Geum.ru

Ультраструктурная и цитохимическая характеристика макрофагов, инфицированных рнк-содержащими вирусами 03. 00. 25 гистология, цитология, клеточная биология

Вид материалаАвтореферат

Содержание


Список основных работ
Список сокращений
Подобный материал:
1   2   3   4

ВЫВОДЫ
  1. С помощью молекулярно-генетических (ПЦР, ИФА), вирусологических (титрование на клеточных культурах) и морфологических методов исследования (нМФА) установлено, что РНК-содержащие вирусы (вирус клещевого энцефалита, хантавирус и вирусы семейства Picornaviridae – полиовирус, энтеровирусы 71, ECHO11 и Коксаки В1) способны из вируссодержащей жидкости адгезировать к поверхности макрофагов и проникать в них. Вирусы, имеющие суперкапсид (ВКЭ и хантавирус), и энтеровирус ECHO11 способны к репродукции в макрофагах.
  2. Установлено, что РНК-содержащие вирусы способны проникать в макрофаги, используя различные механизмы. Вирусы, содержащие суперкапсид (ВКЭ, хантавирус), проникают в макрофаги путем локального лизиса плазмалеммы. Вирусы, не имеющие липопротеиновой оболочки (полиовирус, энтеровирусы 71, ECHO11 и Коксаки В1), используют различные способы проникновения в фагоциты (локальный лизис плазмалеммы, кавеолы, эндосомы). Выход хантавируса и ВКЭ, в отношении которых была установлена репродукция в макрофагах, осуществлялся подобно входу, тогда как для энтеровируса ECHO 11 выявлено два способа выхода из клетки путем локального лизиса плазматической мембраны и клазматоза.
  3. Определена гипертрофия мембраносодержащих органелл и формирование разнобразных псевдоподий в макрофагах, зараженных РНК-содержащими вирусами. Наибольшим мембранотропным действием обладали вирусы, не содержащие суперкапсид.
  4. Выявлено, что наряду с неспецифическими признаками поражения клеток (вакуольная и зернистая дистрофия, гелизация цитоплазмы и другие), в макрофагах, инфицированных РНК-содержащими вирусами, определялись изменения, характерные для вирусных инфекций, а именно: образование вирусспецифических и вирусиндуцированных структур – виропластов, трубчатых и пластинчатых образований, полинуклеопротеидных нитей и микрофиламентов, где определялись новообразованные вирусные частицы.
  5. Установлено, что для макрофагов, зараженных РНК-содержащими вирусами, кроме полиовируса, характерен автономный тип инфицирования, на что указывали ультраструктурные признаки активации вирусного генома в цитоплазме при неизмененной морфологии клеточного ядра.
  6. Определена продуктивная инфекция при заражении макрофагов вирусами, содержащими суперкапсид, и энтеровирусом ECHO 11, поскольку в этих случаях образуется морфологически выявляемый полноценный вирус. Абортивная форма инфекции обнаружена при взаимодействии фагоцитов с энтеровирусами 71 и Коксаки В1, на что указывает отсутствие формирования полноценных вирионов.
  7. Комплексное исследование метаболизма клеток выявило, что этап проникновения РНК-содержащих вирусов в макрофаги сопровождается выраженной стимуляцией кислородзависимой и нитроксидобразующей ферментных систем. Нарастание активности данных систем носило более выраженный характер в случае инфицирования макрофагов вирусами, способными в них размножаться – ВКЭ, хантавирус и энтеровирус ECHO11. На это указывало повышение активности как НАДФ-оксидазного комплекса первого порядка (плазматические мембраны), так и активности митохондриальных ферментов третьего порядка – лактатдегидгеназы, сукцинатдегидрогеназы и цитохромоксидазы.
  8. Установлено, что активность цитоплазматических ферментов, участвующих в процессах расщепления макромолекул, – кислой фосфатазы и неспецифической эстеразы – зависела от вида вируса, которыми были инфицированы макрофаги. В макрофагах, зараженных вирусами, содержащими суперкапсид (ВКЭ, хантавирус), увеличивалась активность кислой фосфатазы, тогда как при инфицировании клеток группой вирусов без липопротеиновой оболочки (полиовирус и энтеровирусы 71, ECHO11 и Коксаки В1) – неспецифической эстеразы.
  9. Выявлена активная наработка метаболитов NO макрофагами, зараженными вирусами, содержащими суперкапсид (ВКЭ, хантавирус). При этом в начальном периоде инфекции (15 мин – 4 ч) проукция метаболитов NO клетками коррелировала с изменением активности ферментов кислородзависимого их метаболизма. В поздние сроки наблюдения (от 1 до 4-х сут), у этих макрофагов отмечалась активность супероксиддисмутазы – фермента, принимающего участие в ликвидации избыточного количества активных метаболитов кислорода.
  10. Для макрофагов, зараженными указанными видами вирусов, характерна острая, литическая инфекция, так как при синтезе вирусных компонентов в клетках отмечается изменение ее метаболизма, обнаруживаются патологические внутриклеточные изменения и формирование вирусиндуцированных образований, которые вызывают токсическое и механическое повреждение клеток. Это приводит к подавлению клеточного метаболизма и несостоятельности защитных реакций макрофагов.
  11. Установлено, что вирусы, имеющие суперкапсид, осуществляют вход и выход, не нарушая плазмалеммы клеток-мишеней. Это определяет способность этих вирусов к длительной репродукции в макрофагах без выраженного цитопатического эффекта. При отсутствии выраженных деструктивных изменений эти клетки могут выступать в роли источника указанных вирусов и принимать определенное участие в процессе их диссеминации в организме.


СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ,

ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
  1. Взаимодействие первичной культуры макрофагов с хантавирусами / Н.Г. Плехова, Л.М. Исачкова, Г.Г. Компанец, Р.А. Слонова, Н.В. Перевощикова // Инфекционная патология в Приморском крае: тез. докл. III науч.-практ. конф. – Новосибирск,1999. – С. 93-94.
  2. Динамика продукции TNFальфа и NO перитонеальными макрофагами при воздействии разных штаммов вируса клещевого энцефалита / Н.В. Крылова, Г.Н. Леонова, Н.Г. Плехова // Медицинская иммунология. – 2007. – Т. 9, № 2/3. – С. 146-147.
  3. Изменение метаболической активности макрофагов под влиянием вируса клещевого энцефалита / Н.Г. Плехова, Л.М. Сомова, Е.И. Дробот, Н.В. Крылова, Г.Н. Леонова // Биохимия – 2007. – Т. 72, вып.2. – С. 236-246.
  4. Инфицирование макрофагов вирусом клещевого энцефалита / Н.Г. Плехова, Л.М. Сомова, Н.В. Крылова, Г.Н. Леонова, Е.В. Пустовалов // Вопр. вирусол. – 2008. – № 2. – С. 32-37.
  5. Исачкова, Л.М. Динамика ферментативной активности и количествен-

ных показателей моно- и полинуклеарных фагоцитов при воспалительных процессах различной этиологии / Л.М. Исачкова, Н.Г. Плехова // Инфекционная патология в Приморском крае: тез. докл. науч.-практ. конф. – Владивосток, 1994 – С.136-137.
  1. Исачкова, Л.М. Новые данные о патологии инфекционного процесса / Л.М. Исачкова, Н.Г. Плехова // Проблемы инфекционной патологии в Сибири, на Дальнем Востоке и крайнем Севере: тез. докл. научно-практ. конф. – Новосибирск, 1996. – С.71-72.
  2. Исачкова, Л.М. Новые данные к современной концепции антиинфекционной резистентности / Л.М. Исачкова, Н.Г. Плехова // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. – 1997. – № 5. – С.67-70.
  3. Исачкова, Л.М. Новые аспекты антиинфекционной резистентности организма / Л.М. Исачкова, Н.Г. Плехова // Актуальные вопросы инфекционной патологии: тез. докл. науч.-практ. конф. – Ростов-на-Дону, 1999. – С. 80-81.
  4. Исачкова, Л.М. К развитию представлений об антиинфекционной резистентности / Л.М. Исачкова, Н.Г. Плехова // Эпидемиология и инфекционные болезни, 2002, № 1, С. 11-15.
  5. Метаболическая активность макрофагов, зараженных РНК-содержащими вирусами / Н.Г. Плехова, Л.М. Сомова, Н.В. Крылова, Г.Г. Компанец //Фундаментальные аспекты компенсаторно-приспособительных процессов: тез. докл. 3 науч.-практ. конф. – Новосибирск, 2007. - мед.-фармацевт. журн. Сиб. Консилиум – 2007. – № 7. – С. 67-68.
  6. Механизм инфицирования макрофагов возбудителем геморрагической лихорадки с почечным синдромом: ультраструктурные аспекты / Н.Г. Плехова, Л.М. Сомова-Исачкова, Р.А. Слонова, Г.Г. Компанец, Е.В. Пустовалов, Е.И. Дробот // Цитология. – 2003. – Т. 45, № 8. – С. 770-779.
  7. Механизм инфицирования макрофагов возбудителем геморрагической лихорадки с почечным синдромом: ультраструктурные аспекты / Н.Г. Плехова, Л.М. Сомова, Р.А. Слонова, Г.Г. Компанец, Е.И. Дробот // Ликвидация и элиминация инфекционных болезней – прогресс и проблемы: тез. докл. междунар. конгр. – Санкт-Петербург, 2003. – C. 140.
  8. Морфофункциональная характеристика макрофагов, зараженных вирусом клещевого энцефалита / Н.Г. Плехова, Л.М. Исачкова Г.Н. Леонова, Н.В. Крылова, Е.И. Дробот // Тихоокеанск. мед. журн. – 2001. – № 2. – С.56-58.
  9. Морфофункциональная активность фагоцитарных клеток при инфекционных процессах различной этиологии / Н.Г. Плехова, Л.М. Исачкова, Р.А. Слонова, В.В. Лукьянова // Тихоокенск. мед. журн. – 2001. – № 2. – С. 92-95.
  10. NO продуцирующая активность макрофагов, зараженных вирусом клещевого энцефалита / Н.Г. Плехова, Л.М. Сомова, Д.В. Заворуева, Н.В. Крылова, Г.Н. Леонова // Бюл. экс. биол. и мед. – 2008. – № 3. – С. 316-320.
  11. О
    39
    пределение функциональной активности лейкоцитов периферической крови в качестве показателя неспецифической защиты организма / Сомова Л.М., Плехова Н.Г., Кондрашова Н.М., Запорожец Т.С. – Методические рекомендации, Владивосток, 2005. – 24 с.
  1. Плехова, Н.Г. Динамика показателей моно- и полинуклеарных фагоцитов при воспалительных процессах различной этиологии // Н.Г. Плехова, Л.М. Исачкова // Юбилейная конференция НИИЭМ им. Пастера: тез. докл. – Санкт-Петербург, 1993. – С. 27.
  2. Плехова, Н.Г. К вопросу о взаимодействии нейтрофилов и макрофагов в системе антиинфекционной защиты / Н.Г. Плехова, Л.М. Исачкова // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. – 1997. – №5. – С.70-73.
  3. Плехова, Н.Г. Морфологическая характеристика макрофагов, зараженных вирусом клещевого энцефалита / Н.Г. Плехова, Л.М. Исачкова, Г.Н. Леонова, Н.В. Крылова // Актуальные вопросы инфекционной патологии: тез. докл. науч.-практ. конф. – Ростов-на-Дону, 1999. – С. 58.
  4. Плехова, Н.Г. Морфологическая характеристика макрофагов, зараженных хантавирусом / Н.Г. Плехова, Л.М. Исачкова, Г.Г. Компанец // Инфекционная патология в Приморском крае: тез. докл. III науч.-практ. конф. – Новосибирск,1999. – С. 98-99.
  5. Плехова, Н.Г. Ультраструктурная локализация хантавируса в резидентных макрофагах / Н.Г. Плехова, Л.М. Исачкова, Е.В. Пустовалов, Г.Г. Компанец, Р.А. Слонова // ХVIII Российск. конф. по электр. микроскопии: тез. докл. – Черноголовка, 2000. – С. 286.
  6. Плехова, Н.Г. Бактерицидная активность фагоцитов / Н.Г. Плехова // Журн. эпидемиол., микробиол. и иммунобиол. – 2006. – № 6. – С. 89-96.
  7. Плехова, Н.Г. Способ определения биологической активности вещества (варианты) / Н.Г. Плехова, Л.М. Сомова – Пат. на изобр. № 2270251 C2 заявка № 2003109097; опубл. Бюл. – 2006. – № 5.
  8. Плехова, Н.Г.Значение клеток моноцитарно-макрофагальной системы в патогенезе флавивирусных инфекций / Н.Г. Плехова // Бюлл. Сиб. отделения РАМН. – 2007. – № 4. – С. 71-77.
  9. Плехова, Н.Г. Клетки моноцитарно-макрофагальной системы в патогенезе энтеровирусных инфекций / Н.Г. Плехова // Дальневост. мед. журн. – 2008. – №2. – С 8-14.
  10. Плехова, Н.Г. Роль клеток моноцитарного происхождения в патогенезе хантавирусных инфекций / Н.Г. Плехова, Л.М. Сомова // Тихоок. мед. журн. – 2008. – № 2. – С. 32-37.
  11. Плехова, Н.Г. Изменение активности ферментов плазмалеммы макрофагов, инфицированных РНК-содержащими вирусами / Н.Г. Плехова, Л.М. Сомова // Тез. докл. 4 съезда Рос. общ. биохим. и молекул. биол. – Новосибирск, 2008. – С.439.
  12. Плехова, Н.Г. Современные представления о механизмах входа вирусов в клетки / Н.Г. Плехова, Л.М. Сомова // Успехи совр. Биологии. – 2009, Т. 129, №1, С. 39–50.
  1. П
    40
    лехова, Н.Г. Ультраструктурная характеристика резидентных макрофагов, инфицированных РНК-содержащими вирусами / Н.Г. Плехова, Л.М. Сомова // XXII Российская конф. по электронной микроскопии, тез докл. – Черноголовка, 2008. – С. 72.
  2. Пути входа вирусов семейства Picornaviridae в резидентные макрофаги / Н.Г. Плехова, Л.М. Сомова, В.И. Злобин, С.В. Должиков, Т.В. Фролова, Л.С. Карань // Цитология. – 2008. – Т. 50, №2. – С. 171-181.
  3. Сомова-Исачкова, Л.М. Патоморфогенез геморрагической лихорадки с почечным синдромом: от прошлого к будущему / Л.М. Сомова-Исачкова, Н.Г. Плехова – В кн.: «Хантавирусы и хантавирусные инфекции (к 70-летию изучения ГЛПС на Дальнем Востоке России) – Владивосток, 2003. – С. 182-200.
  4. Сомова, Л.М. Оксид азота как медиатор воспаления / Л.М. Сомова, Н.Г. Плехова // Вестник ДВО РАН. – 2006. – № 2. – С. 77-80.
  5. Способ оценки состояния иммунитета / Плехова Н.Г., Сомова Л.М., Заворуева Д.В., Кондрашова Н.М. - пат. на изобр., рег. № 2007111666
  6. Способ оценки фармакологических препаратов на местные факторы защиты организма на примере бронхолегочных заболеваний / Л.М. Сомова, Д.В. Заворуева, Н.Г. Плехова, Н.М. Кондрашова, Б.И. Гельцер– Пат. на изобр. № 23376620 С1, заявка № 2007100308/14; опубл. Бюл. – 2008. – № 31.
  7. Ультраструктурное изучение морфогенеза хантавируса в резидентных макрофагах / Н.Г. Плехова, Л.М. Сомова-Исачкова, Г.Г. Компанец, Е.В. Пустовалов, Р.А. Слонова – В кн.: «Хантавирусы и хантавирусные инфекции (к 70-летию изучения ГЛПС на Дальнем Востоке России) – Владивосток, 2003. – С. 200-212.
  8. Ультраструктурное исследование макрофагов, инфицированных вирусом клещевого энцефалита / Н.Г. Плехова, Л.М. Сомова, Г.Н. Леонова, Н.В. Крылова, Е.В. Пустовалов // Современные научные и прикладные аспекты клещевого энцефалита (к 70-летию открытия вируса клещевого энцефалита): тез. докл. Всерос. науч. конф. – Москва, 2007. – С. 91.
  9. Plekhova, N.G. Defensive function of phagocytes in Pseudotuberculosis / N.G. Plekhova, L.M. Somova-Isachkova, Shubin F.N. – In: Advances in experiment. med. and biol. “The genus Yersinia. Entering the Functional Genomic Era” (Eds. M Skurnic, J. A. Bengoechea, K. Glanfors), 2003. – Vol. 529. – P. 161-164.
  10. Metabolic activity of macrophages infected with Hantavirus, an agent of hemorrhagic fever with renal syndrome / N.G. Plekhova, L.M. Somova, R.A. Slonova, G.G. Companets, V.V. Luk’yanova, N.V. Yakubovich // Biochemistry (Moscow). – 2005. – Vol. 70, N 9. – P. 990 997.
  11. The localization of Hantavirus in resident macrophages / N.G. Plekhova, L.M. Somova, E.V. Pustovalov, G.G. Kompanets, R.A. Slonova – In proceed. Vol. III, Life Sciences. 13th European Microscopy Congress, Belgium, 2004. – Life Sciences, Vol. III. – P. 389-390.

4
41

41
0. The Enter of viruses family Picornaviridae in residents macrophages / N. Plekhova, L. Somova, E. Pustovalov, G. Koroljova, V. Zlobin – In proceed. The 16th International Microscopy Congress, Sapporo, Japan, 2006. – Vol. I. – P. 428.
  1. The entry of the Picornaviridae virus family in resident macrophages / N.G. Plekhova, L.M. Somova, S. Dolzhikov, T.V. Frolova, L.S. Karan, V.I. Zlobin // Cell and Tis. Biol. – 2008. – Vol. 2, N 3. – P. 311–321.
  2. Ultrastructural study of resident macrophages in hemorrhagic fever with renal syndrome / N.G. Plekhova, L.M. Somova, E.V. Pustovalov, G.G. Kompanets, R.A. Slonova // 8th Asia-Pacific Conferen. on Electron. Microscopy (8 APEN), Kanazawa, Japan, 2004. – P. 71.
  3. Viral particles influence on life systems as nanocontainer design prototype for cellular metabolism regulation/ N.G. Plekhova, E.V. Pustovalov, L.M. Somova, V.S. Plotnikov // In proccecing: Nanostructures: Physics and Technology, 16th Int. Symp. – Vladivostok, 2008. – P.10.
  4. Plekhova, N.G. The virus-inducted structures in RNA virus infected macrophages / N.G. Plekhova, L.M. Somova, E.V. Pustovalov - In proc. Vol. III Life Sciences 14th Europ. Microsc. Congr., Germany, 2008. – P. 135-136.



СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ


АТФ-аза – аденозинтрифосфатаза

ВКЭ - вирус клещевого энцефалита

ИФА – иммуноферментный анализ

КФ – кислая фосфатаза

ЛДГ – лактатдегидрогеназа

НАДФН(NADPH)–никотинамидадениндинуклеотидфосфат восстановленный

нМФА - непрямой метод флуоресцирующих антител

НСТ – нитросиний тетразолий

СДГ – сукцинатдегидрогеназа

СОД – супероксиддисмутаза

СПЭВ – культура клеток почек эмбриона свиньи

СЦК – средний цитохимический коэффициент

ХВ – хантавирус

iNOS – индуцибельная нитроксидсинтаза

NO – оксид азота

NO-2 – нитрит

NO-3 – нитрат

О2 – молекулярный кислород

О2- – супероксидный анион-радикал

ONOO- – пероксинитрит


ПЛЕХОВА

Наталья Геннадьевна


УЛЬТРАСТРУКТУРНАЯ И ЦИТОХИМИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МАКРОФАГОВ, ИНФИЦИРОВАННЫХ

РНК-СОДЕРЖАЩИМИ ВИРУСАМИ


03.00.25 – гистология, цитология и клеточная биология


АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

доктора биологических наук


Подписано в печать 20.06.2008 Формат 60 Х 84/16

Уч. изд. л. 1,0 Усл. печ. Л. 1,5 Тираж 100 экз. Заказ № 910

Отпечатано в типографии ИПК МГУ им. адм. Г.И. Невельского

690059 г. Владивосток, ул. Верхнепртовая, 50 а