Программа фундаментальных исследований Президиума ран

Вид материала

Содержание

Разработка метода осаждения цезия-137 in situ микрофлорой бассейнов-накопителей низкоактивных жро гхк г. железногорска.
Петербургский институт ядерной физики им. Б.П. Константинова РАН, Гатчина
Белки растительного происхождения как ингибиторы тромбогенеза

Подобный материал:

1 ... 49 50 51 52 53 54 55 56 ... 72

РАЗРАБОТКА МЕТОДА ОСАЖДЕНИЯ ЦЕЗИЯ-137 IN SITU МИКРОФЛОРОЙ БАССЕЙНОВ-НАКОПИТЕЛЕЙ НИЗКОАКТИВНЫХ ЖРО ГХК Г. ЖЕЛЕЗНОГОРСКА.

А.В. Суслов, И.Н. Суслова, В.П. Степанова, Б.Ф. , Н.А. Суслова

Петербургский институт ядерной физики им. Б.П. Константинова РАН, Гатчина

В настоящее время одним из приоритетных направлений в нашей стране является проблема здоровья населения, проживающего в местах с высоким уровнем техногенных загрязнений, а такими являются практически все мегаполисы и промышленные районы. А одним из наиболее перспективных и мягких методов решения проблемы очистки окружающей среды от наиболее опасных загрязнителей, таких как тяжелые металлы и радионуклиды, является метод биоремедиации, т.е. метод, использующий способности как природных, так и созданных методами генной инженерии микроорганизмов осуществлять сорбцию ионов тяжелых металлов и радионуклидов. На основе этого метода во всем мире уже разработаны технологии очистки и выделения самых разнообразных металлов, однако еще нет достаточно эффективных технологий по очистке от радионуклидов, в частности, таких как ¹³⁷Cs и ⁹⁰Sr. Для выполнения данной задачи нами была собрана большая коллекция микроорганизмов, обитающих в зонах с экстремальными условиями, как природными (такими как полуостров Камчатка и острова Курильской гряды), так и в различных техногенных местах обитания (технологические воды реактора ВВР-М и цеха водоочистки ПИЯФ, озер-накопителей низкоактивных жидких отходов радиационно-химического производства ГХК г. Железногорска, содержащих до до 3·10⁷ Бк/л ионов ¹³⁷Cs и 3·10⁷ Бк/л ионов ⁹⁰Sr).

Около 500 штаммов из этой собранной коллекции нами были проверены на способность расти на твердых и в жидких Д-средах, содержащих различные концентрации тяжелых металлов, до 10 мМ/л солей урана и/или никеля, до 100 мМ/л цезия и/или стронция. Одновременно проводится работа с использованием различных методов, таких как TXRES (Total-Reflection X-Ray Fluorescence Spectrometry), радиометрические и микробиологические эксперименты по определению сравнительных характеристик данных штаммов и эффективности связывания ими ионов исследуемых металлов и радионуклидов. Выделен ряд природных штаммов, способных эффективно связывать при комнатной температуре Ni²⁺ - металл, который наиболее часто присутствует в технологических отходах. На данных штаммах проведены исследования способности клеток связывать как нерадиоактивный ион никеля, так и его радиоизотоп ⁶³Ni. Более 20 штаммов были отобраны для проведения модельных экспериментов по связыванию ¹³⁷Cs/⁹⁰Sr из стандартной ростовой среды и 18 штаммов - ²³⁸U. Начата работа по видоопределению отобранных штаммов. Предварительные исследования показали, что часть из них относятся к роду Rhodotorula (видам Rh. minuta и Rh. mucilaginosa), а также роду Candida (Cand. Haemulonii).

На основании полученных результатов нами был отобран ряд штаммов, а именно KII-110-3, KI-20-1a, KI-17-2, KI-17-5-1 и KI-215-4 для натурных экспериментов на ГХК г. Железногорска, обладающих наибольшей эффективностью связывания ¹³⁷Cs ( до 85% ) из модельных ростовых сред, близких по составу к растворам озер накопителей 354^а и 365^г низкоактивных жидких технологических отходов радиационно-химического производства ГХК.

^

БЕЛКИ РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ КАК ИНГИБИТОРЫ ТРОМБОГЕНЕЗА

С.Д. Варфоломеев, М.А. Розенфельд, Е.А. Костанова

Институт биохимической физики им. Н.М.Эмануэля РАН, Москва

Процесс свертывания крови осуществляется последовательно протекающими ферментативными реакциями, заканчивающимися генерацией тромбина, который превращает растворимый фибриноген в фибриновый гель и одновременно с этим активирует фибринстабилизирующий фактор (ФXIIIa). Последний катализирует образование ε-(γ-глутамил)лизиновых перекрестных связей в α- и γ- полипептидных цепях молекул фибрина. В связи с отсутствием физиологических ингибиторов неконтролируемое повышение ферментативной активности ФXIIIa обусловливает возникновение тяжелых видов коагулопатий.

Методом аффинной хроматографии на сорбенте КМ-химопапаин-сефароза 4В был выделен комплекс ингибиторов природного происхождения из клубней картофеля Solanum tuberosum, подавляющий транспептидазную активность фермента. Белковый препарат относится к классу ингибиторов цистеиновых протеиназ (ИЦП) и способен блокировать активность ФXIIIa прямым воздействием на его существенную сульфгидрильную группу.

Методом ВЭЖХ комплекс ингибиторов был разделен на пять основных отдельных белковых компонентов: высокомолекулярных с массами: ~ 80 и 65 кДа; низкомолекулярных с массами: ~36, 25 и 22 кДа. Методом рэлеевского светорассеяния показано, что все белковые компоненты за исключением ингибитора с м.м. 80 кДа образуют с фибринстабилизирующим фактором эквимолярный комплекс, что обусловливает ингибирующее действие белков ИЦП. Это подтверждено прямым методом флуоресцентного электрофореза, где выявлено подавление ферментативной транспептидазной активности ФXIIIa в присутствии выше указанных ИЦП.

Методом электрофореза восстановленных образцов перекрестносшитого фибрина установлено, что белки с молекулярными массами 65, 36, 25, и 22 кДа соответственно ингибируют скорость процессов γ-димеризации и α-полимеризации полипептидных цепей фибрина. Турбидиметрическим методом выявлена повышенная чувствительность фибринового геля в присутствии ингибиторов к гидролитическому действию плазмина.

Также показано, что ингибиторы снижают ферментативную активность фибринстабилизирующего фактора в плазме крови доноров и больных.

Blog