Geum.ru

Лечебный Фитоцентр «феникс»

Вид материалаДокументы

Содержание


4.3. Изучение влияния Флараксина на иммунологическую реактивность.
Подобный материал:
1   ...   16   17   18   19   20   21   22   23   ...   29

4.3. Изучение влияния Флараксина на иммунологическую реактивность.


Цель работы – изучить влияние Флараксина на гуморальный иммунный ответ по отношению к эритроцитарному и бактериальному антигенам, оценка клеточного иммунитета по реакции гиперчувствительности замедленного типа, а также функциональную активность нейтрофилов.

Гуморальный иммунный ответ на Эритроциты Барана (ЭБ) изучен на белых мышах массой 24 – 28 г. Оценку проводили по титрам циркулирующих антител (гемолизины и гемагглютинины) после внутрибрюшинной иммунизации ЭБ, 108 (оптимальная доза) клеток в объеме 0,2 мл. Антитела учитывали на 7-е сутки после иммунизации на микропанелях способом серийных разведений по методике (17). Наряду с вышесказанным, у мышей регистрировали массу тела, селезенки, тимуса, вычисляли соответственно селезеночный и тимический индексы. Весь цифровой материал подвергали статической обработки (18).

Флараксин вводили в виде 0,1% раствора на 5% глюкозе.

Все животные были распределены на 6 групп: 1 гр. – контроль (интактные, иммунизированные); 2 гр. – опытные мыши, получавшие флараксин однократно внутривенно в дозе 10мг/кг непосредственно после антигенного раздражения; 3 гр.и 4 гр. – животные, которым флараксин вводили внутримышечно 1 раз в сутки в дозе 10мг/кг, соответственно, в течение 6 и 15 дней до иммунизации; 5 гр.– мыши, которым ЭБ вводили в середине 6-ти дневного курса применения флараксина. И наконец, 6-я группу составили животные, которым Флараксин вводили по указанной выше 6-дневной схеме, начиная с момента иммунизации. В каждой серии опытов было 10 животных.

Полученные данные представлены в табл. 4.4, из которой следует, что однократное внутривенное введение Флараксина, а также 6-ти дневное курсовое использование препарата внутримышечно до иммунизации

Таблица 4.4. Влияние Флараксина на гуморальный иммунный ответ у белых мышей (n=60), иммунизированных Эритроцитами Барана (ЭБ).

№ се-рии
Характер опыта
Стат. пока-зат.
Масса тела, г
Масса се-лезенки, мг
Селезе-ночный индекс
Масса тимуса, мг
Тимичес-кий индекс
Титры антител, lg2

Гемма-глютин
Гемо-лизины

1.
Контрольная группа
(интактные, иммунизированные)
M±m
29±1,4
215,9±9,3
0,757
±0,065
33,1±4,75
0,118±0,022
8,6±0,4
10,4±0,25

2.
Мыши, получавшие Флараксин однократно внутривенно после антигена
M±m
27,9±1,9
253,9±48,4
0,956
±0,233
42±6,3
0,154±0,026
8,7±0,55
11,8X±0,33

3.
Мыши, получавшие Флараксин внутримышечно 1 раз в сутки в течение 6 дней до иммунизации
M±m
27,9±0,7
201,3±15,7
0,726
±0,058
33,1±3,3
0,119±0,012
8,3±0,11
11,6X±0,2

4.
Мыши, получавшие Флараксин внутримышечно 1 раз в сутки в течение 15 дней до иммунизации
M±m
27,4±0,6
231,4±23,2
0,842
±0,08
45,3±5,0
0,166±0,02
8,3±0,2
10,7±0,3

5.
Мыши, иммунизированные в середине 6-дневного курсового введения флараксина
M±m
26,8±0,8
213,5±11
0,810
±0,064
40,9±5,7
0,155±0,02
8,4±0,22
11,3±0,33

6.
Мыши, получавшие Флараксин внутримышечно 1 раз в сутки в течение 6 дней после иммунизации
M±m
26,0±0,9
267,7±38,3
1,055
±0,169
38,4±2,5
0,147±0,023
6,8X±0,37
11,1±0,25

Примечание: X –достоверность по отношению к контролю.


иммунизации сопровождается достоверным повышением уровня гемолизинов без существенных изменений других изученных показателей. Более длительное (15 суток) введение Флараксина до иммунизации, а также антигенное раздражение в середине 6-ти дневного курсового введения Флараксина не влияют на гуморальный иммунный ответ. В то же время применение Флараксина после иммунизации приводит к достоверному снижению уровня гемагглютининов, но не влияет на титры гемолизинов.

Таким образом, проведенные исследования показали, что применение Флараксина до иммунизации или одновременно с ней не оказывают отрицательного влияния на выработку антител к эритроцитарному антигену.

В опытах на белых крысах линии Вистар исследовали гуморальный иммунный ответ на бактериальный антиген. В качестве последнего использовалась гретая брюшнотифозная вакцина Уфимского Института Вакцин и Сывороток им. Мечникова. Иммунизацию проводили однократным подкожным введением вакцины в дозе 0,1 мл/100г массы тела. На 7-е сутки определяли титры О-агглютинов методом линейного титрования сыворотки крови. Опытные серии (по 10 животных в группе) были идентичны по дозам и схемам применения, предыдущим экспериментам на белых мышах.

Полученные результаты представлены в Табл.4.5., из которой видно, что Флараксин в разовой дозе 10мг/кг при различных схемах его использования не изменяет процесса антителообразования.

С целью изучения влияния Флараксина на клеточное звено иммунного ответа, в частности на функциональную активность лимфоцитов Т-ряда, нами была выбрана реакция гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ). Индукцию реакции ГЗТ осуществляли методом (17). Опыты проведены на 80 белых мышах массой 20-22 г. Животных сенсибилизировали внутрибрюшинным введением Эритроцитов Барана (ЭБ) в дозе 1∙107 на 20 г массы тела. На 5-е сутки после иммунизации в подушечку задней лапы инъецировали разрешающую дозу антигена (108 клеток в объеме 20мкл).

Таблица 4.5. Влияние Флараксина на гуморальный иммунный ответ у белых крыс (n=60) на бактериальный антиген.

№ се-рии
Характер опытов
Стат. пока-зат.
Масса тела, г
Масса се-лезенки, мг
Селезе-ночный индекс
Масса тимуса, мг
Тимичес-кий индекс
Титры О-агглюти-нинов, lg2

1.
Контрольная группа
(интактные, иммунизированные)
M±m
195
±20,1
702,1±71,6
0,374
±0,039
504,9
±61
0,252±0,022
5,1±0,35

2.
Введение Флараксина однократно внутривенно после иммунизации
M±m
194,4
±10,6
911±97,9
0,463
±0,041
542
±54,7
0,282±0,027
6.8±0,71

3.
Введение Флараксина внутри-мышечно в течение 6 дней
до иммунизации
M±m
195,8
±8,8
791,8±8,3
0,41
±0,046
492.3
±72
0,25±0,028
4,8±0,08

4.
Введение Флараксина внутри-мышечно в течение 15 дней до иммунизации
M±m
204,7
±13,1
887,6±65,1
0,435
±0,025
532,6
±65,6
0,265±0,036
5,1±0,29

5.
Иммунизация Эритроцитами Барана в середине 6-дневного курса введения Флараксина внутримышечно
M±m
199,4
±11,7
921±86,7
0,461
±0,033
462
±55,9
0,238±0,034
6,4±0,35

6.
Введение Флараксина внутри-мышечно в течение 6 суток
после иммунизации
M±m
179,6
±4,91
886,9±80,6
0,5
±0,061
456,6
±33,3
0,255±0,022
6,1±0,14


В контрольную лапу вводили стерильный физиологический раствор в том же объеме. Реакцию оценивали спустя 24 часа по разнице в массе регионарных подколенных лимфоузлов опытной и контрольной конечностей (19) и высчитывали индекс реакции ГЗТ.

Контрольные серии составили животные, не получавшие Флараксин, а опытные серии (по схемам применения Флараксина) были идентичны вышеописанным. Полученные результаты представлены в Табл.4.6.

Как видно из данных Табл.4.6., Флараксин при различных вариантах применения в разовой дозе 10мг/кг не влияет на развитие клеточной иммунной реакции.

В качестве одного из показателей неспецифической резистентности организма, отражающего функциональное состояние клеточных факторов защиты, нами была изучена активность нейтрофилов. При этом учитывались: КП – коэффициент поглощения микробов (активность фагоцитоза); ФИ – фагоцитарный индекс (% активных фагоцитов) и КЗ – коэффициент завершенности фагоцитоза (степень переваривания поглощенных микробов). В качестве тест-микроба использовалась суточная культура S.Thyphimurium. Исследования проведены в динамике у белых мышей, получавших Флараксин по наиболее напряженной схеме – 15 суток по 10 мг/кг ежедневно. Данные экспериментов представлены в Табл.

Таблица 4.6. Влияние Флараксина на реакцию гиперчувствительности замедленного типа у белых мышей.


№ се-рии
Характер опыта
Стат. пока-зат.
Масса тела,
г
Масса селезенки
Масса тимуса
Масса лимфо-узла, мг
Индекс ГЗТ,

мг
%
мг
%
Опытн.
Контр.

1.
Контрольная группа - 1
(интактные животные)
M±m
21,3
±0,43
148,1
±13
0,694
±0,054
67,1
±8,7
0,316
±0,041
3,16
±0,3
2,76
±0,36
1,19
±0,12

2.
Контрольная группа - 2
(не иммунизированные, но получившие разрешающую дозу антигена)
M±m
22,4
±0,7
160,6
±12,9
0,711
±0,044
48,4
±3,3
0,217
±0,015
3,34
±0,37
2,97
±0,26
1,13
±0,11

3.
Контрольная группа – 3
(реакция ГЗТ у животных, не получавших Флараксин)
M±m
19,8
±0,6
147,1±12,5
0,741
±0,045
57,2
±3,4
0,289
±0,016
3,68
±0,28
2,76
±0,19
1,43
±0,08

4.
Мыши, получавшие Флараксин однократно внутривенно после сенсибилизации ЭБ
M±m
20,1
±0,5
174,,5
±12,2
0,863
±0,041
49,5
±4,5
0,247
±0,022
3,53
±0,21
2,57
±0,23
1,48
±0,1

5.
Мыши, получавшие Флараксин внутримышечно 1 раз в день в течение 6 сут до сенсибилизации
M±m
20,5
±0,5
190
±16,5
0,931
±0,079
72,6
±4,4
0,354
±0,02
4,66
±0,28
3,15
±0,31
1,6
±0,12

6.
Мыши, получавшие Флараксин внутримышечно 1 раз в день в течение 15 сут до сенсибилизации

M±m
21,1
±0,5
168,8
±8,3
0,798
±0,041
59,1
±3,7
0,279
±0,014
4,17
±0,36
2,5
±0,2
1,67
±0,09

7.
Мыши, сенсибилизированные ЭБ в середине 6-дневного курсового введения Флараксина
M±m
20,2
±0,4
159,9
±6,4
0,852
±0,029
57,9
±5,3
0,287
±0,028
4,76
±0,26
2,92
±0,32
1,63
±0,1

8.
Мыши, получавшие Флараксин внутримышечно 1 раз в день в течение 6 дней после сенсибилизации
M±m
21,3
±1,1
157,8
±9,7
0,739
±0,024
56,3
±5,2
0,262
±0,019
3,86
±0,25
2,28
±0,18
1,55
±0,16
Приведенные в Табл.4.7. данные показывают, что курсовое введение Флараксина в течение 15 дней существенно не изменяет ни числа фагоцитирующих клеток, ни активность поглощения микробов, ни их переваривающую способность.

Таким образом, проведенные эксперименты свидетельствуют, что в изученной дозе (10 мг/кг) и в избранных схемах применения Флараксин не оказывает отрицательного влияния на некоторые показатели гуморального и клеточного звеньев иммунологической реактивности организма в норме.


Таблица 4.6. Влияние Флараксина на реакцию гиперчувствительности замедленного типа у белых мышей.

Изучаемые показатели
Статистические показатели
Контроль (интактные животные)
Сроки наблюдения (сут) в процессе введения флараксина
Через 7 сут после окончания введения препарата

1
7
15

Коэффициент поглощения микробов
M
±m
4,54
±0,35
3,84
±0,33
3,74
±0,24
3,37
±0,25
3,62
±0,36

Фагоцитарный индекс
M±m
0,372
±0,016
0,38
±0,02
0,38
±0,028
0,37
±0,015
0,38
±0,013

Коэффициент завершенности фагоцитоза
M±m
0,44
±0,12
0,364
±0,034
0,294
±0,054
0,39
±0,05
0,38
±0,03

Вместе с тем, имеются предпосылки (усиление выработки гемолизинов) считать, что этот препарат может стимулировать функциональную активность системы иммунной защиты. Такие свойства Флараксина могли бы иметь определенное значение в условиях его применения в онкологических клиниках.

В то же время отдельные данные (снижение выработки гемагглютининов после применения препарата) свидетельствуют об обратном воздействии Флараксина на иммуногенез. Для ответа на эти вопросы необходимо проведение специальных экспериментов, предполагающих выявление дозозависимых эффектов у Флараксина. Необходимо отметить, что в клинике этот препарат рекомендуют использовать в суточной дозе до 2 мг/кг. Поэтому в эксперименте, очевидно, следует изучить иммунные свойства препарата при дозах, меньших 10 мг/кг, в частности 1, 3, 5 мг/кг, чему и будут посвящены наши последующие опыты.