Geum.ru

Міністерство охорони здоров’я україни український центр наукової медичної інформації І патентно-ліцензійної роботи

Вид материалаДокументы

Содержание


Реєстр. № 301/31/09
Подобный материал:
1   ...   71   72   73   74   75   76   77   78   ...   99

Реєстр. № 301/31/09




  1. Спосіб підготовки біоінженерних трансплантатів на основі аутологічних мезенхімальних стовбурових клітин, нанесених на коралову матрицю.
  2. Метою є розробка методики та техніки отримання васкуляризованого біоінженерного трансплантата з використанням аутологічних мезенхімальних стовбурових клітин і корала в якості матриці носія.
  3. Запропонований спосіб ґрунтується на отриманні зависі аутологічних клітин крові у хворих шляхом забору крові з кубітальной вени системою Vacutainer з гепарином в об'ємі 4-5 мл. Можливо стимульований вихід клітин-попередників гемопоезу в периферійну кров шляхом введення гранулоцитарно-макрофагального колонійстимулюючого фактора – філграстима. Філграстим вводиться підшкірно 1 раз на добу по 1,0 Мо (10г)/кг протягом 3-6 днів поспіль. Рекомендується проводити три лейкаферези поспіль на 5-й, 6-й и 7-й дні.Кров відстоюють при кімнатній температурі для осідання еритроцитів. Одержану плазму відбирають в стерильну пробірку і центрифугують при 1500 об/хв для отримання осаду лейкоцитів. Осад лейкоцитів одноразово відмивають стерильним 0,9% розчином хлориду натрію і доводять концентрацію клітин живильним ростовим середовищем до 106 клітин/мл. Ростове середовище містить середовище Ігла (SIGMA), гентаміцин 100 мкг/мл, L-глутамін 30 мг, 5 % аутологічну сироватку. В ростове середовище з лейкоцитами вносили корал, форма якого відображала форму відповідного дефекту. Попередньо коралову матрицю очищають від органічної частини в гіпохлориді натрію упродовж 15 діб, відмивають в дистильованій воді та стерилізують в автоклаві. Отриманий біотрансплантат з аутологічними лейкоцитами культивувують в термостаті при 37˚С з 5 % СО2. На 4 день культивування лейкоцитів на коралі перевіряється поживне ростове середовище на предмет можливого бактеріального забруднення на тіогліколевому середовищі, середовищі Сабуро та на поживному агарі.Через 9-14 днів біотрансплантат з прикріпленими лейкоцитами відмивається від поживного середовища та використовується для трансплантації органа або тканини з частковим або повним відновленням функції. Нами було проведено дослідження на собаці, у якої був видалений двокореневий зуб нижньої щелепи. В асептичних умовах заповнили дефект підготовленим біотрансплантатом на основі корала (який мав форму дефекту нижньої щелепи собаки) з аутологічними мезенхімальними клітинами. Через 6 місяців тканинно-коралова конструкція була гістологічно досліджена.Результати продемонстрували утворення нової кісткової тканини, більшість коралових гранул були абсорбовані (заміщені). Було підтверджено наявність великої кількості нової кісткової тканини, визначалась виражена судинна сітка всередині конструкції. Не було виявлено ознак некрозу новоутвореної тканини чи запалення. Таким чином, використання біотрансплантата на основі аутологічних мезенхімальних стовбурових клітин та корала в якості матриці носія дозволяє створити de novo орган чи ліквідувати його пошкодження. Запропонований спосіб простий у виконанні, доступний, дешевий для хворого. Структура коралу складається із пор, які сполучаються між собою і близька до кісткової структури. Трансплантація мезенхімальних стовбурових клітин на біоматриксі сприяє швидкому остеогенезу в ектопічному місці, а клінічне застосування можливе після дослідження морфогенезу імплантованого біотрансплантата в експерименті.
    1. Вакутайнер з нанесеним гепарином; Мікроскоп бінокулярний Биолам;Термостат ТС-80М-2, ТУ 64-1-1382-83;Центрифуга ОПН-3,;Камера Горяєва з накривним склом;Пипетка Пастера;Клавішний лічильник для підрахунку формених елементів крові; ЗМА,;Штатив поліетиленовий для пробірок;Бокс 1БП 1-ос, ИЗ. 420.10.Натрію хлорид, кваліфікації “хч”;Середовище Ігла (SIGMA-CHEMICAL CO. P.O. BOX 14508 ST LOUIS, MO63178 USA);Глутамін (SIGMA-CHEMICAL CO. P.O. BOX 14508 ST LOUIS, MO 63178 USA);Аутологічна сироватка; Гентаміцину сульфат-Дарниця 4%;Морські корали.
    2. Для лікування дефектів і деформації кісткової тканини, що виникають внаслідок травм, запально-деструктивних, онкологічних процесів, вад розвитку а також для підвищення її міцності та якості.
    3. Клінічне використання біотрансплантатів не показане на фоні злоякісних процесів, інфікування, при кровотечах, гострих запаленнях.
    4. Методика отримання біоінженерного трансплантата з використанням аутологічних мезенхімальних стовбурових клітин і корала в якості матриці носія ефективна для відновлення кісткової структури, покращує лікувальний ефект, зменшує післяопераційні ускладнення і підвищує якість життя пацієнтів
    5. Необхідно дотримуватись концентрації лейкоцитів 106/мл у поживному середовищі для досягнення ефективного росту стовбурових клітин. Вчасно перевіряти ростове середовище на предмет можливого бактеріального забруднення, яке може виникнути при недотриманні умов антисептики під час підготовки біоінженерного трансплантата. При інкубуванні біотрансплантата в поживному середовищі необхідно періодично струшувати вміст пробірки для ресуспендування лейкоцитів.
    6. Матеріали ІІІ (Х) з’їзду асоціації стоматологів України Полтава .
    7. НДР «Розробка методу тканинної інженерії з використанням аутологічних мезенхімальних стовбурових клітин» 0106U003240 (2006-2008 рр.).
    8. -.
    9. Українська медична стоматологічна академія. Адреса: вул. Шевченка, 23, м. Полтава, 36024.
    10. Кайдашев І. П. служб. т. (0532)56-22-43 Боброва Н. О. служб. т. (0532)56-22-43 Панькевич А. І. служб. т. (0532)2-086-94