Влияние перекисных условий на показатели функциональной активности нейтрофилов перифирической крови человека
Дипломная работа - Медицина, физкультура, здравоохранение
Другие дипломы по предмету Медицина, физкультура, здравоохранение
нные нейтрофилы обладают в 2-3 раза более высокой НАДФ-оксидазной активностью и пик этой активности наблюдается уже в первые 30 минут от начала фагоцитарной реакции. Это может быть результатом того, что сборка НАДФ-оксидазного комплекса произошла ранее, еще до контакта iужеродным агентом, и функционально полноценный фермент с высокой скоростью турновера обеспечивает нейтрофилу возможность не только более быстрой нейтрализации объекта с последующим образованием фагосомы, но и осуществление событий дыхательного взрыва со значительно большей скоростью и эффективностью.
Наше предположение подтверждается и раiетами коэффициентов стимуляции спонтанного и индуцированного НСТ-тестов (рисунок 18).
Рисунок 18 - Коэффициент стимуляции ферментативной активности НАДФ-оксидазы интактных и инкубированных в окислительных условиях нейтрофилов
Очевидно, что смещение максимума активности с 60 минуты на 30 минуту инкубации позволяет осуществлять больше событий единичного фагоцитоза за единицу времени, а также увеличить эффективность реакций киллинга и расщепления чужеродного агента.
3.3 Изменение активности миелопероксидазы нейтрофилов, после инкубации в окислительных условиях
iелью дальнейшего изучения бактерицидной способности полиморфоядерных гранулоцитов периферической крови использовали тест оценки спонтанной и индуцированной ферментативной активности миелопероксидазы специфических гранул с использованием ортофенилендиамина и перекиси водорода в качестве субстратов.
Результаты экспериментов по оценке спонтанной активности миелопероксидазы специфических гранул представлены на рисунке 19.
Рисунок 19 - Изменение спонтанной активности миелопероксидазы интактных и инкубированных в окислительных условиях нейтрофилов (p<0,05)
У интактных нейтрофилов наблюдается пик пероксидазной активности на 90 мин инкубации. 0,01 и 0,05 М Н2О2-обработанные нейтрофилы максимально освобождают миелопероксидазу специфических гранул также на 90 минуте инкубации, но ее активность и, возможно, количество, в 1,5-2 раза выше.
,005 М Н2О2-обработанные нейтрофилы имеют миелопероксидазную активность только в 0,5 раза достоверно выше интактных.
Достоверность всех полученных результатов оценивалась с использованием анализа ANOVA по Фридмену и критерия Вилкоксона для зависимых групп с уровнем значимости 0,05. (приложение А14-17)
Таким образом, в большей степени стимуляция спонтанной секреции и активности миелопероксидазы специфических гранул нейтрофилов на всем протяжении времени инкубации регистрируется только для 0,01 и 0,05 М Н2О2-обработанных нейтрофилов и незначительно для 0,005 М Н2О2-обработанных.
Возможно, это связано с особенностями процессов инициации движения и секреции специфических гранул, которые запускаются в результате активации рецепторного комплекса нейтрофилов. В отсутствии специфических лигандов активация рецепторов может происходить благодаря изменению подвижности и физических характеристик цитоплазматической мембраны, которые могут быть инициированы влиянием перекиси водорода. Очевидно, что этот процесс может иметь концентрационно-зависимый характер.
Изучение изменения миелопероксидазной активности специфических гранул нейтрофилов в процессе фагоцитоза проводили с использованием опсонизированной компонентами объединенной донорской сыворотки культуры St. aureus (рисунок 20).
Активность миелопероксидазы интактных клеток повышается, начиная с 30 до 90 минуты инкубации. 0,005, 0,01, 0,05 М Н2О2-обработанные нейтрофилы обладают максимальной миелопероксидазной активностью, которая в 2-3 раза достоверно превышает активность миелопероксидазы интактных клеток с максимумом на 90 мин инкубации.
Достоверность всех полученных результатов оценивалась с использованием анализа ANOVA по Фридмену и критерия Вилкоксона для зависимых групп с уровнем значимости 0,05. (приложение А18-23).
Рисунок 20 - Изменение активности миелопероксидазы интактных и инкубированных в окислительных условиях нейтрофилов в индуцированном тесте (p<0,05)
Полученные результаты согласуются с результатами экспериментов по определению спонтанной активности миелопероксидазы специфических гранул. Очевидно, что перекись водорода в концентрациях 0,01 и 0,05 М оказывает активирующее влияние на процессы либерализации специфических гранул нейтрофилов и увеличение ферментативной активности миелопероксидазы в процессе фагоцитоза. Неспецифическая активация рецепторного комплекса и самой мембраны нейтрофилов, возникающая в результате воздействия перекиси водорода, усиливается благодаря специфическому связыванию рецепторов со своими лигандами, что приводит к запуску множественных сигнальных ферментативных каскадов, инициации транскрипции генов, контролирующих процесс фагоцитоза и активации цитоскелета. Совокупное действие этих процессов обеспечивает быструю либерацию специфических гранул и увеличивает эффективность процессов киллинга и элиминации чужеродного агента.
Полученные данные хорошо согласуются с результатами других авторов.
Наше предположение подтверждается и раiетами коэффициентов стимуляции спонтанного и индуцированного тестов на миелопероксидазу (рисунок 21).
Рисунок 21 - Коэффициент стимуляции ферментативной активности миелопероксидазы интактных и инкубированных в окислительных условиях нейтрофилов
3.