Ослин навчальний посібник до лабораторних занять з фізіології рослин для студентів біологічного факультету Видавництво поліграфічний центр "Київський університет" 2004
| Вид материала | Документы |
- Мусієнко М. М., Панюта О. О. Біотехнологія рослин. Навчальний посібник, 5445.72kb.
- Ділова іноземна мова" для студентів геологічного факультету (магістрів V-VI курсів), 329.16kb.
- Савицький В. М., Хільчевський В. К., Чунарьов О. В., Яцюк, 2100.06kb.
- Вченої ради біологічного факультету протокол №11 від 25 квітня 2005, 115.21kb.
- Тематичний план занять «Патофізіологія ендокринної та нервової систем» Для студентів, 1055.52kb.
- Київський університет туризму, економіки І права «Основи готельного менеджменту», 5077.65kb.
- Полтавський національний педагогічний університет імені В. Г. Короленка Історичний, 675.02kb.
- Практикум з педагогіки вищої школи: Навчальний посібник за модульно-рейтинговою системою, 411.72kb.
- Навчальний посібник для студентів філологічних спеціальностей вищих педагогічних навчальних, 3345.03kb.
- Практичний курс англійської мови навчальний посібник з практики усного та письмового, 5352.9kb.
Анатомічна будова органів ряски малої, як представника вільноплаваючих плейстофітів.
Листець. Під час еволюції найвищої гідрофільності серед плейстофітів досягли рослини з родини Ряскових. Це найменші квіткові рослини, які вільно плавають на поверхні води. Тіло у них не диференційоване на стебло і листок, а являє собою особливу структуру, яка виконує функцію обох органів – так званий листець (рис.13).
Рис. 13. Листець (1) та корінець (2) ряски малої: а – міжклітинна порожнина; б – хлоренхіма; в – корінець; г – центральний циліндр.
Листець ряски малої вкритий тонким епідермісом, в якому на верхньому боці розташовано до 90-95 продихів на 1 мм2. У нижньому епідермісі продихів немає. Листеці складаються більшістю із паренхімних клітин хлоренхіми, які поділені великими міжклітинними порожнинами, що заповнені повітрям.
Корінь. У ряски малої лише один корінець, який не має кореневого чохлика. Провідної системи майже немає. Механічна система редукована. Всередені розташований центральний циліндр (рис.13). Ззовні корінець вкритий одношаровою епідермою.
Анатомічна будова рдесника, як представника
гідатофітів.
Стебло. Під тонкостінною епідермою майже без кутикулярної плівки міститься однорідна асиміляційна паренхіма з великими повітряними порожнинами (рис.14).
Повітря заповнює понад 65 % об’єму міжклітинних ходів і внутрішніх порожнин, надаючи рослинам плавучості. Провідні тканини сконцентровані в центрі стебла і слабко розвинені порівняно з наземними рослинами. Механічних тканин у гідатофітів практично немає, бо вони існують у водній товщі, де висока щільність води гарно утримує їхні органи на плаву. Розташовані вони в центрі стебла. Така специфічна будова забезпечує рослинам міцність від можливих розривів і сприяє можливості чинити опір руйнівній силі водних течій.
Листок. У гідатофітів газообмін і мінеральне живлення відбуваються у водному середовищі під час всмоктування води, розчинених в ній речовин і газів всією поверхнею. У зв’язку з цим, необхідність в продихах, як в особливому апараті газообміну, зникла. Транспірації у гідатофітів немає. Виділення води листками відбувається крізь апікальні отвори, або так звані водні продихи (гідатоди). У гідатофітів змінена будова покривних тканин. Немає зовсім, або слабко розвинена кутикула. Кутикула і одношарова епідерма занурених рослин в 5-20 разів більш проникні для газів, ніж у наземних рослин. Листки дуже тонкі, сильно розсічені. Така будова листків забезпечує найбільшу поглинальну поверхню. Під тонкою епідермою розташований одно-двошаровий недиференційований мезофіл (рис.15).
Рис. 14. Стебло рдесника (поперечний розріз, збільшення 80): 1 – епідерма; 2 – паренхіма; 3 – аеренхіма; 4 – провідні пучки.
Рис. 15. Листок рдесника (поперечний розріз, збільшення 160): 1 – верхня епідерма; 2 нижня епідерма; 3 аеренхіма; 4 – провідний пучок; 5– мезофіл.
В листках немає повітряних порожнин, але гарно розвинені міжклітинники. Характерною особливістю гідатофітів є наявність хлоропластів в епідермі, завдяки чому вона виконує не лише покривну, а й асиміляційну функцію. Механічна система дуже редукована, залишається лише в центральній жилці листка. Провідна система майже не розвинена.
Корінь. Коренева система цих рослин розвинена слабко, і, здебільшого відіграє роль прикріплення до субстрату. Галуження коренів незначне, кореневих волосків немає. Механічні й провідні системи дуже редуковані.
Методи цитофізіологічних досліджень
водних рослин.
В процесі еволюції у клітинах всіх живих організмів вироблений механізм типового неспецифічного реагування –загальна неспецифічна реакція на пошкоджуючу дію, проявом якої є однотипні зміни: зменшення дисперсності колоїдів цитоплазми, збільшення спорідненості цитоплазми і ядра до ряду барвників, зміна клітинної проникності, підвищення кислотності цитоплазми, зміна здатності до гранулоутворення. Згідно денатураційної теорії всі ці прояви неспецифічної реакції зумовлені зворотною денатурацією протеїнів, які є складовою протоплазми клітин.
Сьогодні більшість положень денатураційної теорії уточнені та конкретизовані з позицій сучасних досягнень біології. Згідно цих уявлень, неспецифічна відповідь клітин на пошкоджуючий агент зумовлена загальними для них особливостями структурно-функціональної організації. Це, по-перше, нерівномірність просторового розподілу низькомолекулярних органічних сполук: цукрів, амінокислот, нуклеотидів, жирних кислот по всій клітині (компартменталізація); по-друге - неспецифічне інгібування біологічної активності макромолекул низькомолекулярними клітинними субстратами. Зсув рівноваги між активним транспортом низькомолекулярних сполук та їх дифузією, який спричинює декомпартменталізацію клітинних субстратів та інгібування ними метаболізму – основні фактори, які зумовлюють неспецифічну реакцію клітини [Александров В.Я., 1985].
У відповідь на дію модельного токсиканту в клітині відбувається цілий комплекс змін, які характеризують її загальну неспецифічну реакцію. Деякі з цих змін можна вимірювати і, завдяки цьому, використовувати як маркери на дію токсичних речовин. Це, насамперед, зміни в’язкості цитоплазми, бубнявіння хлоропластів, зміни проникності мембран та зсув іонного балансу, зменшення дисперсності колоїдів цитоплазми, зміна форми клітини, збільшення спорідненості цитоплазми і ядра клітини до ряду барвників, зміна процесу грануловідкладання вітальних барвників та процес дифузного забарвлення протоплазми.
Всі ці неспецифічні реакції клітини, що легко реєструються під мікроскопом, за якими можна робити висновок про стан їхньої життєдіяльності і про пошкодження в його початковій оборотній фазі, мають суттєве значення в цитоекологічних дослідженнях.
Робота № 12. Визначення структурної в’язкості протоплазми плазмолітичним методом.
Теоретичні передумови. В’язкістю називають властиву для рідин здатність чинити опір переміщенню одних її часток, щодо інших. Вона зумовлена тертям між молекулами під час їхнього руху. На відміну від звичайних рідин, протоплазмі властива структурна в’язкість, під якою розуміють існування певної внутрішньої структури і взаємної орієнтації складових компонентів. Згідно з даними А.Фрей-Вісслінга, протоплазма одночасно має ознаки рідини (текучість) і твердого тіла (еластичність), що проявляється в безперервній зміні сил зчеплення між біоколоїдами. Відповідно, протоплазма періодично стає або рідшою (золь), або густішою (гель). Ця властивість тісно пов’язана з процесами життєдіяльності клітини та її біохімічною активністю.
Про в’язкість протоплазми роблять висновок за часом, який пройшов з моменту занурення клітин у гіпертонічний розчин до появи опуклої форми плазмолізу. Чим більший цей час, тим вища в’язкість протоплазми. Незважаючи на недосконалість методу його широко використовують для первинної оцінки різних впливів на структуру протоплазми.
Мета роботи –виявити мінливість в’язкості протоплазми залежно від типу та віку клітин.
Матеріали та обладнання. Гілочки елодеї, 0,6 М розчин сахарози, лезо бритви, препарувальна голка, пінцет, мікроскоп, предметні та накривні скельця.
Хід роботи. Роботу зручно проводити з молодими листочками елодеї, оскільки у них чітко розрізняються чотири зони: в основі міститься зона поділу клітин (слабко забарвлена), вище зони поділу розташована зона розтягнення, ще вище – зона диференціації, а зелена верхівка листка складається з старих клітин, які закінчили ріст.
З верхівкової частини гілочки елодеї відбирають кілька листочків, що мають світло-зелену основу та інтенсивне зелене забарвлення у верхній частині. Їх занурюють у краплину розчину сахарози на предметному склі і накривають накривним скельцем. Записують час початку досліду. Через кожні п’ять хвилин ведуть спостереження за змінами, які відбуваються в клітинах. Визначають час плазмолізу, звертаючи увагу на швидкість процесу у різновікових клітинах елодеї.
Дані записують у таблицю:
| Об’єкт, зона росту | Плазмоліз(час/форма) | ||||||
| 5 хв | 10 хв | 15 хв | 20 хв | ||||
| Угнутий | Опуклий | Угнутий | Опуклий | Угнутий | Опуклий | Угнутий | Опуклий |
| Елодея: | | | | | |||
| Основа листка | | | | | |||
| Зона розтягнення | | | | | |||
| Зона диференціації | | | | | |||
| Верхівка листка | | | | |
Роблять висновок про залежність в’язкості протоплазми від віку клітин.
Робота № 13. Визначення в’язкості протоплазми водних рослин
методом центрифугування.
Теоретичні передумови. Однією з важливих фізико-хімічних властивостей цитоплазми є в’язкість. На відміну від в’язкості звичайних рідин в’язкість цитоплазми зумовлена внутрішньою організацією всіх її складових частин, її ультраструктурою. Опір, який чинять рухові частинок лабільні елементи структури рідини, називають структурною в’язкістю. В’язкість цитоплазми легко змінюється під впливом зовнішніх факторів: температури, вологості, мінерального живлення, тощо. За нею можна робити висновок про ступінь стійкості колоїдів цитоплазми. Іони кальцію і алюмінію підвищують в’язкість цитоплазми, а іони калію, навпаки, збільшуючи дисперсність колоїдів цитоплазми, зменшують її в’язкість.
В’язкість цитоплазми має велике значення для виживання рослин в умовах високих температур і нестачі води в навколишньому середовищі. Особливого значення вона набуває для гідрофітів під час тимчасового пересихання водойм.
В’язкість цитоплазми залежить від зовнішніх і внутрішніх факторів, віку, фази онтогенезу, характеру екотопу тощо. Її визначають різними способами. Одним із них є метод центрифугування. В основу методу центрифугування покладено рівняння Стокса. За цим рівнянням швидкість падіння кульки (при сталому радіусі) обернено пропорційна в’язкості рідини. Мірою структурної в’язкості цитоплазми може бути та мінімальна величина відцентрового прискорення в одиницях q, за якою центрифугування протягом 10-20 хв зумовлює зміщення хлоропластів у 50 % клітин.
Відцентрове прискорення визначають за відношенням відцентрової сили до сили тяжіння:
де N- кількість обертів центрифуги за секунду; r – радіус центрифуги; q –прискорення сили тяжіння (981 см/с2).
Для порівняння дослідів визначають відносну в’язкість цитоплазми. Мірою її може бути кількість обертів центрифуги, яка потрібна для однакового зміщення хлоропластів. У навчальних лабораторіях для цього зручно використовувати малогабаритні центрифуги ЦУМ-1 або ЦЛН-2.
Мета роботи. Визначити в’язкість цитоплазми в листках водних рослин за дії різних температур методом центрифугування.
Матеріали і обладнання: водні рослини – елодея, наяда, валіснерія; малогабаритна центрифуга, мікроскоп, предметні стекла і накривні скельця, бритва, пінцет, препарувальна голка, піпетки, прoбірки; етиловий спирт з кількома краплинами концентрованої оцтової кислоти, ефір.
Хід роботи. Для вивчення впливу температури на структурну в’язкість протоплазми по кілька листочків елодеї, наяди і валіснерії кладуть на 30 хвилин у скляночки з водою і вміщують: перші - в холодильник при температурі 2оС, другі - в термостат з температурою 30оС, а треті залишають при кімнатній температурі. Потім у центрифужні пробірки наливають води, кладуть по 4-5 листочків і центрифугують протягом 10 хв з різною швидкістю: 1000, 2000 і 3000 об/хв. Після центрифугування листочки виймають, швидко опускають у фіксуючу рідину (як фіксатор можна використовувати етиловий спирт з кількома краплинами концентрованої оцтової кислоти), промивають водою і розглядають під мікроскопом. В тих листочках, де в результаті центрифугування в полі зору мікроскопа виявляють зміщення хлоропластів в 50 % клітин, обчислюють структурну в’язкість цитоплазми.
Переглянувши листочки під мікроскопом, знову кладуть їх на 10 хв у пробірки, наповнені водним розчином ефіру, і ще раз центрифугують протягом 15 хв. Під дією ефіру цитоплазма відмирає, в’язкість її при цьому різко знижується, що виявляється у дуже швидкому переміщенні хлоропластів.
З добутих результатів виводять середні показники, записують їх у таблицю за такою схемою:
| Варіанти досліду | Час плазмо-лізу, хв | Процент зміщення хлоропластів після 10-хв. центрифугування | Структурна в’язкість | ||
| 1000 об/хв | 2000 об/хв | 3000 об/хв | |||
| Вид рослини елодея, наяда, валіснерія Темпера-тура: кімнатна 2о С 30о С | | | | | |
Роблять висновок про вплив температури на структурну в’язкість протоплазми та видову специфічність стійкості водних рослин до дії температури.
Робота № 14. Визначення швидкості руху хлоропластів в клітинах
вищих водних рослин за методом Н.М.Смірнової, Л.Я.Сіренко .
Теоретичні передумови. Одним з показників, що характеризує забезпеченість клітини енергією (АТФ), є наявність руху цитоплазми. За сприятливих умов цитоплазма рослинних клітин постійно рухається. На зовнішні й внутрішні впливи клітина відповідає змінами цього руху, його швидкості. Зміни рухливості цитоплазми пов`язують із зміною проникності поверхневої мембрани до іонів, або інших токсичних сполук, які можуть бути активаторами або інгібіторами АТФ-ази і впливати на рівень АТФ у клітині. Вважають, що зміни внутрішньоклітинної концентрації АТФ, зумовлені дією пошкоджуючих агентів, впливають на організацію актиноподібних філаментів цитоплазми, що в свою чергу спричинює зміни в`язкості цитоплазми і швидкості її руху.
Для спостереження руху цитоплазми краще використовувати водні рослини (валіснерію, елодею, наяду ), які на препараті залишаються у своєму природному середовищі. Найбільш придатним для використання в якості цитофізіологічного показника є ротаційний рух протоплазми, який здійснюється уздовж клітинних стінок. Рухаючись, цитоплазма захоплює з собою великі органели – хлоропласти, а іноді і ядро, завдяки яким полегшується спостереження за змінами швидкості цього руху. Характерною особливістю ротаційного руху є те, що цитоплазма рухається в одному напрямі, ніби обертається навколо центра клітини. Швидкість цього руху, як в нормі, так і під впливом токсичних речовин легко виміряти за допомогою секундоміра та окуляр-мікрометра. Лінійна швидкість руху під час ротації в нормі не висока: так у валіснерії при температурі 18 –23о С вона являє величину порядку 10-20 μ /с, елодеї –10-15 μ /с, наяди – 15-20 μ/с.
Рух у непошкоджених внутрішніх клітинах розпочинається не відразу після препарування, але розпочавшись, на препараті триває днями зберігаючи початкову швидкість до смерті клітини.
Для спостереження за рухом цитоплазми в клітинах гідрофітів не потрібно виготовляти зрізи, оскільки тканини цих рослин складаються лише з кількох шарів клітин, кожний з яких можна мікроскопіювати.
Метод може бути застосований неодноразово на тих самих клітинах, а це важливо при вивченні змін пошкодженої клітини в часі, тоді як багаторазове використання деяких інших методів неможливе, або може призвести до небажаного викривлення результатів ( наприклад багаторазовий плазмоліз).
Визначення наявності та швидкості руху цитоплазми не потребує довготривалості експерименту, його можна використати для вивчення первинної чутливості клітин.
Метод має кількісний вираз за п’ятибальною шкалою визначення ступеня токсичності водного середовища ( від нетоксичного до летального), який дає змогу градуювати токсичність водного середовища в межах п’яти груп по відношенню саме до біологічної складової водойми.
Мета роботи. Оцінити вплив різних концентрацій модельного токсиканта (біхромату калію) на швидкість руху хлоропластів в клітинах водних рослин.
Матеріали і обладнання. Водні рослини (валіснерія, елодея та наяда); біхромат калію; мікрометр, секундомір, світловий мікроскоп, склянки на 100 мл, предметні стекла та накривні скельця, піпетки на 10 мл, мірні колби на 100 мл.
Хід роботи. Дослідні рослини (валіснерія, елодея, наяда ) експонують в розчинах модельного токсиканту (К2Cr2O7) різної концентрації (0,01; 0,1; 1,0 мг/л, або ін.) на світлі протягом 1 год. Після закінчення експозиції з листків рослин готують тимчасові препарати і під світловим мікроскопом проводять спостереження. У рослин елодеї та наяди використовують верхівкові пагони, у валіснерії – частину рослини біля основи, де розташовані молоді клітини, що зберігають рух цитоплазми. Швидкість руху вимірюють за допомогою окуляр-мікрометра, фіксуючи час проходження хлоропластом однієї, або кількох поділок за допомогою секундоміра. Швидкість руху хлоропластів обчислюють за формулою:
V= S / t , де
V – швидкість руху хлоропластів, відносні одиниці / с,
S – відстань яку проходить хлоропласт , відносні одиниці,
t – час, за який хлоропласт проходить певну відстань, с.
Про токсичну дію різних концентрацій модельного токсиканта роблять висновок за відхиленням величини швидкості руху цитоплазми у рослин, проекспонованих у досліджуваній воді, від подібних значень у контрольних рослин.
Прояв токсичної дії визначають п`ятьма групами:
Перша – немає токсичності (80-120%),
Друга – слабка токсичність (59-80, 120-150 %),
Третя – середня токсичність (20-50, 150-180 %),
Четверта – висока токсичність (10-20,180-250 %),
П’ята – летальна токсичність (0-10, більше 250 %).
Дані записують у таблицю:
| Об’єкт досліджень | Концентрація K2Cr2O7 , мг/л | Час руху хлоропластів, с | Швидкість руху цитоплазми, відн. од./с | Швидкість руху цито-плазми, % до контролю | Відхилення від контролю, % | Ступінь токсичності | Група токсичності |
| | | | | | | | |
Роблять висновки.