Geum.ru

Структура и экспрессия mmtv-родственного провируса у больных раком молочной железы

Вид материалаАвтореферат
Рмжаб, t1n0m0
Список основных работ, опубликованных по теме диссертации
Подобный материал:
1   2   3   4

2.3.11. Экспрессия MMTV-гомологичных последовательностей у человека.

Ранее нами было показано, что обнаруживаемый в сыворотках крови больных РМЖ и некоторых здоровых женщин антиген, иммунологически родственный структурному белку оболочки gp52 транслируется с мРНК env MMTV (Лушникова др. 1998). Поверхностному гликопротеину gp52 отводится важная роль в инфекции Т- и В-клеток. Кроме того, ген env MMTV кодирует тирозинсодержащий аминокислотный мотив иммунорецепторов (ITAM), участвующих в клеточном сигналинге, а в случае их гиперактивации - в неопластической трансформации эпителиальных клеток (Ross et al., 2008 ).

Имеющиеся в литературе данные по экспрессии hMTV основаны на иммуногистохимической окраске срезов ткани РМЖ с использованием антител против gp52, которые были получены с помощью гибридом, экспрессирующих поверхностный и трансмембранный белки - anti MMTV SU и TM. Кроме того, экспрессия анализировалась с помощью нозерн-блоттинга и иммуноблотинга с использованием вирус-специфичных поликлональных антител (Faedo et al., 2004, Indik et al., 2006). Мы попытались проанализировать экспрессию важнейшего для жизненного цикла ретровируса белка gp52 с использованием мышиных моноклональных антител против gp52 MMTV и обратимого связывания их с магнитными частицами, на которых иммобилизованы молекулы IgG (ЗАО Силекс, Москва). Было показано, что концентрация иммунологически родственного gp52 MMTV белка в опухолевой ткани РМЖ достоверно выше, чем в крови, что отражает различия в уровне экспрессии провируса (табл.2).

Таблица 2. Концентрация gp52 MMTV в сыворотке и опухолевой ткани 2 пациенток с РМЖАБ.



Ткань
Диагноз,

стадия

Концентрация конъюгированного с anti- gp52 белка (мкг/мл)

Сыворотка крови/
РМЖАБ, T1N0M0





0,025±0,007

Опухоль,
РМЖАБ, T1N0M0

3,8±0,04



  1. Заключение

MMTV-родственный провирус (hMTV) имеет уникальную структуру. Кроме известных генов gag-pro-pol-env его геном содержит не менее четырех участков, кодирующих функционально важные ретровирусные белки: УТФазу, интегразу, суперантиген Sag и РНК-транспортер (Rem). В геномной ДНК имеется один основной и несколько дополнительных промоторов. Мутации в основном помотере Р1 негативно влияют на инфекционные свойства ретровирусных частиц, однако не нарушают транскрипцию гена env MMTV и сплайсинг мРНК, кодирующей белок gp52 и аминокислотный мотив ITAM с функцией онкобелка. Это обусловливает возможную роль hMTV в индукции неоплазий даже при наличии дефектных вирионов. Вариабельность некоторых областей генома MMTV/hMTV, а также их гомология с эндогенными ретровирусами (Mtv и HERV-K) затрудняют ПЦР-анализ экзогенных MMTV-гомологичных последовательностей в геномной ДНК, выделенной из лимфоидной и опухолевой ткани пациентов с РМЖ и с другими неоплазиями. Зачастую требуются дополнительные методы детекции провирусной кДНК: блот-гибридизация, клонирование ПЦР-продуктов и их секвенирование. Была показана корреляция между наличием транскриптов гена env MMTV и экспрессией в сыворотках крови больных РМЖ антигена, иммунологически родственного gp52. Нами предложен простой метод детекции в сыворотке или в лизате гомогенизированной ткани РМЖ продукта гена env MMTV с помощью моноклональных мышиных антител против gp52 (mabP2 anti-gp52 IgG), связанных с магнитными частицами, на которых иммобилизованы молекулы IgG.


ВЫВОДЫ


1. Геном провируса hMTV, обнаруженного в лимфоидной ткани и в опухолях МЖ человека, содержит консервативные и вариабельные области с высокой гомологией MMTV. Выявлены структурные изменения в области генов gag, gp52-кодирующей области гена env и Sag- кодирующей области 3’LTR, которые влияют на транскрипцию провирусной ДНК и сплайсинг мРНК, а также на инфекционные свойства ретровируса.

2. Доказана роль лимфоидных клеток в циркуляции и диссеминации hMTV у человека. Показана значимость лимфоидной ткани кишечника и лимфатических узлов для депонирования провируса.

3. Специфичные для консервативных областей генома hMTV последовательности обнаруживаются не только в опухолях и лимфоидных клетках пациенток с РМЖ, но и в отдаленных метастазах в головной мозг и печень.

4. Доказана возможность инфекции MMTV первичных и стабильных культур эпителиальных клеток человека in vitro с последующей трансформацией этих клеток. Предложена модель трансформированных клеток эпителия эмбриональной почки человека.

5. Показано случайное распределение сайтов интеграции провируса hMTV в хромосомы эпителиальных клеток в отличие от более специфичных и редких - в лимфоцитах периферической крови.

6. Экспрессия hMTV наблюдается в 60-80% позитивных по ПЦР опухолей МЖ и коррелирует с высоким содержанием эстрогенов/прогестерона (РМЖАБ), а также с нестабильностью генома (наличие герминальных мутаций в генах-супрессорах BRCA1/2).

7. Анализ клинико-патологических особенностей РМЖАБ и спорадического РМЖ обнаруживает тенденции к быстрой прогрессии опухолей, а также к снижению общей и безрецидивной выживаемости в группах hMTV-позитивных пациенток.

8. Предложен способ идентификации иммунологически родственного gp52 MMTV белка в сыворотках крови и в ткани РМЖ, основанный на конъюгации этого белка с антителами, которые связаны с молекулами IgG, иммобилизованными на магнитных частицах.


Список основных работ, опубликованных по теме диссертации:


1.А.А.Лушникова Корреляция между экспрессией антигена, иммунологически родственного gp52 и транскрипцией гомологичных env MMTV последовательностей ДНК в лимфоцитах периферической крови больных раком молочной железы / А.А.Лушникова, И.Н.Крюкова, Т.Ф.Маливанова и др.// Мол.генет.Микробиол. Вирусол. – 1998. - № 3. - С.33-.

2.Лушникова А.А. Экспрессия env MMTV-гомологичных последовательностей в лимфоцитах периферической крови больных раком молочной железы / А.А. Лушникова, Т.Ф. Маливанова, П.Б. Махов и др. // Мол.генет.Микробиол. Вирусол. - 2001. - №2. - С.57- 62.

3. Крюкова И.Н., Лушникова А.А., Махов П.Б. Влияние 5-азацитидина на экспрессию последовательностей ДНК, гомологичных гену env вируса рака молочной железы мышей, в лимфоцитах здоровых доноров / И.Н. Крюкова А.А. Лушникова, П.Б. Махов // Мол.Генет.,Микробиол.,Вирусол. - 2002. - №2. - С.36 - 39.

4. Крюкова И.Н. О возможном участии ретровирусов в индукции рака молочной железы человека / И.Н. Крюкова, А.А. Лушникова, Т.Ф. Маливанова // Вопросы вирусологии. – 2002. - №4. - С.4 - 9.

5. Лушникова А.А. Обнаружение последовательностей, гомологичных гену env MMTV, в лимфоидной ткани кишечника больной раком молочной железы / А.А.Лушникова, И.Н. Крюкова , Д.Л. Ротин, Л.Н. Любченко // Докл.Акад.Наук. - 2004. - Т. 399. - №1. – С. 118-121.

6. Лушникова А.А. Обнаружение env MMTV-гомологичных последовательностей у беременных и кормящих женщин с опухолями молочных желез / Лушникова А.А., Крюкова И.Н., Пароконная А.А., Полевая Е.Б./ Молекулярн. Медицина. - 2006. – №1. – С. 48-52.

7. А.А.Лушникова. MMTV-гомологичные последовательности у мужчин с раком молочной железы и гинекомастией / А.А.Лушникова, И.Н.Крюкова, Е.Б.Полевая, Л.Н.Любченко // Молекулярн. Медицина - 2006.- № 4.- С. 53-56.

8. Л.Н. Любченко. Клинико-молекулярные аспекты наследственного рака молочной железы /Л.Н. Любченко, С.М. Портной, В.В. Брюзгин, Н.И. Поспехова, А.А. Лушникова и др.// Молекулярн. Медицина. – 2007. - № 1. – С. 8-15.

9. Лушникова А.А. MMTV и канцерогенез молочных желез у человека. / А.А.Лушникова // Молекулярн. Медицина. – 2007. - №4. - С.19-26.

10. Пароконная А.А. Прогноз и течение рака молочной железы на фоне беременности и лактации: вирусно-генетические особенности / А.А. Пароконная, А.А. Лушникова, Л.Н. Любченко и др. // Сибирский Онкол. Журн. - 2008. - №2 . - С. 15-20.

11. Пароконная А.А. Неэпителиальная опухоль молочной железы на фоне существующей беременности. Клинико-генетические особенности / А.А. Пароконная, М.И. Нечушкин, И.К. Воротников , А.А. Лушникова и др.// Вестник РОНЦ. - 2008. – Т.19. –№1. – С.71-75.

12.Лушникова А.А. Инфицирование клеток эмбриональных почек человека вирусом рака молочных желез мышей (MMTV) / А.А.Лушникова, И.Н.Крюкова, Л.Н.Любченко, А.А. Пароконная // Доклады Академии Наук. –2009. – Т.424. –№1. – С.130-134.

13. Крюкова И.Н. ММТV-гомологичные последовательности и их экспрессия у больных раком молочной железы в сочетании с лимфомами / И.Н. Крюкова ,А.А.Лушникова, Л.Н. Любченко, А.А. Пароконная // Молекулярн. Медицина. - 2009. – № 2.- С 8-15.

14. Л. Н. Любченко. Клинико-генетический скрининг при опухолях женской репродуктивной системы /Л. Н. Любченко, Н.И. Поспехова, А.А. Лушникова и др.//. Вопросы Онкологии . – 2008. - Т.54. – С. 17-18.

15. Любченко Л.Н., Поспехова Н.И., Пароконная А.А., Лушникова А.А.,

Чевкина Е.М. Рак молочной железы и /или яичников в составе наследственного онкологического синдрома / Л.Н. Любченко, Н.И. Поспехова, А.А.Пароконная, А.А.Лушникова, Е.М.Чевкина// Опухоли женской репродуктивной системы. – 2009. - № 1-2. - С. 59-63.

16. Поспехова Н.И. Двусторонний рак молочной железы в российской популяции: семейная отягощенность, молекулярно-генетические и клинические характеристики /Н.И. Поспехова, А.А.Лушникова, Л.Н.Любченко, А.В.Карпухин// Молекулярн. Медицина. - 2010. - №3. - 9с.

17. Лушникова А.А. Экспрессия VEGFR-2 в опухолевой ткани больных раком молочной железы / Лушникова А.А., Насунова И.Б., Любченко и др..// Доклады Академии Наук. - 2010. - в печати.

18. Lushnikova A. Supposed expression of MMTV-related DNA sequences in peripheral blood lymphocytes of breast cancer patients /A. Lushnikova, P.Makhov, I. Kryukova et al. // Virus Res. – 1997.- V.47.- N2. - P.106.

19. A.A.Lushnikova. Detection of the env MMTV-homologous sequences in Payer’s patches and peripheral blood lymphocytes of familial breast cancer patients /A.A.Lushnikova, I.N.Kryukova, L.N.Lyubchenko// Breast Cancer and Treatment - Dec.2003 - N 12. - P. 78.

20. Lushnikova A.A. A possible role of the env MMTV–homologous sequences in breast cancer carcinogenesis / A.A. Lushnikova, I.N. Kryukova, P.B. Makhov, E.B. Polevaya // Cancer Research - 2003. - N4. - Abstr.327.

21. Lushnikova A. High frequency of the env MMTV – homologous sequences detection in breast cancer patients / A. Lushnikova, A. Parokonnaya, E.Polevaya, I. Kryukova // Clinical Cancer Research. - Dec. 2004. –Р. 234.

22. Lushnikova A. The env MMTV-homologous sequences in familial breast cancer patients and their relatives / A. Lushnikova, I. Kryukova, A. Parokonnaya et al. // Mat. of Milan Breast Cancer Conference, June 2005. – P. 26.

23. Lushnikova A. MMTV-related sequences in male breast cancer and gynecomastia patients / A. Lushnikova, A. Parokonnaya, I. Kryukova, E. Polevaya // European Journ. Of Cancer. – Oct - Nov 2005. – P. 365.

24. L. Lyubchenko. Prognostic factors for BRCA1-associated familial breast cancer from Russian population/ L. Lyubchenko, N. Pospekhova, A. Lushnikova, A.Karpukhin.// European Journ. Of Cancer . - 2005. - V. 3. - N. 2. - P. 322.

25. Kryukova I. MMTV-homologous sequences in breast cancer patients with lymphomas / I. Kryukova, A. Lushnikova , A. Parokonnaya, E. Polevaya // Mat. of the 9-th Int. Conf. on malignant lymphoma, Paris. June 2005. – P. 236.

26. Lushnikova A. MMTV-related sequences expression in the patients with the breast phyllodes tumors / A.Lushnikova, A. Parokonnaya, E.Peredereeva et al. // Breast Cancer and Treatment. - Dec. 2007. – P. 148-149.

27. Lyubchenko L. Clinical and genetics analysis of breast and ovarian cancer patients from Russian population /L. Lyubchenko, A. Lushnikova, N. Pospekhova et al. // Breast Cancer and Treatment. - Dec. 2007. – P. 123-124.

28. Parokonnaya A. Molecular genetics analysis of the breast cancer patients during pregnancy and lactation / A. Parokonnaya, A. Lushnikova, L. Lyubchenko, I. Kryukova // VII Milan Breast Cancer Conference. - 2007. – Abstr. 20323.

29. Lushnikova A.A. MMTV involves into breast cancer progression during pregnancy and lactation /.A. Lushnikova, L. N. Lyubchenko, A.A. Parokonnaya , E.G. Peredeeva // J.Virology. - Mat. оf the Third European Congress of Virology, Nurnberg, Germany, 1-5 Sep. 2007. – Abstr. # 01232.

30. L.N.Lyubchenko / BRCA1 and TP53 mutations in pregnancy-associated breast cancer in Russian patients /L.N.Lyubchenko,N.Pospekhova, A.A.Lushnikova et al. // Annals of Oncology/ - 2009 / - Suppl.- Abstr. #307.

31. A.A.Lushnikova. MMTV-homologous sequences revealed in feline breast cancer tumors /A.A.Lushnikova. , A.A.Preobrazenskaya, V.A.Pavlov, S.V.Zontov //Cancer Research, Suppl. 32 SABCS Abstract Book. - Dec. 2009 – Abst. #1486SABCS09D1.