Структура и взаимодействие наследственных и средовых факторов предрасположенности к развитию атопических болезней у детей

Вид материала

Автореферат

Содержание Научные консультанты Официальные оппоненты Ведущее учреждение Общая характеристика работы Цель работы Задачи исследования Cyp1a1, cyp2c9, cyp2c19, gstt1, gstm1, nat2 mthfr Научная новизна Cyp2d6, cyp2c9, mthfr Научно-практическая значимость. Внедрение результатов исследования Апробация диссертации. Структура и объём и диссертации Содержание работы Клинико-генеалогические, аллергологические и функциональные методы исследования. Молекулярно-генетические исследования GR (1220A>G) и β2-адренергического ADRB2 Mthfr (c667t) Результаты исследований и их обсуждение Рисунок 1. Аллергические реакции и болезни у родственников пробандов ... Полное содержание

Подобный материал:

• Опубликовано в журнале «Здоровье для всех» 2008, 181.65kb.
• План: Взаимодействие детского сада и семьи по вопросам речевого развития. Обогащение, 42.97kb.
• Программа дисциплины «Психогенетика» образовательная профессиональная программа подготовки, 145.73kb.
• Содержание Введение 3 Основная часть:, 341.45kb.
• Расписание лекций заведующей кафедры инфекционных болезней у детей фпк и пп спбгпма, 52.91kb.
• Индивидуализация скоростно-силовой подготовки волейболисток на основе генетической, 368.2kb.
• План лекций по биологической химии для студентов лечебного факультета, 66.35kb.
• Ов курса «Патологическая физиология» для самостоятельного изучения, 13.37kb.
• Мутационная изменчивость, 50.04kb.
• Применение нутрицевтиков при комплексном санаторном лечении бронхиальной астмы и атопического, 248.85kb.

На правах рукописи


ТЮМЕНЦЕВА Елена Станиславовна


СТРУКТУРА И ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ

НАСЛЕДСТВЕННЫХ И СРЕДОВЫХ ФАКТОРОВ

ПРЕДРАСПОЛОЖЕННОСТИ К РАЗВИТИЮ АТОПИЧЕСКИХ БОЛЕЗНЕЙ У ДЕТЕЙ


14.01.08 – Педиатрия

03.02.07 - Генетика


А В Т О Р Е Ф Е Р А Т

диссертации на соискание ученой степени

доктора медицинских наук


МОСКВА – 2011


Работа выполнена в Учреждении Российской академии медицинских наук

Научном центре здоровья детей РАМН.


Научные консультанты:


доктор медицинских наук,

профессор, член-корреспондент РАМН Балаболкин Иван Иванович

доктор медицинских наук, профессор Пинелис Всеволод Григорьевич


Официальные оппоненты:


доктор медицинских наук, профессор Зайцева Ольга Витальевна

доктор медицинских наук, профессор Кузьменко Лариса Григорьевна

доктор медицинских наук, профессор Козлова Светлана Ивановна


Ведущее учреждение: ГБОУ ВПО Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова Министерства здравоохранения и социального развития России

Защита диссертации состоится 20 декабря 2011 г. в _____ часов на заседании диссертационного совета Д 001.023.01 при Учреждении Российской академии медицинских наук Научном центре здоровья детей РАМН (119296, г. Москва, Ломоносовский проспект, д.2/62)


С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Учреждения Российской академии медицинских наук Научного центра здоровья детей РАМН (119296, г. Москва, Ломоносовский проспект, д.2/62)


Автореферат разослан «____» ______________ 2011 г.


Ученый секретарь

диссертационного совета,

кандидат медицинских наук А.Г. Тимофееева


3

Общая характеристика работы

Актуальность исследования. Атопические болезни относятся к самой многочисленной и разнообразной группе мультифакторных заболеваний и характеризуются наиболее высокими темпами роста заболеваемости, инвалидизации и сметрности в современных популяциях (Бочков Н.П., 2004).

Проведение лечебно-профилактических мероприятий подчас не в силах изменить назревающую ситуацию, а традиционные подходы к терапии ведут к колоссальным экономическим издержкам и порой скромным результатам.

Проблема низкой эффективности лечебно-профилактических мероприятий связана с недостаточным пониманием ключевых механизмов формирования атопических болезней и отсутствием их этиологической направленности (Ивашкин В.Т., Уланова И.Н., 2006, Убайдуллаев А.М, 2000; Федосеева Г.Б., 2001; Чучалин А.Г., 2001, Углева Е.М., 2007, Beandone, 2003).

Многочисленными зарубежными и отечественными исследователями было показано, что в основе развития атопических болезней лежат сложные взаимодействия генетических и средовых факторов (Балаболкин И.И., 1994, Jarvis D., Burney P., 1997, Schork N.J., 1997, Cooper RS., 2003, Баранов В.С., 2000, Полоников А.В., 2006).

С развитием молекулярно-генетических технологий открылись широкие перспективы для формализации генетической компоненты подверженности атопическим болезням.

Большой интерес представляет изучение различных вариантов генов, играющих ключевую роль в патогенезе атопических болезней и определяющих чувствительность к фармацевтическим препаратам патогенетической терапии, включающей глюкокортикостероиды, β₂-адреномиметики, ингибиторы лейкотриенов (Dallongeville J., Helbecque N. et al., 2003, Anderson W., Kalberg С., et al., 2000, Баранов В.С., 2009, Балаболкин И.И., Брянцева О.Н., 2008).

Однако, зачастую, в генетических исследованиях нивелируются или игнорируются эффекты окружающей среды, которые имеют первостепенное значение именно для данного класса заболеваний. Доказательством важности средовой компоненты является быстрый рост в последние годы частоты многих атопических болезней, который невозможно объяснить изменением генетической составляющей за такой короткий промежуток времени (Jarvis D., Burny P., 1997; Beasley R., 1998, Худолей В.В., 1999; Райc Р.Х., Гуляева Л.Ф., 2003; Иванов В.П. и др., 2003, 2005).


4

Гены ферментов биотрансформации ксенобиотиков определяют взаимодействие организма с окружающей средой и могут способствовать развитию аллергических болезней, усугублять течение аллергического воспаления и индуцировать развитие тяжелых обострений (Саприн А.Н., 1991; Барышников И.И. и др., 1991; Nebert D.W., 1996, 1997; Кулинский В.И., 1999; Баранов B.C. и др., 2000, Полоников А.В., 2006).

Диапазон проявления генотипа в фенотипе атопических болезней может быть очень широким, что обусловлено не только выраженным разнообразием клинических проявлений и сложностью межгенных взаимодействий, но и эволюционно сложившимися взаимодействиями организма с окружающей средой, уникальными для каждой человеческой популяции. (Пузырев В.П., Степанов В.А., 1997; Templeton A.R., 2000, Lander E.S., Schork N.J., 1994; Johnson G.C.L., Todd JA., 2000, Cambien F. et al., 1999, Terwilliger J., Ott J., 1994; Altshuler D. et al., 1998; Martinez С. et al., 1998; Cardon L.R., Bell J.I., 2001, Спицын В.А., 1985, 2006; Соловенчук Л.Л., 1992, Ляхович и др., 2006).

Все вышеизложенное определило актуальность данной работы, цель и задачи исследования.

Цель работы: осуществить комплексный анализ наследственных и средовых факторов предрасполагающих к развитию атопических болезней у детей и разработать пути оптимизации терапии с учетом дифференцированного подхода и индивидуальных особенностей пациентов с различными клинико-патогенетическими вариантами течения атопических болезней.


Задачи исследования:

1. Изучить особенности развития и течения атопических болезней у детей с различной выраженностью атопии и наследственной отягощенности аллергическими реакциями и болезнями, использую результаты клинико-генеалогического, аллергологического, функционального и молекулярно-генетического обследования.
   
2. Исследовать особенности течения атопических болезней и провести анализ ассоциаций полиморфизмов генов, играющих ключевую роль в патогенезе атопических болезней и определяющих чувствительность к фармацевтическим препаратам патогенетической терапии (ADRB2, GR, ALOX5, TNFA), и генов, регулирующих взаимодействие организма с окружающей средой ( CYP1A1, CYP2C9, CYP2C19, GSTT1, GSTM1, NAT2 MTHFR), с развитием атопических болезней у детей.
   

5

3. Изучить влияние факторов внешней среды и роль полиморфизмов генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков, β₂-адренергического и глюкокортикостероидного рецепторов, фактора некроза опухолей α и липоксигеназы-5 на развитие сенсибилизации организма, течение атопических болезней и эффективность противоаллергической терапии.
   
4. Исследовать структуру и взаимодействие наследственных и средовых факторов предрасполагающих к развитию атопической бронхиальной астмы и обуславливающих клинико-патогенетические варианты течения болезни, сопровождающиеся развитием резистентности к бронхоспазмолитической терапии β2-адреномиметиками короткого действия и противовоспалительной терапии ингаляционными глюкокортикостероидными.
   
5. Разработать на основе данных клинико-генетического, функционального, аллергологического и молекулярно-генетического исследования схему-алгоритм возможного пути оптимизации терапии атопических болезней с учетом особенностей развития и течения атопических болезней у детей.
   

Научная новизна.

Впервые проведена комплексная оценка роли наследственных и средовых факторов в развитии атопических болезней у детей, включая бронхиальную астму, атопический дерматит, персистирующий и/или сезонный аллергический ринит и различных клинико-патогенетических вариантов сочетанного аллергического поражения различных органов и систем у детей.

Впервые в диссертационной работе определены частоты полиморфных вариантов генов CYP1A1, CYP2D6, GSTT1, GSTM1, MTHFR, CYP2C9, CYP2C19, NAT2, GR, ADRB2, ALOX5, TNFA, у детей русской этнической принадлежности, проживающих в центральных регионах европейской части РФ, с различными сочетанными проявлениями бронхиальной астмы, персистирующего и/или сезонного аллергического ринита (поллиноз), атопического дерматита и их здоровых сверстников.

Выявлены полиморфные варианты генов, ассоциированные с развитием атопических болезней у детей и генотипы, ассоциированные с развитием отдельных клинико-патогенетических вариантов атопических болезней.

Выявлены взаимодействия генетических и средовых факторов, обуславливающие особенности развития и течения атопических болезней, сопровождающиеся тяжелыми обострениями, требующими назначения системных глюкокортикостероидов.

6

В результате проведения комплексного анализа данных клинико-генеалогического, аллергологического, функционального и молекулярно-генетического обследования, выявлены факторы риска развития атопических болезней и их отдельных клинико-патогенетических вариантов, обуславливающие клинико-функциональные особенностей течения и тяжести обострений аллергических болезней, потребность и эффективность патогенетической терапии.

Определены роли и особенности взаимодействия генетических и средовых факторов, в развитие бронхиальной астмы и клинико-патогенетические варианты болезни, характеризующиеся необходимостью назначения высоких суточных доз ингаляционных глюкокортикостероидов (ГКС) для достижения контролируемого течения болезни, развитием резистентности к терапии ингаляционными ГКС, ассоциированные с полиморфными вариантами генов кортикостероидного (GR) и β₂-адренергического рецептора (ADRB₂), фактора некроза опухолей А (TNFA) и генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков ( CYP2D6, CYP2C9, MTHFR).

Показано значение молекулярно-генетических методов исследования, включая фармакогенетические исследования на основе технологии биочипов, с одновременным анализом полиморфизма множества генов, для выявления групп риска развития атопических болезней и оптимизации проводимой фармакотерапии, направленной на осуществление контроля аллергических болезней у детей.

Научно-практическая значимость.

Результаты работы вносят вклад в понимание ключевых механизмов формирования атопических болезней, дополняют представление о роли генетических и средовых факторов и их взаимодействии в развитии атопических болезней у детей и клинико-патогенетических вариантов течения сочетанного аллергического поражения различных органов и систем.

Показано, что использование молекулярно-генетических методов исследования, включая фармакогенетические исследования на основе технологии биочипов, с одновременным анализом полиморфизма множества генов, способствует выявлению групп риска развития атопических болезней и оптимизации проводимой фармакотерапии, направленной на осуществление контроля аллергических болезней у детей.

Разработанная схема-алгоритм для оценки факторов риска развития атопических болезней, особенностей течения и тяжести обострений, потребности и эффективности патогенетической терапии с использованием данных клинико-генеалогического,

7

аллергологического, функционального и молекулярно-генетического обследования пациентов, дает возможность прогнозирования течения болезни, развития тяжелых обострений у конкретного пациента и оптимизации проводимой фармакотерапии, направленной на осуществление контроля аллергических болезней у детей.

Данные диссертационной работы могут послужить основой для последующих исследований по разработке дифференцированного подхода к лечебным и профилактическим мероприятиям атопических болезней у детей.

Результаты исследования могут быть использованы при чтении спецкурсов в медицинских ВУЗах, на курсах повышения квалификации врачей-педиатров, аллергологов и клинических иммунологов.

Внедрение результатов исследования.

Основные положения и материалы диссертации, результаты молекулярно-генетической диагностики, включая фармакогенетические исследования на основе технологии биочипов, с одновременным анализом полиморфизма множества генов, и разработанная схема-алгоритм оценки факторов риска развития, тяжести течения и обострения атопических болезней, потребности и эффективности патогенетической противоаллергической терапии, с учетом дифференцированного подхода и индивидуальных особенностей пациентов, для выявлению групп риска развития атопических болезней и оптимизации проводимой фармакотерапии, направленной на осу-

ществление контроля аллергических болезней у детей, нашли практической применение и внедрены в комплексный алгоритм обследования и лечения больных атопическими болезнями и используются в практической работе отделения пульмонологии и аллергологии НЦЗД РАМН и поликлинической работе врачей пульмонологов и аллергологов НЦЗД РАМН.

Полученные результаты молекулярно-генетической диагностики и анализа распределения полиморфных вариантов изученных генов у детей, страдающих атопическими болезнями и их практически здоровых сверстников, проживающих на территории европейской части РФ используются в практической работе в лабораториях МГНЦ и при чтении лекций на кафедре медицинской генетики РМАПО Росздрава.

Материалы диссертации по вопросам влияние наследственных и средовых факторов предрасположенности к развитию атопических болезней изложены в методических рекомендациях «Комплексное лечение детей с дермореспираторным син


8

дромом» (2006), и пособиях для врачей «Терапия бронхиальной астмы у детей» (2005), «Пищевая аллергия у детей» (2006), «Атопический дерматит у детей» (2008), руководстве для врачей «Детская аллергология: «Аллергологическая диагностика», «Бронхиальная астма у детей», «Лекарственная аллергия»» (2006).


Апробация диссертации.

Материалы диссертации доложены на Научно-практической конференции педиатров России «Фармакотерапия и диетология в педиатрии», Москва, 2006 г., 4-й Европейском конгрессе педиатров, Москва, 2009 г., III Всероссийском конгрессе по детской аллергологии и клинической иммунологии, Москва, 2009 г., VIII Конгрессе «Современные технологии в педиатрии и детской хирургии» / Симпозиум «Аллергические заболевания легких у детей», Москва, 2009 г., IX Конгрессе «Инновационные технологии в педиатрии и детской хирургии» /VI Конгрессе по детской аллергологии и клинической иммунологии, Москва, 2010 г., XVII Российском национальный конгресс «Человек и лекарство», Москва, 2010 г., XV Конгрессе педиатров России, Москва, 2011г., IV Всероссийском конгрессе по детской аллергологии и иммунологии «Аллергология и иммунология в педиатрии. Диагностика и фармакотерапия, аллергологическая диетологии и профилактика, мониторинг и реабилитация: от атопического дерматита до бронхиальной астмы» (2011).


Публикации

По материалам диссертации опубликовано 35 печатных работ, из них 14 в журналах, рекомендованных ВАК.

Структура и объём и диссертации. Диссертационная работа изложена на 324 страницах, иллюстрирована 72 таблицами, 45 рисунками, состоит из введения, обзора литературы, общей характеристики материалов и методов исследования, 6 глав собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических предложений, библиографии, включающей 54 отечественных и 217 зарубежных источников.


9

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Работа выполнена в Учреждении Российской академии медицинских наук Научном центре здоровья детей РАМН (директор, академик РАМН, А.А. Баранов).

Материалом исследования послужили данные, полученные с 2004 по 2010 г.г., в результате наблюдения 424 детей в возрасте от 3 до 18 лет, проживающих на территории европейской части РФ, согласно проведенным опросам, русских по национальности.

336 больных атопическими болезнями проходили обследование и получали лечение в отделениях аллергологии (зав. отд. чл.-корр. РАМН, д.м.н., проф. И.И. Балаболкин) и пульмонологии и аллергологии (зав. отд. д.м.н. О.И. Симонова) НИИ педиатрии НЦЗД РАМН.

Клинико-генеалогические, аллергологические и функциональные методы исследования.

Клинико-генеалогическое обследование включало осмотр и оценку физического развития детей, сбор анамнеза жизни, сведений об условиях проживания и аллергенном окружении в среде проживания пациента.

Были проанализированы экологические особенности и выраженность аллергенного окружения в среде проживания пациентов, включая наличие химических и промышленных предприятий, крупных транспортных магистралей, лесных массивов и водоемов, а также микроэкология жилья и условия проживания ребенка – городская/сельская местность, квартира/частный дом, отдельная/общая площадь, наличие очагов сырости и плесневых вегетаций, наличие и особенности хранения книг, мягких игрушек, ветхость мягкой мебели и материалы–наполнители постельных принадлежностей, содержание домашних животных, птиц, рыб, наличие растений и насекомых, частота санитарно-гигиенических мероприятий по уборке жилья, наличие членов семьи, курящих табачные изделия.

Клинический анализ крови и общий анализ мочи проводили в клинико-гематологической лаборатории (зав. лаб. д.м.н. Е.Л. Семикина).

Аллергологическое обследование включало сбор данных аллергологического анамнеза, определение иммуноглобулинов классов A M, G, общего и специфических IgE в сыворотке крови, постановка кожных скарификационных проб.


10


Сбор данных аллергологического анамнеза проводился по схеме, разработанной в аллергологическом отделение НЦЗД РАМН. Фиксировались:

-наследственная отягощенность аллергическими реакциями и болезнями, «накопление» аллергических заболеваний в роду;

-возраст дебюта кожных, респираторных и других проявлений атопической патологии у пациента;

-особенности течения (контролируемое, частично контролируемое и неконтролируемое) и тяжесть обострений аллергических реакций и болезней;

-наличие сочетанных проявлений аллергического поражения различных органов и систем;

-причины-триггеры (специфические и неспецифические) обострений аллергических болезней;

-частота обострений аллергических болезней на фоне проводимой противоаллергичекой терапии;

-потребность и терапевтическая эффективность патогенетической терапии атопических болезней;

-общая и курсовая продолжительность лечения ингаляционными глюкокортикостероидами (ИГКС), суточные дозы лекарств;

- необходимость в назначении и частота применения системных глюкокортикостероидов и бронхоспазмолитиках для купирования обострения аллергических болезней и достижения контролируемого течения заболевания.

В лаборатории клинической иммунологии, иммуногенетики и вирусологии (зав. лаб. д.м.н. А.Н. Маянский) определяли уровень иммуноглобулинов классов A M, G в сыворотке крови и уровень общего IgE и аллергенспецифических IgE в сыворотке крови определяли методом количественного иммуноферментного анализа (ИФА). Концентрация IgE в пределах 150 МЕ/мл считалась нормальной.


Постановка кожных проб проводилось скарификационным методом с использованием стандартного набора неинфекционных аллергенов: бытовых, эпидермальных, пищевых, производства НИИ Вакцин и сывороток им. И.М. Мечникова, пыльцевых - производства Ставропольского Института вакцин и сывороток. Оценка результатов кожного тестирования проводилась по схеме, используемой в аллергологическом отделении НИИ педиатрии ГУ НЦЗД РАМН.

11

Функциональное обследование проводилось в отделении функциональной диагностики и терапии (зав. отд. д.м.н., проф. О.Ф. Лукина) НИИ педиатрии НЦЗД РАМН и включало исследование функция внешнего дыхания (ФВД) и функциональные и/или нагрузочные тесты для определения степени гиперреактивности бронхов и контроля эффективности бронхоспазмолитической терапии, методом компьютерной флоуметрии на аппарате «Спиро-тест PC» (Россия). Оценка результатов проводилась согласно границам норм и градаций патологических отклонений показателей кривой «поток-объем», разработанными в отделении функциональной диагностики НИИ педиатрии НЦЗД РАМН: форсированная жизненная емкость легких (ФЖЕЛ), объем форсированного выдоха за первую секунду ФЖЕЛ (ОФВ1), максимальные объемные скорости потока кривой в точках, соответствующих объему легких 75%, 50%, 25% ФЖЕЛ (МОС75, MOC50, МОС25 соответственно). Полученные результаты выражали в процентах от должных величин.

По показаниям проводилось ультразвуковое исследование органов брюшной полости в отделении ультразвуковой диагностики (зав.отд. д.м.н., проф. И.В. Дворяковский), биохимический анализ крови выполняли в лаборатории клинической биохимии (зав. лаб. д.м.н., проф. М.И. Баканов).

Молекулярно-генетические исследования выполнены в лаборатории мембранологии с группой генетических исследований НЦЗД РАМН (заведующий отделением д.м.н., профессор Пинелис В.С.).

Материалом исследования являлась ДНК, выделенная из лейкоцитов периферической крови, стандартным методом фенольно-хлороформной экстракции (Mathew C.C., 1984). Для выделения геномной ДНК использовали набор реактивов «Wizard Genomic DNA Purification Kit» фирмы «Promega» (США) в соответствии с протоколом производителя. Хранение выделенной ДНК осуществляли при – 20°С.

Исследование однонуклеотидных замен и делеций в восьми генах ферментов биотрансформации ксенобиотиков: CYP1A1 (4887С>А, 4889A>G, 6235T>C), CYP2D6 (1934G>A), GSTT1 (делеция), GSTM1 (делеция), MTHFR (677C>T), CYP2C9 (430С>T, 1075A>C), CYP2C19 (681G>A) и NAT2 (481С>Т, 590G>A, 857G>A) проводили при помощи биочипа, разработанного в лаборатории биологических микрочипов ИМБ им. В.А. Энгельгардта РАН.

Флуоресцентный сигнал от ячеек микрочипа регистрировали с помощью портативного анализатора биочипов, снабженного камерой ПЗС и программным обеспе


12

чением ImageWare (Биочип-ИМБ, Россия).

Изучение полиморфизмов генов кортикостероидного GR (1220A>G) и β2-адренергического ADRB2 (79C>G, 46A>G) рецепторов, фактора некроза опухолей α TNFA (308G>A), проводили методом мультиплексной ПЦР, исследование полиморфизма гена липоксигеназы-5 ALOX5 (VNTR) проводили методом ПЦР с последующим разделением амплифицированных фрагментов ДНК гель-электорофорезом. Для генотипирования использовали праймеры, разработанных и предоставленных лабораторией пренатальной диагностики НИИ Акушерства и Гинекологии им. Д.О. Отта Северо-Западного отделения РАМН, Санкт-Петербург.

Амплификацию всех исследуемых фрагментов ДНК проводили методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) на программируемом термоциклере PTC-200 DNA Engine Cycler производства фирмы Bio-Rad Laboratories, США.

Таблица 1

Объем проведенных генетических исследований

Полиморфные варианты генов/ количество обследованных детей в группах (%)	Основная группа детей 237 (100%)	Контрольная группа детей 88 (100%)
CYP1A1 (4887C>A, (4889A>G, 6235T>C)	227 (95,78%)	84 (95,45%)
CYP2C19 (G681A)	231 (97,47%)	82 (93,18%)
CYP2C9 (A1075C, C430T)	232 (97,89%)	84 (95,45%)
CYP2D6 (G1934A)	231 (97,47%)	84 (95,45%)
GSTM1 (делеция)	232 (97,89%)	84 (95,45%)
GSTT1 (делеция)	234 (98,73%)	84 (95,45%)
NAT2 (481C>T, 590G>A, 857G>A)	230 (97,05%)	84 (95,45%)
GRL (1220A>G)	222 (93,67%)	78 (88,64%)
ADRB2 (46A>G, 79C>G)	222 (93,67%)	78 (88,64%)
ALOX5 (VNTR)	227 (95,78%)	77 (87,5%)
TNFA (308G>A)	217 (91,56%)	77 (87,5%)
MTHFR (C667T)	232 (97,89%)	84 (95,45%)

Статистическая обработка данных

Для оценки соответствия распределения генотипов ДНК-маркеров ожидаемым значениям при равновесии Харди-Вайнберга (РХВ) и для сравнения распределений частот аллелей и генотипов в выборках больных и здоровых использовали критерий χ2 Пирсона.

13

Для таблиц сопряженности 2×2 применяли критерий χ2 с поправкой Йетса на непрерывность, если частота хотя бы в одной ячейке таблицы была меньше или равна 5.

Об ассоциации генотипов с предрасположенностью к заболеванию судили по величине отношения шансов (OR – odds ratio) – показателю, отражающему, во сколько раз вероятность оказаться в группе «случай» (больные) отличается от вероятности оказаться в группе «контроль» (здоровые) для носителя изучаемого генотипа (аллеля). Значение OR=1 свидетельствует об отсутствие ассоциации (связи) данного генотипа с риском развития заболевания, значение OR>1 рассматривали как положительную ассоциацию заболевания с признаком (фактор повышенного риска), OR<1 – как отрицательную ассоциацию (фактор пониженного риска).

Если нижняя граница доверительного интервала для значения OR превышает 1, то OR>1 рассматривают как показатель повышенного риска развития болезни, связанного с ДНК-маркером или иным признаком («фактор риска»); OR<1 (верхняя граница доверительного интервала менее 1 свидетельствует об отрицательной ассоциации ДНК-маркера или иного признака с развитием болезни («фактор устойчивости»).

Для расчетов использовали программу Statistica 6.0., Excell 7.0, «Калькулятор для расчета статистики в исследованиях "случай-контроль"» (ссылка скрыта).

Статистически значимыми считали различия при p<0,05.