Классическая чума свиней. Особенности проявления и специфическая профилактика
Диссертация - Сельское хозяйство
Другие диссертации по предмету Сельское хозяйство
ез сутки кровь дважды размораживали - замораживали при температуре минус 70С.
Инфекционную активность вируса определяли титрованием на взрослых кроликах. Из отобранной пробы в объеме 10 см3 готовили возрастающие 10-кратные разведения от 10-1 до 10-5. Каждое разведение 10-3, 10-4 и 10-5 вводили внутривенно в объеме 1 см3 трем кроликам. Начиная со вторых суток, у животных ежедневно 3 раза в день измеряли температуру тела в течение 4-х суток. У кроликов, реагирующих на введение вируссодержащего материала, температура тела повышалась до 41,5С.
На основании полученных данных термометрии по методу Рида и Менча рассчитывали титр вируса. При инфекционном титре не менее 3,0 lg ИД50/смЗ вируссодержащий материал замораживали на хранение при температуре минус 70С и по мере необходимости использовали для получения производственного вирусного сырья.
Для получения серии вакцины общим объемом 1,1 л (с учетом возможных отходов на всех этапах операций) брали 0,7 л оттаянного до температуры плюс 4-8оС вируссодержащего материала и, соблюдая стерильные условия, освобождали центрифугированием при 3000 об/мин в течение 20 мин от оболочек деструктированных эритроцитов и возможных сгустков. Надосадочную жидкость собирали в бутыль и добавляли антибиотики (пенициллин в концентрации 200 ЕД/мл и гентамицин в концентрации 50 мкг/мл, или их аналоги).
На расчетный 1 л вакцины брали следующее количество защитной среды для лиофилизации:
мл 50%-ного раствора сахарозы;
мл 20%-ного ГЛА;
мл 10%-ного желатина.
В наработанное вирусное сырье объемом 0,7 л вносили необходимое количество защитной среды из расчета 40% на 1000 дм3, тщательно перемешивали, при необходимости доводили рН до 7,2-7,4. Затем вакцину расфасовали по 20,06 см3 во флаконы вместимостью 8-10 см3, подвергали лиофилизации.
Таким образом, было изготовлено 50 000 доз вакцины (500 флаконов). При этом, было использовано 15 кроликов.
. Разработка методов контроля качества вакцины в лабораторных условиях
Методы контроля вакцины разрабатывали на основании требований, предъявляемых к ветеринарным препаратам, которые изложены в инструкции "О порядке регистрации ветеринарных препаратов в Республике Беларусь", Европейской Фармакопеи.
Разработаны следующие методы контроля вакцины сухой живой против классической чумы свиней из лапинизированного вируса: внешний вид, наличие посторонних примесей, трещин флаконов, массовая доля влаги, растворимость, стерильность, безвредность, биологическая активность вакцины по титру инфекционности для кроликов, иммуногенная активность (таблица 1).
Таблица 1 - Методы контроля вакцины сухой живой против классической чумы свиней
Наименования показателяХарактеристика и норма показателя1 Внешний вид и цветСухая гомогенная мелкопористая масса от светло-желтого до коричневого цвета2 Наличие посторонних примесейНе допускается3 Влажность, %2,5 - 3,04 Растворимость, мин1,5 - 2,05 Наличие вакуума во флаконах (ампулах) с вакцинойПри облучении флаконов (ампул) с вакциной наблюдается фиолетово-синее свечение и потрескивание6 СтерильностьНа питательных средах с посевами из вакцины не допускается рост бактерий или грибов7 Титр вируса в вакцинеНе менее 103.0ИД50/см38 БезвредностьВведение поросятам внутримышечно вакцины в объеме по 5,0 см3, подкожно белым мышам - по 0,5 см3, подкожно кроликам по 1,0 см3 не должна вызывать видимых изменений в месте инъекции и изменений общего состояния животных в течение последующих 10 суток. Вакцина считается безвредной, если все поросята в течение 14 суток - клинически здоровы9 Иммуногенная активностьВакцина считается иммуногенной, если в сыворотках крови иммунизированных поросят процент блокировки антител имеет значение не менее 40.
2.3.1 Внешний вид вакцины, наличие посторонних примесей определяли визуально.
.3.2 Растворимость вакцины определяли путем добавления во флаконы (ампулы) с вакциной 10,0 мл физиологического раствора хлорида натрия и определения времени растворимости в течении 1-3 минут.
.3.3 Наличие вакуума во флаконах, с вакциной определяли согласно ГОСТ 28083-89 "Препараты биологические. Методы контроля вакуума в ампулах и флаконах".
.3.4 Массовую долю влаги определяли по ГОСТ 24061-89 "Препараты биологические. Метод определения влажности".
.3.5 Для определения безвредности брали 10 флаконов с вакциной, в каждый добавляли по 2 мл физраствора. После растворения содержимое всех флаконов переносили в стерильный стеклянный флакон и тщательно перемешивали. Полученную смесь использовали для испытания.
Безвредность вакцины определяли на пяти мышах массой 18-20 г путем подкожного введения 0,5 см3 вакцины, на двух кроликах массой 2,0-2,5 кг - 1см3, и двух поросятах 3-4-недельного возраста, путем внутримышечного введения в область шеи вакцины в объеме 2 см3.
Вакцина считается безвредной, если все животные в период наблюдения (10-14 дней) останутся клинически здоровыми. На месте введения не должно быть каких-либо изменений (отека, эритем, уплотнений). У части поросят возможно кратковременное на 1-2 сутки после введения вакцины повышение температуры тела на 0,5-1,0оС.
.3.6 Активность вакцины определяли титрованием вакцины на взрослых кроликах. Содержимое 5 флаконов растворяли добавлением 2 см3 стерильного физраствора, смешивали в общем флаконе и из этой смеси готовили возрастающие 10-кратные разведения от 10-1 до 10-5. Каждое разведение 10-3, 10-4 и 10-5 вводили внутривенно в объеме 1 см3 трем кроликам. Начиная со вторых суток, у животных ежедневно 3 раза измеряли темп?/p>