Классическая чума свиней. Особенности проявления и специфическая профилактика
Диссертация - Сельское хозяйство
Другие диссертации по предмету Сельское хозяйство
µратуру тела в течение 4-х дней. У кроликов, реагирующих на введение вакцины, температура тела должна повышаться до 41,5С.
На основании полученных данных термометрии по методу Рида и Менча рассчитывали титр вируса вакцины. Титр вируса в вакцине должен быть не менее 103,0 ИД 50/смЗ.
.3.7 Определение контаминации вакцины бактериальной и грибковой микрофлорой. Пять флаконов отдельно растворяли в растворе Хенкса или в среде Игла, или среде 199. Для этого в каждый флакон с вакциной, добавляли 10 мл указанного раствора рН 7,2. Затем производили посев из каждого флакона вакцины в количестве 0,3-0,5 см3 в пробирки с МПА, МПБ, МППБ, Сабуро и во флаконы в количестве 2-5 см3 с МПБ и МППБ. Посевы производили в две пробирки и в один флакон с каждой средой из одного флакона вакцины. Питательные среды с посевами выдерживали в течение 10 суток в термостате при плюс 37-38С (для агара Сабуро - плюс 20-22С). В питательных средах с посевами не должно быть роста бактериальной и грибковой микрофлоры.
.3.8 Иммуногенность вакцины проверяли на четырех серонегативных (2 из них контрольных) подсвинках массой 25-35 кг, возраст не моложе 60 дней, вакцинированных одной прививной дозой в объеме 2 см3. За иммунизированными животными велось наблюдение в течение 21 дня.
Через 21 сутки были отобраны пробы крови от вакцинированных и не вакцинированных поросят с целью получения сыворотки крови для исследования на наличие антител в ИФА. Вакцина считается иммуногенной, если в сыворотках крови иммунизированных поросят процент блокировки (связывания) антител имеет значение не менее 40.
Подопытных животных содержали по 2-3 головы в виварии РУП "Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н. Вышелесского". Помещения тщательно очищали механически, промывали водой, дезинфицировали 5%-ным раствором едкого натрия. Животные получали комбикорм, овощи и воду.
Статистическую обработку полученного цифрового материала производили с использованием программного пакета Microsoft Office XP (Excel).
Глава 3. Результаты исследований
3.1 Для получения лапинизированного штамма вируса КЧС использовали аттенуированный вирус классической чумы свиней "АСВ". Было проведено 5 пассажей его на взрослых клинически здоровых кроликах массой 2,0-2,5 кг средней упитанности по три животных на каждый пассаж, с температурой тела в пределах 38,5-39,5оС. Кроликов, реагировавших гипертермией свыше 40,5С, использовали для получения вируса для следующего пассажа. Результаты термометрии представлены в таблице 2.
Таблица 2 - Температурная реакция у кроликов при пассажировании вируса классической чумы свиней "АСВ"
ПассажТемпература тела (в среднем) С, часы12243036424854606672первый пассаж, 3 кролика39,039,039,539,739,739,840,040,240,540,8второй пассаж, 3 кролика39,139,339,439,739,839,940,140,440,7-третий пассаж, 3 кролика39,339,539,839,940,040,540,540,8--четвертый пассаж, 3 кролика39,539,840,040,240,540,9----пятый пассаж, 3 кролика39,840,040,140,541,0-----
Как видно из материалов таблицы уже при втором пассаже температура тела у кроликов повысилась до 40,7 через 66 часов, а не через 72 как отмечалось у кроликов при первом пассаже. При последующих пассажах закономерно уменьшался период подъема температуры. У кроликов пятого пассажа повышение температуры наблюдалось через 42 часа. Пассажирование вируса через организм кроликов сопровождалось усилением вирулентных свойств вируса АСВ. В дальнейшем нами была установлена стабильность явления усиления вирулентности. Таким образом, нами был получен штамм вируса классической чумы свиней с титром инфекционной активности 3 lgИД50/смЗ, названный "АСВ+".
.2 При изучении биологических свойств штамма лапинизированного вируса после пятого пассажа на кроликах, получившего название "АСВ+" исследовали его на способность вызывать температурную реакцию, а также способность накапливаться в организме животных при введении вируса в разных дозах. Для этого использовали как биологическую модель клинически здоровых кроликов с температурой тела в пределах 38,5-39,5оС массой 2,0-2,5 кг средней упитанности по три животных на каждое разведение вируса. Рабочие разведения вируса (нативный, 10-1; 10-2; 10-3; 10-4) вводили внутривенно в объеме 2 мл в краевую вену уха с соблюдением правил антисептики. Наблюдение за животными вели при периодическом измерении у них температуры тела в течение 72 часов после заражения с интервалом каждые 12 часов. Результаты определения инфекционного титра лапинизированного вируса штамма "АСВ+" по температурной реакции кроликов представлены в таблице 3.
Таблица 3 - Инфекционный титр лапинизированного вируса штамма "АСВ+" по температурной реакции у кроликов
Титр вирусаТемпература С, через (часов)122436486072нативный38,539,340,941,241,741,610-138,739,140,540,941,541,410-239,039,340,140,741,241,210-338,639,239,840,541,141,210-438,739,139,540,140,540,8
Исходя из этих данных для наработки вакцины выбрана оптимальная доза для заражения кроликов равная 2 мл с титром лапинизированного вируса - 103 ИД50/смЗ.
Для изучения антигенной активности вируса "АСВ+" трех кроликов иммунизировали лапинизированным вирусом внутривенно в дозе 1см3 с титром 103 ИД50/смЗ. Животных содержали под наблюдением в течение 20 дней, ежедневно отбирая пробы крови, для определения в сыворотке методом ИФА динамики антител и антигенов - график 1.
Данные, представленные на графике 1, демонстрируют взаимосвязь между уровнями выработки антител и накоплением антигена. Нарастание титра антител происходит поступательно с первых дней с незначительным спадом на второй и десятый день, который объ?/p>