Geum.ru

Автореферат диссертации на соискание ученой степени

Вид материалаАвтореферат диссертации
Таблица 5. Степень нарушения локомоторной функции фагоцитов и степень
Таблица 7. Индекс стимуляции хемотаксической функции фагоцитов различными концентрациями нуклеината натрия in vitro
Подобный материал:
1   2   3   4

Примечание: # – достоверные различия с нормой при уровне значимости р<0,02, * – достоверные различия с продукцией без АБП при уровне значимости р<0,05.

Рисунок 11. Показатели спонтанной и ЛПС-стимулированной продукции ИЛ-4 клетками периферической крови здоровых (n=15) и травмированных детей (n=15) под действием антибактериальных препаратов.


Несколько иное влияние АБП оказывали на продукцию ИЛ-4 (рис. 11). Амоксиклав, гентамицин, линкомицин и цефотаксим угнетали его спонтанную и ЛПС-стимулированную продукцию. Исключение составил лишь линкомицин, который инициировал увеличение ЛПС-секреции ИЛ-4, восстанавливая ее до нормального уровня.

Продукция ИНФ-α под действием антибактериальных препаратов практически не менялась.

Таким образом, изучаемые антибиотики являются модуляторами цитокин-продуктивной активности клеток, в первую очередь, фагоцитов, участвующих в формировании посттравматической воспалительной реакции. Амплитуда и направленность этой модуляции, безусловно, детерминирует и состояние эффекторного звена иммунитета, т. е. тех факторов, которые определяют устойчивость организма и непосредственно участвуют в элиминации патогена. В этой связи важно было определить возможность оценки функционального состояния фагоцитарного звена, в целом, и хемотаксиса в частности, в качестве интегрального критерия оценки эффективности этиотропной терапии. Для этой цели мы изучили влияние АБП на хемотаксис нейтрофилов периферической крови детей с травматической болезнью к живым суточным бактериальным культурам и изучаемым АПБ.

Установлено, что АБП инициируют положительную хемотаксическую реакцию нейтрофилов периферической крови здоровых детей и пациентов с неосложненной механической травмой, которая совпадает с таковой к живым суточным культурам бактерий, наиболее часто вызывающих хирургическую инфекции. Феноменологическое сходство целенаправленной двигательной активности нейтрофилов к бактериям и антибактериальным препаратам, на наш взгляд, обусловлено происхождением антибиотиков.

Интересные данные были получены при изучении влияния антибактериальных препаратов на двигательную активность нейтрофилов в условиях непосредственного контакта (табл. 3). Все исследуемые АБП достоверно угнетали целенаправленную двигательную активность нейтрофилов здоровых детей к ИЛ-1, ИЛ-8 и лейкинферону. Максимальный эффект оказывал амоксиклав.


Хемотаксис нейтрофилов к С5а-компоненту комплемента также угнетался под действием амоксиклава и линкомицина, только с меньшей амплитудой. Гентамицин и линкомицин не вызывали достоверных изменений хемотаксической реакции нейтрофилов к С5а.

Таблица 3.

Индекс хемотаксиса нейтрофилов периферической крови здоровых детей (n=41) к бактериям и небактериальным хемоаттрактантам под действием антибактериальных препаратов


Хемоаттрактанты
Статистические

показатели
Индекс хемотаксиса Нф без АБП

(контроль), усл. ед.,
Индекс хемотаксиса нейтрофилов под действием АБП, усл. ед.

Амоксиклав
Гентамицин
Линкомицин
Цефотаксим

С5а-комп. ком-та
M±m
2,19±0,1
1,754±0,05*
1,927±0,1
2,165±0,14
1,825±0,09*

ИЛ-1
M±m
2,32±0,11
1,429±0,05*
1,569±0,12*
1,639±0,09*
1,713±0,14*

ИЛ-8
M±m
1,92±0,08
1,390±0,06*
1,444±0,07*
1,540±0,09*
1,471±0,1*

Лейкинферон
M±m
2,13±0,09
1,529±0,11*
1,665±0,1*
1,768±0,11*
1,761±0,13*

St. aureus
M±m
1,971±0,01
1,700±0,08*
1,439±0,12*
1,413±0,1*
1,438±0,09*

E. coli
M±m
1,356±0,03
1,591±0,04*
1,703±0,02*
1,487±0,03*
1,916±0,1*

Pr. vulgaris
M±m
1,590±0,001
1,305±0,13*
1,285±0,1*
1,418±0,1
1,277±0,08*

Ps. aeruginosa
M±m
1,430±0,031
1,281±0,02*
1,330±0,02*
1,219±0,01*
1,403±0,01

Примечание: *– достоверные различия с контролем при уровне значимости р0,05.


Хемотаксический ответ нейтрофилов периферической крови здоровых детей на бактерии под влиянием антибиотиков отличался разнонаправленностью. Антибактериальные препараты в той и или иной степени вызывали угнетение хемотаксиса Нф к взвеси суточных культур стафилококка, протея и синегнойной палочки, при этом линкомицин максимально тормозил хемотаксис к стафилококку и синегнойной палочке, а цефотаксим – к протею. Противоположный эффект антибиотики оказывали на хемотаксический ответ Нф к взвеси суточной культуры E. coli. В отличие от грамположительных и других грамотрицательных бактерий, целенаправленная двигательная активность к ней нейтрофилов под действием всех исследуемых антибиотиков увеличивалась. Достоверно более высокий уровень хемотаксической реакции к E. coli инициировал цефотаксим.

Итак, антибиотики инициируют положительную хемотаксическую реакцию нейтрофилов периферической крови здоровых детей, которая совпадает с таковой к живым суточным культурам бактерий, являющихся, как правило, возбудителями хирургической инфекции. При непосредственном контакте с нейтрофилами периферической крови здоровых детей антибактериальные препараты оказывают блокирующее действие на целенаправленную двигательную активность данных клеток. Данный феномен, по нашему мнению, связан с тем, что, антибиотики конкурируют с бактериями и другими хемоаттрактантами за общие рецепторы нейтрофилов, количество которых на покоящихся клетках невелико, вызывая тем самым рецепторную блокаду и ослабление хемотаксической реакции нейтрофилов.

Локомоторная активность нейтрофилов периферической крови пациентов изменялась и после применения антибиотиков по поводу гнойно-воспалительных осложнений травматической болезни. Антибактериальные препаратов усугубляли развивающиеся после механического повреждения нарушения локомоторной функции нейтрофилов (табл. 4). Нами зарегистри-


Таблица 4.

Хемотаксис нейтрофилов периферической крови здоровых детей и пациентов с осложненным течением травматической болезни, получавших антибактериальные препараты


Хемоаттрак-

танты
Статистические

показатели
Здоровые дети,

(n=41)
Индекс хемотаксиса нейтрофилов пациентов с осложненной травмой (n=27), усл.ед.

До приема АБП (контроль)
После приема АБП

С5а-компонент комплемента
M±m
2,19±0,1
1,25±0,03*
1,12±0,001* #

ИЛ-1
M±m
2,32±0,11
1,68±0,01*
1,21±0,05* #

ИЛ-8
M±m
1,92±0,08
1,34±0,004*
1,08±0,01* #

Лейкинферон
M±m
2,13±0,09
1,51±0,005*
1,17±0,001* #

Staphylococcus

aureus
M±m
1,971±0,017
1,856±0,09
1,283±0,001*#

Escherichia coli
M±m
1,356±0,031
1,425±0,02
1,466±0,04

Proteus vulgaris
M±m
1,590±0,038
1,425±0,005*
1,30±0,001* #

Pseudomonas aeruginosa
M±m
1,430±0,031
1,555±0,07
1,236±0,001* #

Примечание: * – достоверные различия с нормой при уровне значимости р<0,001, # – достоверные различия с контролем при уровне значимости р<0,001.


ровано достоверное снижение хемотаксической реакции к С5а, ИЛ-1, ИЛ-8 и лейкинферону, а также к живым суточным культурам стафилококка, протея и синегнойной палочки. Динамика уровня хемотаксиса нейтрофилов к кишечной палочке характеризовалась лишь тенденцией к повышению.

Таким образом, фагоциты, являющиеся универсальным эффектор гомеостаза, в условиях инфекционного воспаления при травме становятся еще и мишенью для негативного воздействия антибактериальных препаратов, что еще раз подтверждает необходимость коррекции функции этих клеток, в том числе и их двигательных нарушений при травматической болезни.

Эти обстоятельства и определили следующую задачу нашего исследования – определить возможность индивидуального подбора ряда иммунотерапевтических препаратов для коррекции нарушений миграционной способности фагоцитов у детей с травмой на основе результатов влияния их различных доз на хемотаксис клеток in vitro.

Исследования проведены у 30 здоровых детей и 91 ребенка с ТБ, которые были разделены на 4 группы: I группа – 30 детей – контрольная (с традиционным лечением), II группа – 30 пациентов получали на фоне традиционного лечения метилурацил (М), III группа – 15 детей, получавших нуклеинат натрия (НН) и IV группа – 25 детей, получавших АТФ.

Подбор больных в группы осуществлялся методом сплошной выборки. Группы сравнения были идентичны по возрасту, полу, характеру и течению травмы, по виду хирургического лечения (χ2>3,841). Выбор препаратов для иммунокорригирующей терапии был обусловлен их доступностью и низкой стоимостью препаратов, широким применением в клинической практике и отсутствием побочных эффектов.

Для оценки кинетикотропного эффекта препаратов in vitro использовали следующие концентрации: метилурацила –2,0, 1,5, 1,0, 0,5 мг/мл; нуклеината натрия – 0,3, 0,23, 0,15, 0,03 мг/мл, АТФ –1,0, 0,75, 0,5, 0,1 мг/мл среды 199. После 3-х (18-ти) часовой инкубации нейтрофилов и моноцитов с препаратом определялась его иммунотропная эффективность по отношению уровня показателя хемотаксиса до и после инкубации клеток с препаратом.

Прежде чем приступить к изучению влияния М, НН и АТФ на кинетическую функцию нейтрофилов и моноцитов периферической крови травмированных пациентов, мы исследовали действие препаратов in vitro на фагоциты здоровых детей.

Почти все исследуемые препараты у здоровых детей вызывали in vitro достоверное угнетение целенаправленной двигательной активности нейтрофилов.

Далее мы сопоставили степень нарушения кинетической функции нейтрофилов и моноцитов во всех исследуемых группах (показатель больного/показатель нормы – 1)  100%) с тяжестью посттравматического эндотоксикоза, оцениваемой по уровню лейкоцитарного индекса интоксикации, являющегося интегральным показателем, отражающим состояние иммунной системы в целом (табл. 5). Степень нарушения локомоторной функции нейтрофилов и моноцитов превышала 40%, что соответствовало второму уровню


Таблица 5.

Степень нарушения локомоторной функции фагоцитов и степень

тяжести эндотоксикоза в исследуемых группах пациентов


Группы пациентов
Нейтрофилы
Моноциты
ЛИИ, усл. ед.

Индекс хемотаксиса, усл. ед
Степень нарушения функции, %.
Индекс хемотаксиса, усл. ед
Степень нарушения функции, %.

Здоровые дети (контроль), n=41
2,19±0,10
–
2,20±0,1
–
1,23±0,13

I (n=30)
1,31±0,01*
40,18±1,09
0,91±0,001*
58,64±3,56
4,39±1,08*

II (n=30)
1,25±0,003*
42,91±2,07
1,2±0,003*
45,45±1,78
3,15±0,38*

III (n=15)
1,2±0,001*
42,92±3,36
1,16±0,001*
46,95±3,16
3,01±0,37*

IV (n=25)
1,27±0,008*
42,15±2,58
1,0±0,001*
54,54±2,28
4,32±0,7*

Примечание: * – достоверные различия с контролем при р<0,01.


изменения данного параметра и позволяло отнести пациентов всех исследуемых групп к иммунологически компроментированным и нуждающимся в назначении иммунокорректоров. Все наблюдаемые нами пациенты имели тяжелую степень эндотоксикоза (ЛИИ превышал 3,0 усл. ед.). При оценке корреляционных взаимоотношений выявлена прямая связь (r= + 0,86, р<0,01) между хемотаксической функцией нейтрофилов и интоксикацией и обратная связь между интоксикацией и хемотаксисом моноцитов (r= – 0,95, р<0,01). Высокий уровень ЛИИ является дополнительным маркером посттравматической иммунодепрессии и подтверждает необходимость назначения корректоров с детоксицирующими свойствами.

Изучение влияния различных концентраций метилурацила, нуклеината натрия и АТФ на кинетическую функцию нейтрофилов и моноцитов периферической крови проводили у детей в острый период травматической болезни.

У всех 30 детей с травматической болезнью, у которых в последующем был применен метилурацил (табл. 6), в острый период обнаружено достоверное (р<0,001) снижение исходного уровня хемотаксиса нейтрофилов к стандартному хемоаттрактанту (С5а-компоненту комплемента) в 1,67 раза (степень изменения показателя – 42,9%), а моноцитов – в 1,86 раза (степень изменения показателя – 45,5%) в сравнении со здоровыми детьми. Лейкоцитарный индекс интоксикации – 3,15 усл. ед.


Таблица 6.

Индекс стимуляции хемотаксической функции фагоцитов различными концентрациями метилурацила in vitro (n=30)


Фагоциты
Индекс стимуляции хемотаксиса фагоцитов (усл. ед.) под действием различных концентраций метилурацила

Концентрация препарата, мг/мл

2,0
1,5
1,0
0,5

Нейтрофилы
1,154±0,08*
1,173±0,08*
1,092±0,1*
1,581±0,1

Моноциты
1,097±0,07*
1,069±0,08*
1,266±0,13
1,568±0,09

Примечание: * – достоверные различия минимальной концентрации препарата с более высокими, при уровне значимости р<0,01.


Максимальным стимулирующим эффектом на сниженную локомоторную функцию, как нейтрофилов, так и моноцитов, обладала минимальная концентрация метилурацила – 0,5 мг/мл, которая эффективно стимулировала угнетенный хемотаксис в 21 наблюдений на модели нейтрофилов и у 19 пациентов – на модели моноцитов. Из них у 9 пациентов кинетическая активность ПМЯЛ и у 5 – моноцитов усиливалась и под влиянием более высоких концентраций метилурацила. Однако, ее уровень не достигал величины показателей хемотаксиса, индуцированного минимальной дозой препарата.

У всех 15 пациентов, которые впоследствии получали НН (табл. 7), в остром периоде после травмы мы также регистрировали достоверное (р<0,001) снижение исходного уровня хемотаксиса нейтрофилов к стандартному хемоаттрактанту в 1,75 раза (степень изменения показателя – 42,9%), а моноцитов – в 2,02 раза (степень изменения показателя – 47%) в сравнении со здоровыми детьми и высокий ЛИИ – 3,01 усл. ед.


Таблица 7.

Индекс стимуляции хемотаксической функции фагоцитов различными концентрациями нуклеината натрия in vitro


Фагоциты
Индекс стимуляции хемотаксиса фагоцитов (усл. ед.) под действием различных концентраций нуклеината натрия

Концентрация препарата, мг/мл

0,3
0,23
0,15
0,03

Нейтрофилы
1,161±0,12*
1,143± 0,11*
1,154±0,13*
1,73±0,13

Моноциты
1,143±0,21*
1,25±0,08*
1,251±0,19
1,75±0,18