Тезисы докладов

Вид материала

Тезисы

Содержание Антигликановые антитела как маркеры в диагностике рака молочной железы Выявление и характеристика опухолеспецифических форм нуклеофозмина

Подобный материал:

• Тезисы докладов, 3726.96kb.
• Тезисы докладов, 1225.64kb.
• Правила оформления тезисов докладов Тезисы докладов предоставляются в электронном виде, 22.59kb.
• «Симпозиум по ядерной химии высоких энергий», 1692.86kb.
• Требования к тезисам докладов, 16.83kb.
• Тезисы докладов научно-практической, 6653.64kb.
• Тезисы докладов 1 Межвузовская научно -практическая конференция студентов и молодых, 100.64kb.
• Тезисы докладов и заявки на участие, 104.97kb.
• Тезисы докладов, принятые Оргкомитетом для опубликования в Материалах форума, 788.61kb.
• Тезисы докладов, принятые Оргкомитетом для опубликования в Материалах форума, 1066kb.

АНТИГЛИКАНОВЫЕ АНТИТЕЛА КАК МАРКЕРЫ

В ДИАГНОСТИКЕ РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

Н.В.Бовин, О.Е.Галанина, Н.В.Шилова, И.М.Белянчиков

Институт биоорганической химии РАН, Москва


Ранняя онкодиагностика, в частности диагностика рака молочной железы, в затруднены из-за низкого уровня онкомаркеров в крови. De novo синтезированные опухолью гликаны в качестве маркеров имеют преимущество перед другими молекулами благодаря их разнообразию, в настоящее время их насчитывают несколько десятков. Тем не менее циркулирующих в крови гликоконъюгатов на ранних стадиях малигнизации недостаточно для практической диагностики. Наша гипотеза состоит в том, что выявление не самих глико-молекул, а антител к ним даст значительно лучшие результаты, так как иммунная система работает как усилитель, значительно увеличивая сигнал, «записанный» в структуре гликанов, а кроме того, позволяя его значительно более удобно определять – непосредственно в крови пациента. Целями проекта была проверка этой гипотезы, выявление диагностически значимых антител, а также разработка нового подхода к диагностике и прогностике онкологических заболеваний. Для выявления диагностически значимых антител был разработан микрочип, в состав которого входит 300 гликанов – углеводных цепей человеческих гликопротеинов и гликолипидов, некоторые из которых являются известными опухолеассоциированными антигенами, например SiaLe^a (CA-19.9), TF и SiaTn. Сыворотка крови пациента наносится на чип, и специфически связанные с углеводами антитела далее выявляются с помощью флуоресцентно-меченых вторичных антител (анти-IgG, анти-IgM, анти-IgA). Уникальным преимуществом этого подхода является то, что все маркеры представляют собой иммуноглобулины, благодаря чему они могут определяться одновременно на одном и том же чипе одними и теми же реагентами. С помощью чипа мы выявляем несколько, обычно около десятка, наиболее чувствительных к данному заболеванию типов антител; только их совокупность (signature) позволяет с высокой специфичностью выявлять заболевание. Множественность маркеров позволяет нивелировать индивидуальные особенности конкретного пациента, связанные с его возрастом, гетерогенностью опухоли, особенностями диеты, наличием других заболеваний и т.д. В данной работе мы исследовали сыворотки крови пациентов с раком молочной железы. Оказалось, что: 1) signature, достаточная для диагностической цели, состоит из 8–10 антител; 2) ни одно из диагностических антител не было направлено к известным гликанам-онкомаркерам; 3) все эти антитела есть и у здоровых доноров (но в другом количестве), то есть они относятся к естественным, а не к адаптивным антителам; 4) уровень некоторых антител достоверно меньше, чем у здоровых лиц, то есть они выполняют опухоль-надзорную функцию, что дает основание считать их потенциальными ранними прогностическими маркерами. С помощью гаптен-специфической хроматографии на гликане Le^C одно из антител было выделено, и его меченая биотином форма была испытана (Н.Н.Тупицын, Онкологический центр, Москва) в качестве специфического гистохимического реагента, позволившего дифференцировать клетки рака молочной железы и соответствующие нормальные клетки.

ВЫЯВЛЕНИЕ И ХАРАКТЕРИСТИКА ОПУХОЛЕСПЕЦИФИЧЕСКИХ ФОРМ НУКЛЕОФОЗМИНА

Н.М.Владимирова¹⁾, М.А.Писарева¹⁾, Н.А.Потапенко¹⁾, Е.В.Ахидова¹⁾, О.М.Вольпина¹⁾, Т.И.Булычева²⁾, Н.Л.Дейнеко²⁾

¹⁾Учреждение Российской академии наук Институт биоорганической химии им. академиков М.М.Шемякина и Ю.А.Овчинникова РАН, Москва

²⁾Гематологический научный центр Министерства здравоохранения и социального развития

Российской Федерации, Москва


Согласно современным представлениям нуклеофозмин является полифункциональным белком, участвующим в биогенезе рибосом, регуляции клеточного цикла, апоптоза, пролиферации и малигнизации клеток. Показано, что малигнизация клеток сопровождается не только сверхэкспрессией нуклеофозмина, приводящей к подавлению апоптоза, но и появлением его аномальных структурных форм. Образование таких форм связано как с изменениями его гена, так и с посттрансляционными модификациями самого белка. Задачей данного проекта является выявление и характеристика опухолеспецифических форм нуклеофозмина.

Понимание характера структурных изменений нуклеофозмина при малигнизации клеток невозможно без анализа его структуры в нормальных клетках. Такой анализ представляет собой более трудную задачу, поскольку содержание нуклеофозмина в них несоизмеримо ниже, чем в опухолевых клетках. В работе помимо гомогенатов тканей трехдневных крыс (мозга, печени, почек, сердца, легких) были использованы выделенные из этих тканей ядра, наиболее обогащенные нуклеофозмином. Иммунохимический анализ позволил не только установить, что наиболее обогащенными нуклеофозмином препаратами являлись мозг и печень, но и впервые выявить, что в отличие от других тканей, включая наиболее обогащенную нуклеофозмином печень, препараты мозга содержали не только мономеры, но и олигомеры нуклеофозмина. Особый интерес представляет дифференцированный анализ состояния нуклеофозмина в клетках глии и нейронах, содержащихся в мозге, поскольку, судя по литературным данным, наиболее частыми злокачественными заболеваниями мозга являются глиомы, нейробластомы же встречаются довольно редко и лишь в детском (до 5 лет) возрасте. Иммунохимический анализ с применением полученных нами уникальных противопептидных антител позволил установить, что наиболее обогащенными нуклеофозмином подотделами мозга являются мозжечок и гиппокамп. В обоих препаратах наряду с мономерной детектировалась SDS-устойчивая олигомерная форма белка. Для ответа на вопрос, какие клетки (нейроны или глия) содержат олигомеры, мы провели иммунохимический анализ нуклеофозмина в препаратах первичных культур клеток глии и нейронов. Было впервые показано, что нейроны и клетки глии сильно отличаются не только по содержанию нуклеофозмина, но и по его структурному состоянию. В глиальных клетках содержалась как мономерная, так и олигомерная форма нуклеофозмина в отличие от нейронов, содержащих только следовые количества мономеров. Начаты работы и получены первые данные по структурному состоянию нуклеофозмина в глиомах и нейробластомах.

Анализ нуклеофозмина в лимфоидных клетках здоровых доноров, больных со злокачественными и незлокачественными заболеваниями крови позволил выявить, что при злокачественных заболеваниях основные изменения касаются пула белка, детектируемого противопептидными антителами, выявляющими олигомеры, локализованные в ядрышке. Увеличение содержания этих олигомеров коррелировало с содержанием Ki-67 позитивных клеток. Сделано предположение, что полученные нами антитела могут быть использованы для диагностики злокачественных заболеваний крови.