Geum.ru

Опубликовано в Сборнике аннотированных докладов III всероссийской научно-практической конференции «Инфекционные аспекты соматической патологии у детей», Москва, 2010

Вид материалаДоклад

Содержание


Цель исследования
Материалы и методы исследования
Подобный материал:
Опубликовано в Сборнике аннотированных докладов III Всероссийской научно-практической конференции «Инфекционные аспекты соматической патологии у детей», - Москва, 2010.


Роль наследственности и инфекционного фактора в развитии хронических аллергических заболеваний у детей

Беляева Л.М., Чакова Н.Н., Микульчик Н.В, Панулина Н.И., Буза Д.В., Крупнова Э.В., Михаленко Е.П., Кругленко С.С.

ГУО «Белорусская медицинская академия последипломного образования»,

УЗ «4-я городская детская клиническая больница», г.Минск

ГНУ «Институт генетики и цитологии НАН Беларуси»


В последнее десятилетие во многих странах мира отмечается четкая тенденция к росту заболеваемости аллергическими болезнями. Рост аллергической патологии, в первую очередь, связан с наследственной отягощенностью по аллергическим болезням и экологическим неблагополучием среды обитания человека [1,2,6].

Известно более 5 миллионов химических веществ (атмосферные поллютанты, пестициды, фармацевтические препараты, косметика, пищевые добавки и др.), воздействию которых постоянно подвергается человек. Для большинства установлена их этиологическая связь с мультифакторными заболеваниями (МФЗ), к которым относятся и хронические аллергические болезни - бронхиальная астма (БА), атопический дерматит (АтД), аллергический ринит (АР) [1,2,5]. Все большую актуальность в связи с этим приобретает идентификация в различных популяциях специфичных генов и средовых факторов, взаимодействие которых формирует норму реакции устойчивости человека и его адаптацию к изменяющейся среде обитания [4,5]. Хронические аллергические заболевания (АЗ) – это болезни, при которых имеет место дисбаланс Th1/Th2 клеток, нарушение неспецифического иммунитета, барьерных свойств кожи и слизистых, что формирует хроническое воспаление, усугубляемое различными инфекционными факторами (вирусами, бактериями и грибами и др.). Взаимодействие между организмом больного и микроорганизмами (бактериями, грибами и др.) при хронических АЗ может определяться склонностью к колонизации и сенсбилизацией к этим микроорганизмам (эффекты мимикрии), в результате чего формируются и другие иммунопатологические механизмы хронического воспаления (иммунокомплексного, аутоиммунного) [1,2,3,5].

Другим важным фактором, влияющим на течение воспалительных процессов целом и хронических аллергических болезней, являются ферменты биотрансформации ксенобиотиков (ФБК), в частности глутатион-S-трансферазы (GSTТ1 и GSTM1) [9], осуществляющих метаболизм множества экзогенных (в том числе лекарственных средств), и медиаторов воспаления. В настоящее время известны функционально-значимые полиморфные варианты генов GSTT1, GSTM1, представленные обширной делецией, наличие которой ведет к отсутствию синтеза соответствующих ферментов и повышает чувствительность организма к неблагоприятным факторам зкзогенной и эндогенной природы.

Цель исследования: изучить различные факторы, влияющие на клинические особенности течения атопических болезней (различные сочетания: БА, АтД, АР) у детей Республики Беларусь.

Материалы и методы исследования: Клинические исследования проводились на базе Республиканского детского аллергологического центра (УЗ «4-я детская городская клиническая больница г.Минска»). Обследовано 137 детей в возрасте от 6 до 17 лет (средний возраст детей - 10,8  0,21 лет), страдающих сочетанными формами атопических заболеваний (дерматит, ринит, астма). Среди пациентов – 41 девочка (средний возраст – 10,6 + 0,32 года) и 96 мальчиков (средний возраст – 11,1  0,24 года).

Обследованные дети были разделены на две группы: 1-ю группу составили пациенты с изолированной бронхиальной астмой – 44 пациента (37 – мальчиков, 7 – девочек, средний возраст – 10,3 + 0,22 года); во 2-ю группу вошли – 93 пациента (59 – мальчиков, 34 – девочки, средний возраст – 11,06 + 0,43 года) с различными сочетаниями АЗ: с «атопической триадой» (астма+дерматит+ринит) – 23 пациента (14 - мальчиков, 9 – девочек); сочетание дерматита и/или ринита и/или дерматита – 70 пациентов (45 -мальчиков, 25 - девочек).

Всем детям проведено общеклиническое и аллергологическое обследование, включающее кожные скарификационные пробы с бытовыми, пищевыми, пыльцевыми и эпидермальными аллергенами. Изучен генеалогический анамнез, анамнез жизни, анамнез болезни. В рамках лабораторно-диагностического раздела иммунологическими методами проведено количественное определение общего и аллергенспецифических IgE в сыворотке крови.

Молекулярно-генетические исследования проводились на базе ГНУ «Института генетики и цитологии НАН Беларуси». Выделение тотальной ДНК из лейкоцитов периферической крови выполняли методом Mathew [7]. Типирование образцов по генам GSTM1 и GSTT1 проводили путем мультиплексной полимеразной цепной реакции (ПЦР) с использованием трех пар праймеров. Продукты амплификации фракционировали в 1,8% агарозном геле и визуализировали в УФ-свете (рис. 1).




M 1 2 3 4 5 6

Рисунок 1 –Фрагмент результатов мультиплексной ПЦР-амплификации генов GSTT1 и GSTM1: 1 – GSTТ1(+),GSTМ1(+), 2,3,4,5 – GSTТ1(+),GSTМ1(-),

6 – GSTТ1(-),GSTМ1(+)


Гомозиготы по делеции генов GSTM1 и GSTT1 выявляли на электрофореграммах по отсутствию фрагментов амплификации размером 215 п.н. и 480 п.н. соответственно. В качестве внутреннего контроля использовали амплификацию фрагмента гена альбумина.

Статистическая обработка материала проводилась с использованием пакета прикладных программ Statsoft Statistica 6.0, «Primer of Biostatistics» (Version 4.03 by Stanton A. Glantz). При сравнении частот генотипов использовался стандартный критерий 2 Пирсона.

Результаты. В результате проведенного исследования установлено, что 68% пациентов имели сочетанные формы хронических АЗ (астма+дерматит+ринит – 25%, астма+ринит – 62%, астма+дерматит – 13%), а изолированная бронхиальная астма встречалась у 31%.

Получены доказательства участия генов иммунного ответа в продукции специфических IgE-антител, генетической детерминированности противовоспалительных цитокинов, гиперреактивности бронхов и кожи [2,5,6]. В результате проведенного нами исследования установлено, что 56% пациентов имели наследственную отягощенность по атопическим заболеваниям, среди них у 57% - наследственность отягощена по линии матери, у 43 % - по линии отца. В группе пациентов с изолированной бронхиальной астмой у 34 % отмечалась наследственная отягощенность по атопическим болезням (по линии матери -53%, по линии отца - 47%). При наличии сочетанных форм атопических болезней (БА, АтД, АР) у 42% выявлена отягощенная наследственность, по линии матери – у 62%, по линии отца – 38%.

Установлено, что интеркуррентные заболевания оказывают значительное влияние на течение хронических аллергических заболеваний [1,5]. В результате проведенного исследования установлено, что присоединение острых вирусных инфекций у пациентов с сочетанными формами аллергии сопровождалось одновременным (в 48% случаев) или изолированным обострением бронхиальной астмы (в 26% случаев) или АтД (у 18%). Среди бактериальных агентов в развитии и поддержании аллергических заболеваний важную роль играл Staphyloccocus aureus. Он не является составной частью нормальной микрофлоры кожи.

По нашим данным, при исследовании флоры зева, носа и кожи у значительной части обследованных детей (73%) была выявлена персистирующая инфекция: Staphyloccocus aureus (42%), Staphyloccocus epidermidis (10%), грибы рода Candida (7%), при этом у 12% пациентов с изолированным АтД и у 23% - с сочетанными формами АЗ выявлялось по два возбудителя и более одновременно. У пациентов с тяжелыми формами БА и АтД, особенно длительно получающими местную терапию глюкокортикостероидами, частота выявления грибов рода Candida составила 27%.

Среди факторов, поддерживающих хроническое течение АЗ, следует отметить сопутствующую хроническую инфекционную патологию со стороны внутренних органов и систем. Среди обследованных пациентов у 34,5% выявлено наличие сопутствующей хронической патологии верхних дыхательных путей (ВДП) (тонзиллит, аденоиды, синусит) и у 8% хронические неспецифические заболевания легких. Следует отметить, что значительно чаще хронические заболевания ВДП выявлялись у пациентов из группы с «атопической триадой»: сочетанием астмы, дерматита и ринита (2 =7,25; Р0,05).

В развитии аллергических заболеваний определяющее значение имеют изменения в функционировании иммунной системы [2,3,6]. Возникновение атопических болезней связано с IgE-опосредуемыми аллергическими реакциями. При аллергологическом обследовании детей, страдающих АтД, аллергическим ринитом, атопической бронхиальной астмой характерно увеличение уровня общего IgE и специфических IgE-антител к различным группам экзогенных аллергенов [2,4,6]. По результатам исследований иммунологических показателей установлено, что для детей, страдающих сочетанными формами атопических заболеваний, характерны наиболее высокие уровни общего IgE в сыворотке крови. В группе пациентов с изолированной бронхиальной астмой наиболее высокие концентрации IgE (519,6+23,8) отмечались при наличии у этих пациентов сопутствующей хронической патологии ВДП (тонзиллит, аденоидит, синусит) (рисунок 2).


Рисунок 2. – Средние концентрации общего IgE в сыворотке крови у пациентов с хроническими аллергическими заболеваниями


Анализ зависимости уровня общего IgE от комбинации генотипов GSTT1 и GSTM1 у пациентов выявил следующую закономерность: носители комбинации GSTT1(+)/GSTM1(+) имели наиболее высокое значение этого показателя, у обладателей хотя бы одного мутантного гена (комбинации генотипов GSTT1(-)/GSTM1(+) или GSTT1(+)/GSTM1(-)) уровень общего IgE был снижен, а у пациентов с наличием мутации в обоих генах (комбинация генотипов GSTT1(-)/GSTM1(-)) наблюдался самый низкий уровень общего IgE (рисунок 3). Причем это снижение было статистически достоверным по сравнению с показателями у пациентов других групп (t=2,1; р<0,05).




Рисунок 3. – Средние концентрации общего IgE в сыворотке крови у пациентов с хроническими аллергическими заболеваниями с различными комбинациями генотипов GSTM1/GSTТ1


Полученные результаты свидетельствуют о целесообразности дальнейшего изучения полиморфизма генов, вовлеченных в патогенез АЗ, с целью повышения эффективности терапии и для выявления генетических маркеров прогноза течения заболевания.


Выводы:
  1. Более чем у половины пациентов с хроническими аллергическими заболеваниями выявлена наследственная отягощенность по аллергическим заболеваниям. У детей с сочетанными формами АЗ достоверно чаще отмечалась наследственная отягощенность по линии матери.
  2. Получены данные, свидетельствующие о том, что у детей с хроническими аллергическими заболеваниями (особенно с «атопической триадой»: БА+АР+АтД) наличие хронических очагов инфекции и частое присоединение острых вирусных инфекций выполняет роль факторов, способствующих затяжному и более тяжелому течению этих заболеваний. Этот факт следует учитывать при проведении своевременной адекватной профилактики и терапии пациентам с хроническими аллергическими заболеваниями.
  3. Уровень общего IgE в группах детей с комбинацией генотипов GSTT1(-)GSTM1(-) оказался достоверно ниже по сравнению с другими группами. Можно предположить опосредованное влияние генетического полиморфизма глутатион-S-трансферазы на уровень общего IgE в сыворотке крови у этой категории пациентов.


Литература:
  1. Балаболкин, И.И. Аллергия у детей и экология / И.И.Балаболкин // Рос. педиатр. журн. – 2002. – № 5. – С. 4 – 8.
  2. Беляева Л.М. Атопический дерматит и аллергический ринит у детей и подростков – Минск: ООО «В.И.З.А.ГРУПП», 2006. – 194с.
  3. Беляева Л.М. Дифференциально-диагностический комплекс клинических, иммунологических и гормональных признаков у детей школьного возраста, страдающих атопическим дерматитом / Л.М. Беляева, Н.В. Микульчик // Мед. панорама. – 2006. – №1. – С. 16–20.
  4. Караулов А.В. , Сидоренко И.В., Захаржевская Т.В. Является ли атопический дерматит фактором риска развития респираторных проявлений аллергии? // Иммунология, аллергология, инфектология. – 2003. – №3. – С.37 –40.
  5. Сафронова О. Г., Вавилин В. А., Ляпунова А. А. Взаимосвязь между полиморфизмом гена GSTP1 и бронхиальной астмой и атопическим дерматитом // Бюл. Эксп. Биол. Мед. – 2003. – Т. 136. - № 1. – С. 73-75.
  6. Edwards A. Mechanism of allergic disease / The Year in Allergy 2003 / eds. S.Holgate, S.Arshad. – Oxford, 2003. – P. 83 – 100.
  7. Mathew, C.C. The isolation of high molecular weight eucaryotic DNA / C.C. Mathew // in Walker JMNJ (ed): Methods in Molecular Biology, Clifton: Human Press, 1984. – Vol. 2. – P.31 – 34.
  8. Spergel J., Paller A. Atopic dermatitis and the atopic march//J. Allergy. Clin. Immunol. 2003; 112: 128–139.
  9. Tamer L., Calikoglu M., Ates N. A. et al. Glutathione S-transferase gene polymorphisms (GSTT1, GSTM1, GSTP1) as increased risk factors for asthma // Respirology. – 2004. – V. 9. - № 4. – P. 493-498.