Geum.ru

Программа фундаментальных исследований Президиума ран

Вид материалаПрограмма

Содержание


Гиперкоагуляция, вызываемая разбавлением плазмы стандартными плазмозамещающими растворами
И.В. Грибкова
Создание макромолекулярных систем с антиоксидантными свойствами с целью коррекции реперфузионных повреждений
Институт эволюционной физиологии и биохимии им. И.М.Сеченова РАН, С.-Петербург
Санкт-Петербургский государственный университет, С.-Петербург
Подобный материал:
1   ...   39   40   41   42   43   44   45   46   ...   72
^

ГИПЕРКОАГУЛЯЦИЯ, ВЫЗЫВАЕМАЯ РАЗБАВЛЕНИЕМ ПЛАЗМЫ СТАНДАРТНЫМИ ПЛАЗМОЗАМЕЩАЮЩИМИ РАСТВОРАМИ




Ф.И. Атауллаханов 1, 2), Е.И. Синауридзе 1), А.С. Горбатенко 1), М.А. Пантелеев 1),

^

И.В. Грибкова 1),

1) Гематологический научный центр РАМН, Москва
2) Центр теоретических проблем физико-химической фармакологии РАН, Москва


Свертывание крови представляет собой сложный каскад реакций, охваченный петлями многочисленных положительных и отрицательных обратных связей. Его функция заключается в локальном превращении плазмы крови в гель в месте повреждения сосуда с тем, чтобы предотвратить кровопотерю. Любое нарушение в работе такой сложной системы приводит к серьезным клиническим осложнениям - тромбозам, либо кровотечениям.

Многие патологические состояния требуют для своей коррекции переливания больших объемов плазмозамещающих растворов (ПЗР). С этой целью используют различные кристаллоидные и коллоидные растворы. Они способны восстанавливать объем потерянной крови, но не содержат плазменных компонентов системы свертывания. Массивные переливания таких растворов приводят к снижению концентраций этих компонентов в крови и осложнениям свертывания. Целью настоящей работы было изучение нарушений гемостаза при разбавлении плазмы стандартными ПЗР и разработка методов коррекции этих нарушений. Для этого были изучены изменения в работе системы свертывания при разбавлении плазмы in vitro рядом ПЗР. Для экспериментальной проверки статуса гемостаза использовали два современных in vitro метода: тест генерации тромбина и измерение скорости роста сгустка в пространстве. Показано, что при умеренных степенях разбавления плазмы (до 2-3 раз) любым ПЗР, наблюдается увеличение генерации тромбина, т.е. гиперкоагуляция. Этот эффект, по-видимому, не связан с природой использованного ПЗР, а вызван непосредственно процессом разбавления. Так как предшественники прокоагулянтных факторов свертывания присутствуют в плазме в достаточно большом избытке, а кинетика ингибирования образующихся активных факторов плазменными ингибиторами подчиняется уравнениям второго порядка, т.е. скорость ингибирования прямо пропорциональна концентрации этих ингибиторов, то причина наблюдаемой гиперкоагуляции может быть в том, что в этих условиях система оказывается более чувствительна к разбавлению присутствующих в плазме ингибиторов, чем к снижению концентраций предшественников прокоагулянтных факторов свертывания. В отличие от теста генерации тромбина, при исследовании пространственного роста сгустка было обнаружено, что при умеренных степенях разбавления плазмы кристаллоидными ПЗР также наблюдается увеличение скорости роста сгустка (гиперкоагуляция), однако коллоидные растворы влияют на эту скорость по-разному. В зависимости от использованного раствора, при разбавлении плазмы скорость могла либо возрастать, либо практически не изменяться, либо уменьшаться. Авторы полагают, что причина этого в том, что коллоидные растворы могут влиять на гемостаз двумя путями: с одной стороны, сам процесс разбавления плазмы любым раствором будет увеличивать количество генерированного тромбина, а с другой, коллоид может ингибировать процесс полимеризации фибрина, препятствуя реальному образованию сгустка в плазме, или снижая его качество. Степень влияния на полимеризацию зависит от типа использованного коллоида. Таким образом, суммарный эффект коллоидного ПЗР будет определяться суммой двух разнонаправленных воздействий. Для коррекции возникающих при разбавлении плазмы гиперкоагуляционных нарушений было предложено добавлять в стандартные ПЗР ингибитор тромбина. Показано, что такая коррекция действительно происходит при введении в ПЗР природного ингибитора тромбина - антитромбина III или его специально синтезированных низкомолекулярных ингибиторов.

Работа выполнена в рамках проекта «Фундаментальные науки – медицине».

^

СОЗДАНИЕ МАКРОМОЛЕКУЛЯРНЫХ СИСТЕМ С АНТИОКСИДАНТНЫМИ СВОЙСТВАМИ С ЦЕЛЬЮ КОРРЕКЦИИ РЕПЕРФУЗИОННЫХ ПОВРЕЖДЕНИЙ

Г.Б.Белостоцкая1), Р.С.Хрусталева2), Н.С. Домнина3), А.А.Цырлин2), Т.А.Голованова1), И.В.Дарашина1)

^
1)Институт эволюционной физиологии и биохимии им. И.М.Сеченова РАН,
С.-Петербург
2)Федеральный центр сердца, крови и эндокринологии им. В.А.Алмазова Росмедтехнологий, С.-Петербург
^
3)Санкт-Петербургский государственный университет, С.-Петербург


Патологические процессы, которые развиваются в первые минуты реперфузии, приводят к резкому и значительному увеличению активных кислородных радикалов (АКР) и сопровождаются нарастанием внутриклеточной концентрации кальция [Ca2+]i. Для предупреждения повреждающего действия АКР были разработаны макромолекулярные системы с антиоксидантными свойствами – МСАО, представляющие собой гидроксилсодержащие полимеры и являющиеся основой коллоидных плазмозаменителей (декстран -Д, гидроксиэтилкрахмал –ГЭК), которые содержат в своей структуре химически связанные фрагменты низкомолекулярных антиоксидантов из класса пространственно-затрудненных фенолов (ПЗФ).

Антиокислительную активность (АОА) МСАО оценивали по угнетению хемилюминесценции модельных систем, в которых вызывали генерацию активных форм кислорода. Было установлено, что АОА МСАО (ГЭК+АО) и (Д+АО) в 10-12 раз выше по сравнению с их низкомолекулярным аналогом феноксаном. Оценка мембраностабилизирующего влияния на эритроциты ГЭК-АзФ и Д-АзФ в растворе 0,4 % NaCl в концентрациях 10-4-10-12 моль/л показала, что при уменьшении концентрации МСАО

глубина гемолиза сначала уменьшается, достигая минимальной величины при с = 10-8 моль/л, а затем возрастает. Стабилизирующее влияние изучаемых МСАО лежит в пределах концентраций от 10-7 до 10-10 моль/л.

Увеличение содержания Са2+ в цитоплазме кардиомиоцитов в результате активации свободно-радикальных процессов при реперфузии может быть опосредовано участием Са2+ каналов клеточной мембраны. В связи с этим оценивали разные подходы защиты клеток миокарда от избыточной концентрации Са2+: с использованием блокатора Са2+ каналов L типа - изоптина, природного антиоксиданта – гистохрома, низкомолекулярного антиоксиданта из класса ПЗФ феноксана и макромолекулярных систем с антиоксидантными свойствами - ГЭК-АзФ и Д-АзФ. В экспериментах in vitro на свежевыделенных кардиомиоцитах новорожденных крыс показано, что изоптин (2,5·10-4 мг/мл) защищает клетки от окислительного стресса, вызванного действием перекиси водорода (Н2О2) в диапазоне концентраций 3·10-4-3·10-8 М, только при предварительном воздействии от 10 мин до 2,5 ч и его дальнейшем присутствии во время окислительного стресса. Одновременное действие гистохрома (2·10-4 %) и Н2О2 (3·10-4 М) в течение 10 мин позволяет поддерживать [Ca2+]i практически на исходном уровне, однако длительная обработка кардиомиоцитов гистохромом вместе с Н2О2 (10-2-10-7 М) не сдерживает нарастание [Ca2+]i после 40 мин совместной инкубации. Предварительные исследования по действию феноксана, ГЭК-АзФ и Д-АзФ во время окислительного стресса (Н2О2, 3·10-4 М) показали, что концентрации препаратов, удерживающих [Ca2+]i на исходном уровне в течение 1 ч, составляют 1-5·10-6 М, 1-5·10-7 М и 0,5-1·10-8 М соответственно. Более низкие и эффективные по сравнению с низкомолекулярным аналогом феноксаном концентрации ГЭК-АзФ и Д-АзФ в сочетании с их мембраностабилизирующими свойствами в этом же диапазоне концентраций подтверждают перспективность создания и применения МСАО в практической медицине.