Лечебный Фитоцентр «феникс»

Вид материала

Документы

Содержание Изучение антирадикальной активности Флараксина и терапевтических препаратов противоопухолевого действия Влияние Флараксина и Проспидина на микровязкость общих липидов эритроцитов I - флараксин, 2 - проспидин

Подобный материал:

• Пособие для врачей Издание третье, переработанное и дополненное Ответственный редактор, 4797.24kb.
• Учебная программа для специальности: 1-79 01 01 Лечебное дело Факультет: лечебный, 388.42kb.
• Рабочая программа практических занятий по основам психотерапии лечебный и педиатрический, 29.04kb.
• Чжуанцзы Глава 1 странствия в беспредельном, 2827.87kb.
• Учебники и учебные пособия». Ростов-на-Дону: «Феникс», 8462.24kb.
• Утверждаю: Директор ООО «Феникс-Маркет» /Зайцев А. М/ Расценки на монтаж и ремонт оборудования, 43.53kb.
• Занятия лфк оказывают лечебный эффект только при правильном, регулярном, длительном, 202.6kb.
• Первые бортовые ЭВМ ракетно-космических комплексов Глава из книги Б. Н. Малиновского, 437.67kb.
• Тематический планы лекций по специальности 060101 лечебное дело (лечебный факультет, 7.31kb.
• Всвязи с этим приобретает значение разработка физических методов лечения, обеспечивающих, 21.9kb.

Изучение антирадикальной активности Флараксина и терапевтических препаратов противоопухолевого действия

Ранее нами была показана способность Флараксина тормозить перекисное окисление липидов (10). Однако, определение Перекисного Окисления Липидов (ПОЛ) спектрофотометрическим методом по изменению поглощения диеновых конъюгатов не совсем корректно ввиду сложности электронной структуры компонентов Флараксина и изменению спектральных параметров (_max, D_) при взаимодействии. В настоящем исследовании показана способность Флараксина, вещества-основы (ВО), а также «Циклофосфана», «Проспидина» служить ловушкой стабильного радикала Три-Фенил-Вердазина (ТФВ). Исследование проводили в спиртовом растворе ТФВ (концентрация С=10^-4 моль/л) в области полос поглощения _max=402нм и 740нм не перекрывающейся со спектрами ФАВ. Долю нейтрализованного свободного радикала при добавлении в раствор ФАВ определяли как отношение D/D₀, где D - изменение оптической плотности D₄₀₂ или D₇₄₀ за время  (час), D₀ - оптическая плотность исходного раствора ТФВ. На Рис.4.5(а) приведены зависимости концентрации нейтрализованного ТФВ (, %) от количества добавленного Флараксина (1) или ВО (2) за время инкубации 10 мин, из которого видно, что Флараксин с большей эффективностью связывает свободный радикал ТФВ, особенно при малых (<3 мг/мл) концентрациях. Нами была изучена кинетика взаимодействия ТФВ с ФАВ. На Рис.4.5(б) приведены величины связываемого радикала (С_ФАВ=5 мг/мл).

Рис 4.5. Зависимость концентрации нейтрализованного ТФВ от количества добавленного Флараксина или вещества-основы Флараксина ВО (а). Кинетика связывания свободного радикала (б)
а: 1-Флараксин, 2-вещество основа ВО б: 1-Флараксин, 2-Сальвин, 3-ВО, 4-Аскорбиновая к-та
Среда: 5% глюкоза.

во времени при смешивании его с Флараксином (1), ВО (2), а также известными антиоксидантами - Сальвином (3 и13) и Аскорбиновой кислотой. Как можно видеть, аскорбиновая кислота в течение 2-х часов (а также через 48 часов) нейтрализует практически полностью (95%) ТФВ, а затем идет обратный процесс регенерации радикала на 80%. Циклофосфан и Проспидин снижают содержание ТФВ на 1-2% (на рисунке не приведены). Сальвин снижает содержание ТФВ на 5% в течение 4-х часов; ВО наиболее активен в первые 2-4 часа, в дальнейшем содержание ТФВ даже несколько возрастает, в то время как для Флараксина антирадикальная активность постепенно увеличивается. Такие данные согласуются с результатами изучения кинетики ПОЛ, за исключением того, что перекисное окисление лецитина незначительно возрастало в первые часы (~ 3 часа) после смешения.

Влияние Флараксина и Проспидина на микровязкость общих липидов эритроцитов

Влияние Флараксина на структурно-динамические характеристики мембран-липосом из общих липидов эритроцитов исследовали с помощью флуоресцентного зондирования, применяя в качестве зонда несимметричный полиметиновый краситель 4501у, методика применения которого описана в (6). Для этого краситель инкубировали в среде липосом (20 моль tris НСl буфер, 140 ммоль NаСl, рН 7,4) в отсутствие ФАВ и с их добавкой в различных концентрациях. Изменение вязкости раствора под воздействием ФАВ приводило к изменению интенсивности флуоресценции зонда. На Рис.4.6 приведены зависимости спектрального параметра  (величина, обратнопропорциональная логарифму вязкости).

Р
I - ФЛАРАКСИН, 2 - ПРОСПИДИН
ис 4.6. Величина параметра микровязкости бислойных мембран из общих липидов эритроцитов  как функция концентрации Флараксина (C_фл) или Проспидина (С_п).

Как следует из полученных данных, Проспидин при малых дозах незначитель-но снижает вязкость липо-сом ( возрастает) и затем не изменяет ее во всем интервале исследуемых концентраций, в то время как Флараксин в дозах менее 0,1 мг/мл повышает вязкость раствора, но дальнейшее возрастание концентрации приводит к уменьшению вязкости (величина  возрастает).

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о различном характере действия Флараксина и Проспидина на структурно-динамическое состояние липосом из общих липидов эритроцитов, индифферентность Проспидина и концентрационно-зависимый характер действия Флараксина, повышающих микровязкость в малых дозах, но снижающих ее с возрастанием концентрации.

Анализируя результаты исследования физико-химических свойств Флараксина, термодинамические характеристики, указывающие на способность его к взаимодействию с био-мембранами и их компонентами, а также сопоставляя такие данные с результатами настоящей работы, можно сделать вывод о широких аспектах действия данного препарата на биологические системы.

Свойство Флараксина, в отличие от других противоопухолевых препаратов, активно взаимодействовать с протогемом «Цитохрома-С», образуя комплекс с переносом заряда, изменять состояние его окисления, должно приводить к перестройке в структуре ближайшего окружения иона железа, что в свою очередь, сказывается на свойствах белкового окружения. Об этом свидетельствуют изменения в флуоресцентных свойствах «Цитохрома-С» под влиянием Флараксина. В отличие от Проспидина и Циклофосфана, не оказывающих действия, Флараксин воздействует на «Цитохром-С» с большей (в ~3 раза) эффективностью, чем ВО, при значительно меньшей концентрации. Надо полагать, что данное свойство Флараксина может иметь значение при терапии опухолевых заболеваний.

Определяющим фактором является также кинетика реакции Флараксина с ферментом, которая, как показано в работе, зависит от условий среды: влияние 5% глюкозы в значительной степени более выражено при взаимодействии ЧСА или «Цитохрома-С» с Флараксином, чем с ВО.

Преимуществом Флараксина по сравнению с Проспидином, Циклофосфаном является также его эффективное, пролонгированное антирадикальное действие, способность влиять на структурно-динамические характеристики мембран из общих липидов эритроцитов, снижать микровязкость. Поэтому представляет интерес оценка подобных изменений на мембранах эритроцитов крови человека в норме и при опухолевых заболеваниях с целью проведения контроля и коррекции лечения Флараксином.