Лечебный Фитоцентр «феникс»
| Вид материала | Документы |
Содержание4.4. Исследование антиоксидантных свойств Флараксина и активности аминотрансфераз в крови больных, пролеченных флараксином. |
- Пособие для врачей Издание третье, переработанное и дополненное Ответственный редактор, 4797.24kb.
- Учебная программа для специальности: 1-79 01 01 Лечебное дело Факультет: лечебный, 388.42kb.
- Рабочая программа практических занятий по основам психотерапии лечебный и педиатрический, 29.04kb.
- Чжуанцзы Глава 1 странствия в беспредельном, 2827.87kb.
- Учебники и учебные пособия». Ростов-на-Дону: «Феникс», 8462.24kb.
- Утверждаю: Директор ООО «Феникс-Маркет» /Зайцев А. М/ Расценки на монтаж и ремонт оборудования, 43.53kb.
- Занятия лфк оказывают лечебный эффект только при правильном, регулярном, длительном, 202.6kb.
- Первые бортовые ЭВМ ракетно-космических комплексов Глава из книги Б. Н. Малиновского, 437.67kb.
- Тематический планы лекций по специальности 060101 лечебное дело (лечебный факультет, 7.31kb.
- Всвязи с этим приобретает значение разработка физических методов лечения, обеспечивающих, 21.9kb.
4.4. Исследование антиоксидантных свойств Флараксина и активности аминотрансфераз в крови больных, пролеченных флараксином.
Определение активности аминотрансфераз в сыворотке крови больных онкопатологией и при лечении флараксином показало (табл.4.8), что при онкопатологии возрастает активность как аспартат-, так и аланин- аминотрансферазы по сравнению со здоровыми донорами (табл.4.9 ).
Таблица 4.8. Активность аминотрансфераз сыворотки крови
больных людей и при лечении Флараксином (мкМоль/мл за 1 час).
| № ПП | Ф.И.О. | До лечения | После лечения | ||
| Аст | Алт | Аст | Алт | ||
| 1 | Панченко А.Г. | 1,96 | 1,96 | 2,62 | 3,72 |
| 2 | Коваленко | 1,30 | 2,40 | 3,06 | 4,83 |
| 3 | Савичева | 0,86 | 0,64 | 3,50 | 2,62 |
| 4 | Хатункина | 0,64 | 2,21 | 3,50 | 3,06 |
| 5 | Джунковский | 1,06 | 2,40 | 2,84 | 3,72 |
| 6 | Кмитинский | 0,20 | 0,75 | 1,96 | 4,82 |
| 7 | Коваленко | - | - | 3,06 | 4,83 |
| 8 | Гурьянов | - | - | 1,52 | 2,28 |
| 9 | Кулик | - | - | 2,67 | 5,26 |
| 10 | Ирабилина | 1,52 | 0,64 | - | - |
| 11 | Ленк | 2,20 | 0,86 | - | - |
| 12 | Хоменко | <- | - | 1,51 | 3,3 |
| 13 | Зозуля | 2,18 | 0,42 | - | - |
| 14 | Горобец | - | - | 2,84 | 1,08 |
| Среднее | 1,33 | 1,36 | 2,64** | 3,59** | |
Примечание: ** - p < 0,01 (по сравнению с больными).
Таблица 4.9. Активность аминотрансфераз в сыворотке крови здоровых доноров. n = 4.
| Аспартат-аминотрансфераза | 0,49 |
| Аланин-аминотрансфераза | 0,80 |
Примечание: Активность ферментов определяли с помощью стандартных наборов фирмы "Хемапол" (ЧССР).
Это может быть обусловлено нарушением целостности биомембран (прежде всего, клеток печени) у онкологических больных.
Лечение Флараксином приводит к еще большему росту ферментативной активности в сыворотке (табл. 4.8.). Это можно объяснить либо еще большим повреждением биомембран, либо стимуляцией ферментов непосредственно ФЛАРАКСИНОМ, находящимся в сыворотке. Для проверки второго предположения были проведены опыты по определению возможного влияния ФЛАРАКСИНА на активность аспартат-и аланин-аминотрансфераз в сыворотке крови здоровых людей в условиях in vitro (табл. 4.10.).
Таблица 4.10. Влияние Флараксина на активность аминотрансфераз сыворотки крови здоровых людей в условиях in vitro n=3.
| Фермент | Контроль | Флараксина | Контроль | Флараксинб |
| Аст | 0.53 | 0.86* | 0,31 | 1.41** |
| Алт | 0,64 | 2,57** | 1,08 | 1,19 |
Примечания: * - p<0,05; ** - p<0,01 (по сравнению с контролем);
а - 2мг Флараксина + 0,05мл сыворотки;
б - 0,01мг Флараксина + 0,05мл сыворотки.
Приведенные данные свидетельствуют о том, что находящийся в крови леченых больных Флараксин может вызывать неспецифическое повышение ферментативной активности. Возможно, это обусловлено взаимодействием Флараксина с молекулами ферментов, приводящим к раскрытию дополнительных активных центров, что ведет к повышению их активности.
Активность аминотрансфераз отражает функциональное состояние клеток печени/(20). В качестве критерия, определяющего целостность субклеточных структур гепатоцитов, определяли интенсивность процессов Перекисного Окисления Липидов (ПОЛ).
Требовалось также выяснить, связан ли лечебный эффект Флараксина с его возможными антиоксидантными свойствами.
Учитывая вышеизложенное, в опытах на животных было изучено влияние Флараксина на интенсивность процессов ПОЛ в гомогенатах печени.
В работе использовали крыс линии «Вистар» весом 150-200г (3 мес.). Флараксин вводили в физиологическом растворе внутривенно в дозе 4 (терапевтическая доза) и 40 мг/кг массы тела. Через 2 часа животных декапитировали и 1г печени гомогенизировали в 5мл раствора 0,25 М сахароза, 3мМ ЭДТА. В гомогенатах определяли содержание белка по методу Лоури и соавт. (21) и скорость накопления Малонового Диальдегида (МДА) (22). Определяли интенсивность НАДФН- и аскорбат-зависимого переокисления (НЗП и АЗП, соответственно), ферментативную составляющую НЗП (НЗП, ), а также неинициированного ПОЛ. Результаты выражали в нмоль МДА/мг белка гомогената. Результаты исследования представлены в таблице 4.11.
Таблица.4.11. Влияние Флараксина на скорость накопления МДА в гомогенатах печени интактных крыс (нмоль/мг белка) n=8-13.
| Показатели ПОЛ | Контроль | Флараксин | |
| 4 мг/кг | 40 мг/кг | ||
| НЗП | 12419,9 | 8049,3* | 13535,1 |
| НЗП, | 6819,6 | 5226,0 | 9520,0* |
| АЗП | 6335,3 | 5429,5 | 4277,3 |
| Неинициир.контроль | 0 | 0 | 195,9* |
Примечание:В качестве контроля использовали интактных животных; * - р < 0,05 (по сравнению с контролем).
Установлено, что Флараксин в терапевтической дозе обладает антиоксидантным действием, вызывая снижение инициированного ПОЛ, особенно выраженное в случае НАДФН-зависимого липопереокисления.
Более высокая доза Флараксина, наоборот, вызывает стимуляцию ПОЛ (в особенности НЗП, и неинициированное ПОЛ), связанную, возможно, с повреждением субклеточных структур гепатоцитов данным препаратом.
Осталось невыясненным, связано ли подобное антиоксидантное действие Флараксина с его непосредственным влиянием на процессы ПОЛ в клетках печени, либо оно опосредуется влиянием других метаболических систем организма.
В связи с этим, нами было изучено влияние Флараксина на процессы ПОЛ в гомогенатах печени в условиях in vitro (то есть, при отсутствии влияния регуляторных систем организма.)
Результаты определения влияния Флараксина на процессы ПОЛ в гомогенатах печени интактных крыс в условиях in vitro приведена в Таблице 4.12.
Таблица 4.12. Влияние Флараксина на скорость накопления МДА в гомогенатах печени интактных крыс (нмоль/мг белка) в условиях in vitro (n = 4).
| Показатели ПОЛ | Контроль | Флараксин | |
| 0,25 мг/мл | 7,5 мг/мл | ||
| НЗП | 6689,4 | 2614,3* | 2800,0* |
| НЗП, | 4628,7 | 132,2* | 716,7* |
| АЗП | 5808.6 | 181.1* | 96,0* |
| Неинициир. контроль | 623,5 | 397,4* | 804,9 |
Примечания: НЗП-НАДФН-зависимое ПОЛ (перекисное окисление липидов);
НЗП, - зависимая от нагревания составляющая этого процесса;
АЗП-аскорбат-зависимое ПОЛ;
* - р < 0,05 (по сравнению с контролем).
Как видно, Флараксин, добавленный к гомогенатам печени, вызывает резкое подавление процессов индуцированного НАДФН и аскорбатом ПОЛ. Что касается неинициированного ПОЛ, то в этом случае антиоксидантное действие этого вещества обнаружено только при меньшей концентрации препарата (0,2 мг/мл).
Приведенные результаты показывают, что антиоксидантное действие Флараксина на процессы ПОЛ в печени обусловлено непосредственным влиянием препарата на эти процессы без участия регуляторных систем организма. Сравнивая эти результаты с данными о влиянии Флараксина на процессы ПОЛ в печени в условиях in vivo, можно видеть, что in vitro антиоксидантный эффект проявляется в большей степени. Одной из причин подобного несоответствия может быть возможное разложение препарата в организме, и, как следствие этого, действие на процессы ПОЛ в организме метаболитов Флараксина с менее выраженными антиоксидантными свойствами. В случае правильности подобного предположения можно рекомендовать применение стабилизаторов данного препарата при его использовании в качестве антиоксиданта в условиях целостного организма.
В данной работе изучали действие Флараксина на изменение интенсивности ПОЛ в гомогенатах печени крыс в условиях интоксикации тетрахлорметаном (1 ЛД50). Флараксин вводили одновременно с ядом в терапевтической дозе - 4 мг/кг массы тела. Среди крыс, отравленных тетрахлорметаном, не получавших Флараксин, доля выживших животных составила 40%, а среди получавших Флараксин - 67,7%. Через 2 ч после введения яда в гомогенатах печени растет количество продуктов ПОЛ - диеновых конъюгатов в гептановом слое липидного экстракта (табл.4.13).
Таблица 4.13. Влияние Флараксина на содержание диеновых конъюгатов (нмоль/мг белка) в гомогенатах печени крыс при отравлении тетрахлорметаном (n=10-12).
| Гептановый слой | Изопропанольный слой | ||||
| Контроль | Тетрахлор-метан | Тетрахлорметан + Флараксин | Контроль | Тетрахлор-метан | Тетрахлорметан + Флараксин |
| 55,9 | 122,7* | 113,4* | 833,0 | 794,3 | 561,8 |
Примечание: * - p < 0,05 (по сравнению с контролем); результаты обрабатывали методами непараметрической статистики, не требующими вычисления m.
Введение Флараксина несколько снижает количество продуктов ПОЛ (на 7,7%), однако их количество остается повышенным по сравнению с контролем. В изопропанольном слое липидного экстракта антиоксидантный эффект Флараксина проявляется в снижении на 32,6% количества диеновых конъюгатов по сравнению с контролем.
Таким образом, установлено гепатопротекторное действие Флараксина при отравлении животных тетрахлорметаном. Это действие связано с антиоксидантным эффектом Флараксина.
Итак, результаты проведенных исследований свидетельствуют о наличии у Флараксина значительной антиоксидантной активности, в особенности в условиях in vitro, превосходящей активность классических антиоксидантов, в частности, -токоферола. Активность препарата в условиях in vitro выражена в гораздо меньшей степени. Антиоксидантные свойства Флараксина обусловливают его гепатопротекторный эффект в условиях интоксикации тетрахлорметаном.