Российская академия наук Программа фундаментальных исследований Президиума ран фундаментальные науки – медицине

Вид материала

Содержание

Применение отечественного препарата ксимедон
УСЛОВИЯ ОБРАЗОВАНИЯ КОМПЛЕКСА α-ЛАКТАЛЬБУМИНА
Институт биологического приборостроения РАН, Пущино Институт теоретической и экспериментальной биофизики РАН, Пущино

Подобный материал:

1 ... 38 39 40 41 42 43 44 45 ... 74

ПРИМЕНЕНИЕ ОТЕЧЕСТВЕННОГО ПРЕПАРАТА КСИМЕДОН

В КОМПЛЕКСНОМ ЛЕЧЕНИИ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ

А.И. Коновалов¹⁾, И.Г. Мустафин²⁾, Г.В. Черепнев³⁾, В.С. Резник¹⁾

¹⁾Институт органической и физической химии им. А.Е. Арбузова КНЦ РАН, Казань 2)Республиканский центр по профилактике и борьбе

со СПИД и ИЗ МЗ РТ, Казань

3)Республиканская клиническая больница № 2 МЗ РТ, Казань

Высокоактивная антиретровирусная терапия (ВААРТ) значительно уменьшает заболеваемость и смертность ВИЧ-инфицированных больных. Некоторые ингибиторы ВИЧ-1 протеазы помимо антиретровирусной активности обладают собственными иммуномодулирующими и антиапоптогенными свойствами (Phenix et al., 2002). Однако длительное применение ВААРТ вызывает ряд серьезных побочных эффектов, характеризующихся поражением нервно-мышечной системы, внутренних органов, костной ткани, расстройством метаболизма, развитием периферической нейропатии, анемии и гиперчувствительности. Актуальной проблемой ВААРТ является формирование резистентности ВИЧ к антиретровирусным препаратам и низкий иммунореаби-литирующий эффект у части больных ВИЧ-инфекцией. Учитывая иммуномодулирующий, антиапоптогенный, нейропротекторный и регенерирующий эффекты отечественного препарата ксимедон, нами была проведена оценка эффективности препарата ксимедон в составе комплексной терапии у больных ВИЧ-инфекцией.

Применение препарата ксимедон в сочетании со стандартной антиретровирусной терапией (ингибиторы обратной транскриптазы и протеазы) оказывало достоверный терапевтический эффект, заключающийся в нормализации соматического статуса ВИЧ-больных, уменьшении репликации ВИЧ, а также улучшении патогенетически значимых при ВИЧ-инфекции показателей иммунной системы. Включение ксимедона в терапию больных ВИЧ-инфекцией редуцировало побочные эффекты антиретровирусных препаратов на фоне улучшения клинического состояние пациентов и уменьшения цитолиза.

В основной группе больных ВИЧ-инфекцией, получавших комплексную терапию ВААРТ+КСИМЕДОН, содержание CD4-Т-лимфоцитов достоверно превысило (р<0.01) показатели группы сравнения (ВААРТ) при одинаковых темпах снижения количества копий РНК ВИЧ в плазме крови в первые месяцы наблюдения. Достоверная разница в содержании CD4-Т-лимфоцитов между исследуемыми группами больных сохранялась на протяжении всего периода наблюдения (в течение 2 лет). При этом в основной группе больных была отмечена достоверная разница в содержании копий РНК ВИЧ в плазме крови (р<0.01) к концу наблюдения по сравнению с контрольной.

Была обнаружена обратная корреляция между степенью активации Т-лимфоцитов у ВИЧ-инфицированных и снижением уровня CD4-Т-лимфоцитов, а также их чувствительностью к спонтанному апоптозу. Применение ксимедона уменьшало содержание активированных Т-лимфоцитов (экспреcсирующих маркеры HLA-DR, CD38) на фоне увеличения содержания CD4-Т-лимфоцитов и снижения их чувствительности к спонтанному апоптозу in vitro.

Таким образом, ксимедон в составе комплексной терапии больных ВИЧ-инфекцией обеспечивал длительный и выраженный иммуно-реабилитирующий эффект, заключающийся в стимуляции лейкопоэза и лимфопоэза с повышением содержания CD4+ лимфоцитов и снижением активации субпопуляций Т лимфоцитов (CD4+DR+, CD8+DR+, CD8+CD38+), повышении устойчивости лимфоцитов к спонтанному апоптозу (цитопротекторный эффект). Иммунореабилитирующий эффект ксимедона у больных ВИЧ-инфекцией был достигнут в дозе, не оказывающей побочных эффектов, что делает потенциально возможной долгосрочную превентивную базисную терапию иммунодефицита при ВИЧ-инфекции.

УСЛОВИЯ ОБРАЗОВАНИЯ КОМПЛЕКСА α-ЛАКТАЛЬБУМИНА

С ОЛЕИНОВОЙ КИСЛОТОЙ – ПОТЕНЦИАЛЬНОГО ПРОТИВООПУХОЛЕВОГО ПРЕПАРАТА

Е.А. Пермяков¹⁾, Е.Л. Князева¹⁾, В.М. Грищенко¹⁾, И.В. Першикова¹⁾, С.Е.Пермяков¹⁾, Р.С. Фадеев²⁾, В.С.Акатов²⁾

¹⁾ Институт биологического приборостроения РАН, Пущино

²⁾ Институт теоретической и экспериментальной биофизики РАН, Пущино

Известно, что некоторые конформационные состояния металл-связывающего белка α-лактальбумина (ЛА) в комплексе с олеиновой кислотой (ОК) (состояние HAMLET) индуцируют апоптоз опухолевых клеток, не затрагивая здоровые клетки, ингибируют клеточную пролиферацию, а также проявляют бактерицидное действие. В то же время, условия и механизмы образования этого комплекса исследованы недостаточно полно, отсутствуют физико-химические данные по стехиометрии и термодинамике взаимодействия ЛА с ОК. По этой причине задача изучения условий образования этих молекулярных наноструктур, обладающих выраженным антираковым действием, является важной и актуальной.

Методами абсорбционной и флуоресцентной спектроскопии, а также спектроскопии кругового дихроизма изучено взаимодействие человеческого ЛА с олеиновой кислотой в растворах низкой и высокой (150 мМ NaCl или KCl) ионной силы при рН 8,3 и различных температурах в диапазоне от 17 до 45 °С. Раствор ЛА (6 мкМ) титровали спиртовым раствором ОК, причем общая концентрация ОК в растворе не превышала величины критической концентрации мицеллообразования ОК, С_m, измеряемой спектрофотометрически. Показано, что в присутствии 1 мМ Са²⁺ С_m для ОК составляет 3 мкМ, что препятствует исследованию процесса комплексообразования в этих условиях. В отсутствие ионов Са²⁺ (1 мМ ЭДТА) наблюдается увеличение С_m в присутствии ЛА (6 мкМ) до 35 мкМ (17 °C) – 81 мкМ (45 °С). Добавление NaCl повышает величину С_m до 83 (17 °С) – 198 мкМ (45 °С). Замена ионов Na⁺ на К⁺ приводила к аналогичному эффекту. Образование комплекса ЛА с ОК сопровождается длинноволновым сдвигом максимума спектра триптофановой флуоресценции, ростом величины квантового выхода флуоресценции, а также уменьшением эллиптичности в ближней УФ-области (увеличение подвижности окружения остатков триптофана и тирозина), увеличением эллипичности в дальней УФ-области (рост содержания α-спиралей) и уменьшением термостабильности белка (сдвиг середины теплового перехода на 10 °С). Кривая спектрофлуори-метрического титрования апо-белка олеиновой кислотой при 17 ^оС и 45 ^оС имеет сложный характер, говорящий о наличии промежуточных состояний, но описывается простейшей кооперативной схемой связывания с эффективной равновесной константой ассоциации ОК соответственно 210⁴ М^-1 и 310⁵ М^-1 и коэффицинтом Хилла 1,3 и 1,4.

Таким образом, оптимальными условиями для образования комплекса ЛА-ОК являются отсутствие ионов Са²⁺ (апо-форма ЛА), присутствие 150 мМ NaCl в растворе, и повышенная температура 45 °С, при которой апо-белок находится в термически развернутом состоянии.

Обнаружено, что комплекс ЛА-ОК, образованный в указанных условиях, обладает цитотоксической активностью в отношении клеток эпидермоидной карциномы человека, сходной с активностью состояния HAMLET, образованного путем неконтролируемого смыва белком олеиновой кислоты, предварительно нанесенной на колонку с носителем DEAE-Trisacryl M.

Blog