Влияние перекисных условий на показатели функциональной активности нейтрофилов перифирической крови человека
Дипломная работа - Медицина, физкультура, здравоохранение
Другие дипломы по предмету Медицина, физкультура, здравоохранение
фагоцитоза с использованием культуры St. aureus с последовательным отбором проб через 30, 60, 90, 120 мин с начала инкубации. Результаты использовались для оценки основных функциональных параметров фагоцитарной реакции: фагоцитарного показателя (ФП) и фагоцитарного числа (ФЧ).
Как видно из представленных результатов (рисунок 14), в контроле количество клеток, вступающих в фагоцитоз, достигает максимума 78 % (77;80) после 90 минут инкубации с последующим плавным снижением этого показателя до 72% (71;77) к 120 мин.
Таким образом, 90 минут - это время, необходимое для функциональной активации интактных клеток и перехода их в стадию активного поглощения микроорганизмов.
Рисунок 14 - Изменение фагоцитарной активности интактных и инкубированных в окислительных условиях нейтрофилов (p<0,05)
У нейтрофилов, предварительно инкубированных с 0,005 и 0,01 М Н2О2, наблюдается сдвиг максимума фагоцитарной активности в сторону уменьшения времени, необходимого для клеточной активации до 30 мин и значение ФП в этой точке достоверно возрастает до 81% (80;83), кроме этого происходит общее увеличение показателя ФП на 10-25% по сравнению с контролем в течение всего времени инкубации.
Предварительная инкубация нейтрофилов с 0,05М перекисью водорода (рисунок 14) также приводит к увеличению их способности вступать в фагоцитоз, однако этот показатель несколько ниже аналогичного параметра нейтрофилов, обработанных 0,005 М и 0,01 М Н2О2 с максимумом на 90-й мин инкубации.
Таким образом, для Н2О2-обработанных нейтрофилов в целом наблюдается достоверное увеличение показателя фагоцитарной активности в среднем на 10-25% от значения контроля и уменьшается время, необходимое для первичной активации клеток, вступающих в фагоцитоз. Максимум активирующего эффекта наблюдается для клеток, обработанных 0,005 М и 0,01 М Н2О2 . Полученные нами данные хорошо согласуются с результатами других авторов. [42, 43]
Динамика изменения поглотительной способности нейтрофилов после воздействия перекиси водорода также имеет тенденцию к значительному возрастанию. Следует отметить, что изменение данного показателя для контрольной пробы имеет два пика - максимум поглощения на 60 мин инкубации и минимум поглощения на 90 мин, при сохраняющемся среднем значении поглощения на уровне 5 (4,7;5,3) на 30, 120 мин инкубации.
Для нейтрофилов, предварительно инкубированных с 0,005 М Н2О2, наблюдается аналогичная динамика поглотительной способности (рисунок 15), но значения данного параметра почти на единицу достоверно выше для всех контрольных точек в ходе фагоцитарной реакции (p<0,05).
Нейтрофилы, предварительно инкубированные с 0,01 М Н2О2 и 0,05 М Н2О2 также демонстрируют большую поглотительную способность по сравнению с контролем. В этом случае также наблюдается увеличение значений поглощения микроорганизмов более чем на единицу и также с максимумом на 60 мин инкубации и минимумом на 90 мин.
Рисунок 15 - Изменение поглотительной способности интактных и инкубированных в окислительных условиях нейтрофилов в ходе фагоцитарной реакции (p<0,05)
Полученные результаты по изменению поглотительной способности нейтрофилов хорошо согласуются с данными о динамике изменения фагоцитарной активности для контрольной и анализируемых популяций клеток.
Достоверность всех полученных результатов оценивалась с использованием анализа ANOVA по Фридмену и критерия Вилкоксона для зависимых групп с уровнем значимости 0,05. (приложение А1-6)
Общее увеличение количества фагоцитируемых объектов на 20-40% для 0,005 М, 0,01М и 0,05 М Н2О2-обработанных нейтрофилов является результатом активирующего воздействия предварительной инкубации клеток с перекисью водорода, которое сохраняется после снятия воздействия. Находящиеся в активированном состоянии клетки не только быстрее и в большем количестве вступают в фагоцитоз, что отражается в увеличении фагоцитарной активности, но и способны за меньшее время фагоцитировать большее количество объектов, что приводит к увеличению значений показателя поглощения. Наиболее эффективными активирующими концентрациями являются 0,005 М, 0,01 М и 0,05 М Н2О2.
У грамположительных бактерий, к которым относится использованный в эксперименте St. аureus, в состав клеточных стенок входят, кроме мукопептидов, полисахариды, тейхоевые и липотейхоевые кислоты, находящиеся в комплексе с основным компонентом клеточной стенки - муреином. К рецепторам, распознающим патоген-ассоциированные паттерны клеточной стенки грамположительных бактерий, относятся маннозные, скавенджер рецепторы, TLR - 1, 2, 4, 5, 6, 9, NOD1. Так как в экспериментах была использована суспензия St. aureus, опсонизированная объединенной донорской сывороткой, можно утверждать, что в процессы распознавания, фиксации и поглощения микроорганизма были вовлечены и рецепторы к компонентам системы комплемента и Fc-рецепторы. И анализируя полученные данные можно предположить, что активирующий эффект действия перекиси водорода также может быть связан с индукцией активированного конформационного состояния ведущих паттерн-распознающих рецепторов нейтрофилов и изменением динамического состояния наружной мембраны. Через 60 минут развития фагоцитарной реакции ведущую роль в увеличении процента фагоцитирующих клеток начинают играть рецепторы к опсонизирующим сывороточным лигандам, эффективность действия которых у Н2О2-обработаных клеток также выше, чем у интактных. Наибольший эффект предварительная инкубация с Н2О2 оказывает на активность поглощения микроорганизмо?/p>