Программа фундаментальных исследований Президиума ран

Вид материала

Программа

Содержание УСЛОВИЯ ОБРАЗОВАНИЯ КОМПЛЕКСА α-ЛАКТАЛЬБУМИНА С ОЛЕИНОВОЙ КИСЛОТОЙ - ПОТЕНЦИАЛЬНОГО ПРОТИВООПУХОЛЕВОГО ПРЕПАРАТА Механизм действия и специфическая фармакологическая активность нового синтетического ненаркотического анальгетического средства Ю. И. Поляков

Подобный материал:

• Программа фундаментальных исследований президиума ран «Биоразнообразие» 2005-2008,, 173.94kb.
• Распоряжение Президиума ран от 23 сентября 2008 г. №10104-653 "Об утверждении Порядка, 422.29kb.
• Программа отчетной конференции по программе фундаментальных исследований Президиума, 123.52kb.
• Программа Ассоциация этнографов и антропологов России Институт этнологии и антропологии, 1172.05kb.
• Программа ростов-на-Дону 2007 Конференция осуществляется при финансовой поддержке Российского, 406.02kb.
• Российская академия наук Программа фундаментальных исследований Президиума ран фундаментальные, 9808.28kb.
• Российская академия наук Программа фундаментальных исследований Президиума ран фундаментальные, 3754.56kb.
• П. П. Ширшова ран мгту им. Н. Э. Баумана XII международная научно-техническая конференция, 200.72kb.
• Проекты программы межрегиональных и межведомственных фундаментальных исследований (совместные, 423.42kb.
• Тезисы докладов, 3726.96kb.

^ УСЛОВИЯ ОБРАЗОВАНИЯ КОМПЛЕКСА α-ЛАКТАЛЬБУМИНА С ОЛЕИНОВОЙ КИСЛОТОЙ - ПОТЕНЦИАЛЬНОГО ПРОТИВООПУХОЛЕВОГО ПРЕПАРАТА

Е.А. Пермяков¹⁾, Е.Л. Князева¹⁾, В.М. Грищенко¹⁾, И.В. Першикова¹⁾, С.Е Пермяков¹⁾,

Р.С. Фадеев²⁾, В.С.Акатов²⁾

¹⁾ Институт биологического приборостроения РАН, Пущино

²⁾ Институт теоретической и экспериментальной биофизики РАН, Пущино

Известно, что некоторые конформационные состояния металл-связывающего белка α-лактальбумина (ЛА) в комплексе с олеиновой кислотой (ОК) (состояние HAMLET) индуцируют апоптоз опухолевых клеток, не затрагивая здоровые клетки, ингибируют клеточную пролиферацию, а также проявляют бактерицидное действие. В то же время, условия и механизмы образования этого комплекса исследованы недостаточно полно, отсутствуют физико-химические данные по стехиометрии и термодинамике взаимодействия ЛА с ОК. По этой причине задача изучения условий образования этих молекулярных наноструктур, обладающих выраженным антираковым действием, является важной и актуальной.

Методами абсорбционной и флуоресцентной спектроскопии, а также спектроскопии кругового дихроизма изучено взаимодействие человеческого ЛА с олеиновой кислотой в растворах низкой и высокой (150 мМ NaCl или KCl) ионной силы при рН 8,3 и различных температурах в диапазоне от 17 до 45°С. Раствор ЛА (6 мкМ) титровали спиртовым раствором ОК, причем общая концентрация ОК в растворе не превышала величины критической концентрации мицеллообразования ОК, С_m, измеряемой спектрофотометрически. Показано, что в присутствии 1 мМ Са²⁺ С_m для ОК составляет 3 мкМ, что препятствует исследованию процесса комплексообразования в этих условиях. В отсутствие ионов Са²⁺ (1 мМ ЭДТА) наблюдается увеличение С_m в присутствии ЛА (6 мкМ) до 35 мкМ (17°C) - 81 мкМ (45°С). Добавление NaCl повышает величину С_m до 83 (17°С) - 198 мкМ (45°С). Замена ионов Na⁺ на К⁺ приводила к аналогичному эффекту. Образование комплекса ЛА с ОК сопровождается длинноволновым сдвигом максимума спектра триптофановой флуоресценции, ростом величины квантового выхода флуоресценции, а также уменьшением эллиптичности в ближней УФ-области (увеличение подвижности окружения остатков триптофана и тирозина), увеличением эллипичности в дальней УФ-области (рост содержания α-спиралей) и уменьшением термостабильности белка (сдвиг середины теплового перехода на 10°С). Кривая спектрофлуориметрического титрования апо-белка олеиновой кислотой при 17^оС и 45^оС имеет сложный характер, говорящий о наличии промежуточных состояний, но описывается простейшей кооперативной схемой связывания с эффективной равновесной константой ассоциации ОК соответственно 210⁴ М^-1 и 310⁵ М^-1 и коэффицинтом Хилла 1,3 и 1,4.

Таким образом, оптимальными условиями для образования комплекса ЛА-ОК являются отсутствие ионов Са²⁺ (апо-форма ЛА), присутствие 150 мМ NaCl в растворе, и повышенная температура 45°С, при которой апо-белок находится в термически развернутом состоянии.

Обнаружено, что комплекс ЛА-ОК, образованный в указанных условиях, обладает цитотоксической активностью в отношении клеток эпидермоидной карциномы человека, сходной с активностью состояния HAMLET, образованного путем неконтролируемого смыва белком олеиновой кислоты, предварительно нанесенной на колонку с носителем DEAE-Trisacryl M.

^ МЕХАНИЗМ ДЕЙСТВИЯ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ НОВОГО СИНТЕТИЧЕСКОГО НЕНАРКОТИЧЕСКОГО АНАЛЬГЕТИЧЕСКОГО СРЕДСТВА - ПРЕПАРАТА «АНОЦЕПТИН»

^ Ю. И. Поляков ¹ , Е. В. Лопатина ^2,3, А.Д. Коротков ¹

¹⁾Институт мозга человека РАН, Санкт-Петербург

²⁾ Институт физиологии им. И. П. Павлова РАН, Санкт-Петербург

³⁾Федеральное государственное учреждение «Федеральный центр сердца, крови и эндокринологии им. В.А. Алмазова Росмедтехнологий», Санкт-Петербург

В Институте физиологии им. И. П. Павлова РАН создан новый отечественный препарат – синтетический ненаркотический анальгетик «Аноцептин». Лекарственная форма препарата представляет собой раствор для внутривенных инъекций. Экспериментально доказано, что действие препарата «Аноцептин» основано на активации  механизма мембранной сигнализации, участвующего в кодировании ноцицептивного сигнала и регулирующего активационное воротное устройство натриевого тетродотоксинустойчивого канала. Исследование специфической фармакологической активности препарата показало, что по анальгетическим свойствам Аноцептин» в 10 раз превосходит анальгин, и сопоставим с трамадолом. В опытах in vivo на разных видах животных доказано, что препарат не вызывает психической и физической зависимости. При приеме на фоне эмоционального стресса проявляет легкие антидепрессивные и транквилизаторные свойства. «Аноцептин» купирует токсические эффекты опиатов. Препарат не оказывает негативного влияния на сердечно-сосудистую, пищеварительную и дыхательную системы. Препарат не имеет негативных эффектов в отношении ЦНС.

В опытах in vitro на 10-12 дневных куриных эмбрионах обнаружена способность коменовой кислоты, дозозависимо регулировать рост и пролиферацию клеток. Действие препарата тканеспецифично. Оно основано, на способности коменовой кислоты модулировать сигнальную функцию Na/K –АТФазы. Специальные исследования по изучению влияния препарата «Аноцептин» на рост перевитых опухолей (карцинома Эрлиха, саркома Плиса) показали, что препарат не стимулирует рост новообразований.

Исследования на собаках показали, что начальные фазы фармакокинетики протекают очень быстро и связаны с распределением коменовой кислоты из водной составляющей крови в ткани. Перераспределение происходит с высокой скоростью: за первые 10 минут из плазмы крови уходит около 95% введенного препарата, а через 2 часа в плазме крови остается около 1% от первоначального количества. Общее время нахождения препарата в организме составляет также около 5.5–6.0 часов. Препарат не осаждается в печени и почках утилизируется в самом организме. Максимальная терапевтическая доза препарата «Аноцептин» для человека составляет 5 мг/кг в сутки. При приеме препарата больше 350 мг в сутки анальгетический эффект не повышается, начинает проявляться седативный. Разработаны документы, позволяющие провести клиническое исследование препарата. Пакет документов утвержден Получено разрешение Федеральной службы по надзору в сфере здравоохранения и социального развития на проведение 1 фазы клинического исследования безопасности и фармакокинетики препарата «Аноцептин» в клинике Института мозга человека РАН. Срок проведения исследования с 03.05.2007 по 01.08.2008. В исследовании примут участие 32 добровольца.

Поданы заявки на изобретение (РФ): N2006128504/15(030968) от 01.08.2006 Синтетическое анальгетическое средство и способ лечения. Авторы Б.В. Крылов, Е.В. Лопатина; N 2007135967 от 27.09.2007 Регенерирующее противовоспалительное средство и способы лечения с помощью этого средства. Авторы: Е.В. Лопатина, А.В. Карецкий, Б.В.Крылов; N 2007135968 от 27.09.2007 Анальгетическое средство и способ лечения болевого синдрома различной этиологии с помощью этого средства. Авторы Б.В. Крылов, Е.В. Лопатина.