме того, с целью коррекции клинических диагнозов была проделана выборочная серологическая расшифровка заболеваний с диагнозом грипп и ОРЗ. При этом, у лиц, привитых против гриппа и непривитых (в каждую из двух групп вошли не менее 30 человек), были взяты парные сыворотки - первая в начале заболевания (на 1-3 день заболевания) и вторая через 14-21 день от начала заболевания. Эти сыворотки были исследованы в РТГА с диагностикумами, содержащими антигены штаммов вируса гриппа А/H₁N₁, A/H₃N_2, B.


Обращает внимание, что в ноябре, до и во время проведения иммунизации, уровень заболеваемости ОРЗ и ОРВИ во всех 3-х группах наблюдения (группа привитых и две контрольные группы) практически не различался (9,8 - 10,0 на 1 тыс.).

В период сезонного подъема заболеваемости гриппом и ОРВИ (с декабря по апрель) среди контингентов, входящих в группу наблюдения, было зарегистрировано 766 случаев заболевания этими инфекциями. Из материалов, характеризующих заболеваемость отдельно в каждой группе наблюдения следует, что статистически значимо (при р0,05) более высокий уровень заболеваемости (309,5 на 1 тыс.) имел место в контрольной группе №1 (коллективы, где прививки не проводили) по сравнению с группой привитых вакциной Гриппол (157,0 на 1 тыс.) и не привитых (контрольная группа №2, показатель заболеваемости 235,3 на 1 тыс.). Разница между показателями в двух последних группах также статистически достоверна (р0,05).

С целью серологической расшифровки этиологического диагноза «грипп» было исследовано 53 парных сыворотки от больных с клиническим диагнозом «грипп и ОРВИ». Частота серологического подтверждения диагноза «грипп» в разных группах наблюдения практически не различалась (р0,05) и для серологической коррекции за основу был взят средний показатель 60,4%. Уровень заболеваемости гриппом с учетом серологической коррекции, естественно, ниже уровня общей заболеваемости гриппом и ОРВИ, однако это не вносит существенных изменений в сравнительную характеристику заболеваемости по группам наблюдения (см. таб.5). Так, в контрольной группе №1 показатель заболеваемости гриппом (186,9) существенно выше по сравнению с группой привитых вакциной Гриппол (94,8) и группой непривитых (контрольная группа №2, пок. 142,1). Разница между показателями в двух последних группах статистически значима (р0,05).

Таким образом, при сопоставлении уровней заболеваемости гриппом в 2-х контрольных группах можно отметить, что наличие 50% иммунной прослойки в коллективе уменьшает вероятность заболевания непривитых (контрольная группа №2) по сравнению с непривитыми лицами из коллективов, где иммунизацию не проводили (контрольная группа №1).

Установленные по материалам эпидопыта показатели частоты заболеваемости гриппом в контрольной группе №1 (186,9) и в группе привитых (94,8) позволяют определить по соответствующим формулам показатели профилактической эффективности, а именно индекс эффективности и коэффициент эффективности, которые соответственно равны 1,97 и 49,3%. Определенный интерес представляют данные о тяжести клинического течения заболевания гриппом в группе привитых и не привитых.

Анализ материалов показывает, что у привитых практически во всех случаях заболевания протекали в легкой форме, в то время как в контрольной группе регистрировали тяжелые случаи и заболевания средней тяжести.

Изучение в течение 5 месяцев после вакцинации соматической и инфекционной заболеваемости (исключения грипп и ОРВИ) в группах привитых вакциной Гриппол и не привитых из этого же коллектива показало, что в группе привитых (р0,05) реже регистрировали заболевания верхних дыхательных путей, чем в группе не привитых (пок. 8,6 и 21,0 соответственно). В то же время в этих двух группах наблюдения (привитые и непривитые) другие соматические заболевания регистрировали практически с одинаковой частотой (р>0,05).

Снижение в 2,4 раза частоты заболеваний верхних дыхательных путей в группе привитых вакциной Гриппол, по-видимому, можно связать с тем фактом, что в состав вакцины входит иммуностимулятор Полиоксидоний, который, как известно из литературы, в определенной степени может стимулировать общую иммунную защиту человека.

Таким образом, в результате проведенных Государственных испытаний в условиях строго контролируемых эпидопытов установлено, что при вакцинации детей школьного возраста коммерческая вакцина Гриппол характеризуется слабой реактогенностью и достаточно высокими показателями профилактической эффективности, что позволяет ее рекомендовать для иммунизации детей школьного возраста.


Исследования безвредности и иммуногенности вакцины Гриппол при вакцинации детей дошкольного и младшего школьного возраста

Исследования по оценке реактогенности и безвредности вакцины Гриппол при введении ее детям дошкольного возраста от 3 лет проводили на базе детских дошкольных учреждений г.Обнинска. Исследования проводили в период предсезонного подъема заболеваемости гриппом и ОРВИ в условиях строго контролируемых эпидопытов. Для вакцинации и последующего наблюдения отбирали детей с согласия родителей.

Принципиально важным было определение дозы и схемы иммунизации. В мировой практике, как правило, используется схема двухкратной вакцинации с интервалом 4 недели при введении детской дозы, равной половине взрослой дозы. Подобная схема обусловлена непереносимостью детьми полной взрослой дозы из-за реактогенности большинства имеющихся вакцин. Схема двукратной вакцинации снижает процент прививаемости детей из-за того, что часть детей недополучает вторую прививку в силу разных причин. В наших исследованиях прививочная доза вакцины Гриппол для детей и взрослых была одинаковой стандартной при однократной схеме иммунизации и содержала по 5 мкг гамагглютинина каждого из трех актуальных штаммов вирусов гриппа типов А(H1N1), A(H3N2), B и 500 мкг Полиоксидония.

Итоги наблюдения за детьми в группе привитых вакциной Гриппол и в контрольной группе приведены на слайде. Результаты сравнительного анализа общих и местных реакций, а также тестов, определяющих безвредность вакцинации в обеих группах показали, что вакцина Гриппол абсолютно переносима детьми и безвредна для данного детского контингента, а применение однократной схемы вакцинации позволяет увеличить процент прививаемости детей и соответственно, повысить иммунную прослойку детей и эпидэффективность вакцины Гриппол.

Изучение реактогенности и иммуногенности вакцины Гриппол при вакцинации детей младшего школьного возраста проводилась под руководством профессора А.Н.Слепушкина и профессора В.Ф.Учайкина.

Вакцинация проводилась перед началом эпидемического подъема заболеваемости гриппом среди детей, проживающих в двух закрытых детских учреждениях. Прививки проводили в соответствии с требованиями Инструкций с обязательным осмотром врачей-педиатров и термометрией. Анализ историй развития детей, находившихся под наблюдением и вакцинированных показал, что среди них отмечен высокий процент хронических патологий, в том числе аллергических заболеваний.

При изучении реактогенности вакцины Гриппол по общепринятым тестам было установлено, что ни местных, ни общих реакций на вакцинацию у привитых детей не было.

При изучении иммуногенности вакцины Гриппол при однократной вакцинации стандартной дозой у детей 6-11 лет был установлен высокий выраженный иммунный ответ на вакцинацию - 80% и выше сероконверсий среди детей с исходными титрами 1:10 и ниже (использовался метод РТГА с 6 антигенами современных основных штаммов вирусов гриппа, 3 из них вакцинные). Иммуногенность вакцины была высокой и составила для вакцинного антигена гриппа А(Н1N1) 75% сероконверсий, А(Н3N2) – 90% и типа В –73%. Из приведенных на слайде данных видно, что большинство детей в результате вакцинопрофилактики стали иметь не только защитные, но и очень высокие (≥1:640) титры антител к основным современным штаммам вирусов гриппа .

Таким образом, было установлено, что вакцина Гриппол обладает выраженной иммуногенностью ко всем антигенам актуальных штаммов вируса гриппа, а наблюдаемая у детей хроническая патология не препятствует выработке у них гуморального иммунитета при профилактических прививках вакциной Гриппол.

Исследование реактогенности и выбор оптимальной дозы и схемы иммунизации вакциной Гриппол детей в возрасте от 6 месяцев до 3 лет

Согласно требованиям ВОЗ гриппозные инактивированные вакцины основных зарубежных производителей рекомендовано вводить детям в возрасте от 6 месяцев до 3 лет по 1/2 дозы (суммарно 22,5 мкг гемагглютинина) двукратно с интервалом 4 недели. Выбор оптимальной дозы и схемы иммунизации вакциной Гриппол детей указанного возраста был целью очередного этапа Гос.испытаний, проведенных в соответствии с Программой, утвержденной Комитетом МИБП от 24.06.99. Было проведено сравнительное изучение 2-х схем иммунизации по параметрам реактогенности и антигенной активности:

• однократное введение полной прививочной дозы (15 мкг ГА);
  
• двукратное введение по 1/2 дозы с интервалом от 3-4 недели.
  

Полученные результаты свидетельствуют о том, что вакцина Гриппол, вводимая по обеим схемам, хорошо переносятся детьми указанного возраста. В процессе наблюдения за привитыми детьми не выявлено дополнительных и местных реакций, независимо от схемы введения препарата, по сравнению с контрольной группой, получившей плацебо.

Изучение иммуногенной активности вакцины Гриппол при двух сравниваемых схемах введения проводилось по оценке 4-кратных сероконверсий титров антител (определяются по реакции РТГА), что специалисты считают состоявшимся иммунным ответом на введение вакцины. Было установлено, что группа серонегативных детей (дети имеют исходные титры антител 1:20 и ниже), иммунизированных по схеме двухкратного введения половинной дозы, отвечает достоверно более высоким процентом 4-кратных сероконверсий к штаммам вируса гриппа А(H1N1) и A(H3N2) по сравнению с однократным введением препарата в полной дозе.

К штамму вируса гриппа В этот показатель в группах привитых по двум схемам практически не различался и был равен 62-81%. Что касается группы серопозитивных детей, то было установлено, что показатели частоты 4-кратных сероконверсий у привитых по двум схемам к 3 штамма вируса гриппа практически не различались. Полученные результаты позволяют предположить, что 2-кратное введение вакцины Гриппол серонегативным детям в полной дозе 15 мкг ГА может сопровождаться более высокими показателями иммуногенности по сравнению с 2-кратным введением половинной дозы.

После анализа и обсуждения полученных результатов было принято решение о проведении второго этапа Гос.испытаний, который предусматривал сравнительное изучение иммуногенности вакцины Гриппол при 2-кратном введении в полной дозе (15 мкг ГА) и в половинной дозе (7,5 мкг ГА) с интервалом 3-4 недели. В настоящее время в соответствии с утвержденной Ученым советом ГИСКа (15.09.00) Программой завершен второй этап Гос.испытаний и подготовлен Отчет о поведенных исследованиях.

В настоящее время разрабатывается и утверждается в установленном порядке новый вариант Инструкции по применению вакцины Гриппол, в которой будет введен возраст вакцинируемых, начания с 6 месяцев (согласно требованиям ВОЗ) и предложена схема иммунизации.