Предисловие

Вид материала

Методическое пособие

Содержание Органолептическая оценка силоса Определение кислотности силоса Микробиологическое исследование силоса Определение в силосе общего количества бактерий Учет молочнокислых бактерий Определение количества маслянокислых бактерий Определение гнилостных бактерий Определение количества дрожжей и плесени Оценка результатов микробиологического исследования силоса Ход работы Тесты для проверки знаний Цель занятия II. Взятие материала для исследования молока Микробиологическое исследование Ход работы Тесты для проверки знаний Цель занятия I. Профилактические и лечебные препараты Живые вакцины Убитые вакцины ... Полное содержание

Подобный материал:

• Содержание предисловие  3 Введение, 2760.07kb.
• Томас Гэд предисловие Ричарда Брэнсона 4d брэндинг, 3576.37kb.
• Электронная библиотека студента Православного Гуманитарного Университета, 3857.93kb.
• Е. А. Стребелева предисловие,, 1788.12kb.
• Breach Science Publishers». Предисловие. [3] Мне доставляет удовольствие написать предисловие, 3612.65kb.
• Том Хорнер. Все о бультерьерах Предисловие, 3218.12kb.
• Предисловие предисловие petro-canada. Beyond today’s standards, 9127.08kb.
• Библейское понимание лидерства Предисловие, 2249.81kb.
• Перевод с английского А. Н. Нестеренко Предисловие и научное редактирование, 2459.72kb.
• Тесты, 4412.42kb.

Органолептическая оценка силоса

При органолептическом исследовании обращают внимание на физические свойства силоса: структуру, цвет, запах и вкус силосующейся массы.

Хороший силос отличается сохранением структур стеблей и листьев. Цвет их под влиянием органических кислот несколько изменяется до желто-оливкового. На воздухе силос быстро темнеет, поэтому определение цвета его следует производить сразу после взятия пробы из силосной массы. Если корм приобрел очень темный цвет, почти черный и стал бесструктурным, это указывает на процессы гниения; такой корм – недоброкачественный.

Запах доброкачественного силоса приятный, напоминающий запах свежего ржаного хлеба, квашеной капусты, соленых огурцов или моченых яблок, иногда слегка спиртовой. Последний обуславливается развитием молочно-кислых бактерий и дрожжей. Резко кислый запах указывает на большое содержание уксусной кислоты, что свидетельствует о более низком качестве силоса. Затхлый и гнилостный запах указывает на обильное развитие в силосе плесеней и гнилостных бактерий, вызывающих порчу корма. Неприятный запах придает силосу масляная кислота, образующаяся в результате неправильно проведенного силосования и указывающая на недоброкачественность силоса.

Определение кислотности силоса

Наиболее ярким показателем микробиологических процессов, протекающих в силосе, является его рН. Определение производится ионометром или колометрическим методом по Михаэльсу.


Для этой цели из силоса готовят вытяжку или путем настаивания в течение суток одной части силоса с 45 частями дистиллированной воды (для прекращения брожения обычно добавляют толуол), или эту навеску силоса (20 г) предварительно растирают в фарфоровой ступке, переносят в колбочку, а затем заливают дистиллированной водой (80 мл). Силос с водой энергично взбалтывают (в первом случае 45 раз, во втором – в течение 5 минут), фильтруют через бумажный фильтр и прозрачный фильтрат сразу используют для определения рН.

В доброкачественном силосе рН должно быть не выше 4.04.2.

Микробиологическое исследование силоса

Для общего ознакомления с микрофлорой силоса производят его микроскопическое исследование. Для этой цели небольшое количество силоса (12 г) тщательно растирают в стерильной ступке с 12 мл стерильной воды и из полученной массы делают обычным способом мазок. Мазок сушат, фиксируют на пламени спиртовки и окрашивают водным раствором какого-нибудь анилинового красителя. Лучше всего окрашивать мазки из силоса карболовым эритрозином (5%-ный раствор карболовой кислоты  100 мл, сухого эритрозина  2 г); окраска производится в течение 2030 минут. Обычно в мазках, приготовленных из доброкачественного силоса, обнаруживается большое количество палочек, стрептококки, дрожжи. Наличие в препарате плесневых грибков указывает на порчу силоса.

Для характеристики качества силоса производят определение общего числа микроорганизмов и их групповой учет. При этом прежде всего готовят разведение силоса (5 г) и переносят его в колбу со 100 мл стерильной воды. Силос с водой энергично взбалтывают в течение 10 минут и из полученного исходного разведения 1:10 готовят последующие разведения. Для приготовления разведения берут 67 пробирок, в которые предварительно наливают по 9 мл стерильной воды. Затем в первую из них пипеткой вносят 1 мл разведения силоса 1:10 (из колбы), тщательно взбалтывают в течение 35 минут и 1 мл полученного разведения 1:100 переносят в следующую пробирку и т.д. Таким образом готовят последующие разведения до 10^-6  10^-7.

Определение в силосе общего количества бактерий

Для этого посев суспензии производят на МПА, в двухкратной повторности. Если силос находится в стадии брожения, для посева берут разведения 10^-6  10^-7, при исследовании старого силоса 10^-6  10^-5 и даже меньше.


Посев производят следующим образом: стерильной градуированной пипеткой асептично берут 1 мл соответствующего разведения (для каждого разведения нужна отдельная пипетка) и вносят в пустую чашку Петри. Затем в чашку наливают предварительно расплавленный и охлажденный до 50^оС мясо-пептонный агар.

Учет молочнокислых бактерий

Производят путем посева 34 разведений силосной массы на сусло-агаре с мелом (сусло-агар готовят из пива, разведенного водой 1:1 с добавлением 1.52%-ного агар-агара). Посевы выдерживают 34 дня в термостате при температуре 3035^оС. Вследствие образования кислоты и растворения мела колонии молочнокислых микробов образуют на твердых средах с мелом зоны просветления.

Определение количества маслянокислых бактерий

Производят путем посева 34 разведений силоса на картофельную среду Рушмана или на среду Е. Н. Мишустина следующего состава: крахмал  0.5 г; пептон  5.0 г; K₂HPO₄  1.0 г; мел  5.0 г; водопроводная вода  1000 мл.

Среда разливается по пробиркам с поплавками и стерилизуется в автоклаве при 1 атмосфере 20 минут. Различные разведения силосной массы (от 1:100 до 1:10 000) засевают в пробирки с питательной средой в количестве 1 мл (каждое разведение засевают параллельно в 23 пробирки). Часть из них после посева прогревают при температуре 80^оС в течение 1015 минут, а затем засеянные пробирки выдерживают в термостате при температуре 3540^оС до 10 суток. В процессе роста маслянокислых бактерий отмечают газообразование, гидролиз, растворение мела и запах прогорклого масла.

Определение гнилостных бактерий

Выполняют с помощью посевов 34 разведений силоса на МПБ, при этом между пробиркой и пробкой вставляют полоску фильтровальной бумаги, смоченную 10%-ным раствором уксуснокислого свинца, и красную лакмусовую бумажку.

Гнилостные бактерии вызывают помутнение среды и образование H₂S, которую определяют по почернению индикаторной бумажки, смоченной уксуснокислым свинцом, или посинению лакмусовой бумажки при выделении аммиака.

Определение количества дрожжей и плесени

Производят путем посева силоса на сусло-агар без добавления мела. Посев производят, как описано выше, из разведений силоса 1:1000  1:10000. Засеянные чашки Петри выращивают при температуре 2025^оС и подсчет выросших колоний производят через 4 суток. Для пересчета всех данных рекомендуется пользоваться таблицами МакКреди.

Оценка результатов микробиологического исследования силоса

Твердых микробиологических норм, характеризующих качество силоса, не имеется, и результаты микробиологического исследования дают лишь общее представление о ходе процессов в силосе. Показателями нормально протекающего процесса созревания силоса являются: низкое рН (4), преобладание молочнокислых бактерий (110 млн.), небольшое количество плесеней (до 4 тыс.), бактерий группы кишечной палочки (2500 млн.) и маслянокислых бацилл (250 млн.).

Зрелый силос, в котором правильно протекали микробные процессы, беден микроорганизмами, в то же время силос богат органическими и минеральными веществами, которые находятся в легкоусвояемой форме. Все это делает силос ценным пищевым продуктом для сельскохозяйственных животных.

Ход работы:

I. Определить титр Cl.perfingens на среде ВильсонБлера:

• Взвесить 0.1 г измельченного корма, поместить в колбу с 10 мл стерильного физиологического раствора и тщательно взболтать в течение 5 минут;
  
• Затем 1мл полученной суспензии внести в стерильную чашку Петри и залить питательной средой ВильсонБлера (100 мл 3%-ного МПА и 1%-ной глюкозы); растапливают в водяной бане и добавляют 10 мл 20%-ного раствора сульфита натрия и 1 мл 8%-ного хлористого натрия. Оба раствора готовят на стерильной дистиллированной воде и кипятят;
  
• Через сутки инкубирования в анаэростате при 37 градусах чашки Петри просматривают и отмечают результаты:
  

 отсутствие колоний  чистый корм;

 13 колонии  слабозагрязненный корм;

 310 колоний  умеренно загрязненный корм;

 более 10 колоний  сильнозагрязненный корм;


II. Приготовить препарат "раздавленная капля" из мицелия грибков на агаре и из увлажненного грубого корма (зерна, соломы):

• Пораженное растение тщательно осмотреть и установить наличие или отсутствие спороношения;
  
• Выявленные на поверхности пораженной ткани спороношения в виде налета подушечек или плодовых тел снять препаровальной иглой и перенести на предметное стекло в каплю 50%-ного раствора глицерина или молочной кислоты;
  

• Налет расправить иглами, накрыть покровным стеклом и изучить с сухими системами микроскопа (8´15 и 40´7);
  
• Промикроскопировать, изучить морфологию грибков, зарисовать.
  

III. Приготовить препарат из колоний, выросших вокруг зерен, соломы, разложенных на МПА. Окрасить по Граму, промикроскопировать, зарисовать.

IV.Ознакомиться с общей микрофлорой силоса. Из суспензии силоса приготовить препарат, окрасить метиленовой синькой. Промикроскопировать,зарисовать.

VI. Определить с помощью индикаторной бумажки рН силоса;

VII.Определить общее число бактерий в 1 г силоса. Для этого подсчитать число колоний на МПА и умножить на степень разведения.

VIII. Определить по росту на МПБ наличие в силосе гнилостных бактерий.

IX. Учесть реакцию ИФА для выявления токсина ботулизма.

X. Результаты исследований занести в протокол.


Тесты для проверки знаний:

1. К органолептическим свойствам силоса относят: а) структуру, б) влажность, в) рН, г) цвет, д) запах.

Ответ: а, г, д


2. При микробиологическом исследовании силоса определяют:

а) ОМЧ, б) БГКП, в) споровые бактерии, г) маслянокислые, д) молочнокислые, е) Гр(+)

Ответ: а, б, г, д


Ключевые слова: эпифитная микрофлора, микрофлора корма, силос, маслянокислое брожение, гниение, молочнокислое брожение.


Занятие № 12


Тема: Микробиологическое исследование молока и молочнокислых продуктов.

Цель занятия: Обучить методам исследования молока и молочнокислых продуктов.

Материалы и оборудование: Стерильная посуда (пипетки, микропипетки, чашки Петри, пробирки, скальпель), набор красителей, предметные стекла, 1%-ный водный раствор метиленовой синьки, жидкость Никифорова, МПА (высокие столбики), стерильная водопроводная вода по 9 мл в пробирках и по 20 мл, молоко, кисломолочные продукты (сметана, кефир или кефирные зерна).

Демонстрация:

1. Опыт в пробирках для определения редуктазы в молоке.

2. Опыт в чашках Петри для определения лизоцима в молоке.

3. Чашки с ростом для определения микробного числа молока.

4. Стерильные среды Эндо, Козера, Кесслера с глюкозой.

5. Среды с ростом БГКП Кесслера, Эндо, Козера и среда с глюкозой.

Вопросы для обсуждения:

1. Источники микрофлоры молока.

2. Смена фаз при хранении молока.

3. Молоко как возможный источник патогенных микробов.

4. Порок молока, микробы – участники.

5. Какие вам известны способы консервирования молока?

6. Методы микробиологического исследования молока.

7. Как взять пробу молока для бактериологического исследования?

8. Какими требованиями должно отвечать молоко группы А?

9. Какие вы знаете кисломолочные продукты?

10. Какие микроорганизмы участвуют в молочнокислом брожении?

12. Микробиология маслоделия, сыроделия.

13. Какие вы знаете пороки микробного происхождения, связанные с хра- нением масла и сыра?


I. Введение

Молоко является продуктом питания и средой для развития микроорганизмов. Качество молока определяется рядом показателей  физических, химических и бактериологических. Физические и химические показатели характеризуют питательную ценность молока, а бактериологические позволяют судить о свежести молока и степени его загрязнения. При помощи этих показателей можно контролировать санитарные требования при дойке, обработке, хранении и транспортировке молока. Некоторые бактериологические показатели (наряду с физическими и химическими) характеризуют состояние вымени животного, т. е. наличие или отсутствие в нем воспалительного процесса. Микрофлора молока складывается из ряда источников: 1) микрофлора вымени; 2) внешние источники заражения молока (кожа животного, посуда и аппаратура, вода, корм, подстилка, воздух, тело и одежда доярки) как источники первичной микрофлоры молока. Вторичная микрофлора молока  это накопление микрофлоры в молоке путем размножения ранее попавших в него микроорганизмов.


II. Взятие материала для исследования молока

В зависимости от поставленных задач исследования пробы молока берут от одной определенной коровы или от группы коров.

При взятии пробы молока от одной коровы: 1) готовят стерильную посуду; 2) вымя коровы тщательно моют теплой водой с мылом, протирают стерильным полотенцем, соски дезинфицируют ватным тампоном, смоченным спиртом; 3) доильщицы тщательно моют и дезинфицируют руки; 4) из каждого соска поочередно молоко сдаивают в стерильную посуду: а) первые 34 струйки (при исследовании это микрофлора кожи животного), в пищу они не идут и не уничтожаются; б) средние струйки (микрофлора молока); в) последние струйки (микрофлора вымени). При исследовании последних струек молока и наличии в них лейкоцитов и микроорганизмов можно выявить мастит (воспаление молочной железы). Все пробы этикетируются и направляются на исследование в лабораторию.

При взятии молока от группы коров: 1) молоко во флягах тщательно перемешивают мутовкой медленными круговыми движениями; 2) забор проб молока производят стерильным пробником (длинная стеклянная трубка) в количестве 50 мл и сливают в стерильный флакон. Флакон закрывают над пламенем спиртовки ватной пробкой. Нумеруют, на этикетке


указывают дату взятия пробы (число и час), а также фамилию, имя, отчество и должность лица, производившего взятие пробы.

Исследование взятых проб молока производят сразу или не позднее 2-х часов с момента взятия проб. Если молоко не может быть немедленно исследовано, то его охлаждают до + 46^оС, хранят и транспортируют при этой же температуре.

Основными бактериологическими показателями, характеризующими свежесть молока и его чистоту, являются: а) количество бактерий в 1 мл молока (микробное число), б) коли-титр молока (наименьший объем молока, в котором обнаружена одна БГКП).

Микробное число молока можно определить: 1) бактериологическим способом (высев определенного объема молока на специальные среды с последующим подсчетом выросших колоний; 2) методом прямого подсчета бактерий под микроскопом (метод Брида, Королева, Разумовой и т.д.); 3) косвенными методами: а) с помощью пробы на редуктазу; б) с помощью пробы с резазурином.

1. Микробиологическое исследование

молочнокислых продуктов

Типичные молочнокислые бактерии неподвижны, Гр (+), слабо или совсем не растут на МП-ых средах. Молочнокислые бактерии молока при сбраживании углеводов образуют в основном молочную кислоту, побочные продукты обычно мало заметны. Но встречаются молочнокислые бактерии, которые при брожении наряду с молочной кислотой образуют значительное количество летучих кислот (уксусной, углекислоты), спирт, диацетил и при развитии совместно с активными молочнокислыми бактериями придают молочным продуктам своеобразный специфический вкус и аромат. Молочнокислые микроорганизмы представлены тремя группами: молочнокислые стрептококки, молочнокислые палочки, дрожжи.

Ход работы:

I. Определить количество бактерий в 1 мл молока (методом посева):

• Приготовить серийное разведение молока: а) взять 4 пробирки с 9 мл водопроводной воды и подписать: № 1, 2, 3, 4; б) взятую пробу молока тщательно взболтать и стерильной пипеткой набрать из нее 1 мл молока и внести в пробирку № 1, тщательно перемешать, соблюдая все правила асептики , и перенести в пробирку № 2 и т.д. Вы получите разведения молока: № 1 (1:10), № 2 (1:100), № 3 (1:1000), № 4 (1:10000).
  

• Взять 1 стерильную чашку Петри, подписать "молоко 1:10000". В чашку внести 1 мл из пробирки № 4, залить чашку расплавленным и охлажденным до 4550^оС МПА (15 мл). Образовавшуюся смесь тщательно перемешать путем вращения чашки и оставить на столе до полного застывания агара.
  

• Чашку перевернуть вверх дном и поставить в термостат на 48 часов.
  

• По демонстрационным чашкам подсчитать микробное число.
  

II. Провести микроскопическое исследование кисломолочных продуктов:

• Приготовить мазок из сметаны, высушить на воздухе, зафиксировать в жидкости Никифорова и окрасить метиленовой синькой (3 мин). Мазок промыть, подсушить фильтровальной бумагой. Промикроскопировать с иммерсионной системой. Отметить наличие молочнокислых стрептококков, палочек и дрожжей, сбраживающих лактозу.
  
• Приготовить мазок из кефира: а) зерно кефира поместить между двумя стерильными стеклами и раздавить его; б) полученные на стекле отпечатки высушить, зафиксировать и окрасить метиленовой синькой, промикроскопировать, зарисовать и отметить наличие единичных дрожжей, молочнокислых стрептококков, молочнокислых бактерий и палочки стромы.
  

Тесты для проверки знаний:

1. Молоко 1 класса имеет следующие характеристики: а) сине-стальную окраску, б) количество бактерий > 20 млн/мл, в) количество бактерий < 20 млн/мл, г) белую окраску, д) количество бактерий менее 500 тыс/мл.

Ответ: а, д


2. В лаборатории имеется: 1) сырое цельное молоко, 2) пастеризованный обрат, 3) сыворотка молочная, а также закваски: а) молочный срептококк, б) ацидофильная палочка. Что необходимо использовать, чтобы приготовить ацидофилин для телят ?

Ответ: 1, 3 б


Ключевые слова: ОМЧ молока, Coli-титр молока, молочнокислые бактерии, кисломолочные продукты


Занятие № 13

Тема: Препараты, используемые для лечения, профилактики и диагностики инфекционных заболеваний сельскохозяйственных животных.

Цель занятия: Изучить вакцины, сыворотки, иммуноглобулины, аллергены и способы их применения.

Материалы и оборудование: Набор препаратов лечебного, профилактического и диагностического назначения в животноводстве.

Вопросы для обсуждения:

1. Вакцины, их назначение, виды вакцин.

2. Иммунные сыворотки, их назначение.

3. Способы получения лечебно-профилактических препаратов.

4. Иммуноглобулины, их назначение.

5. Аллергены, их получение и использование.

6. Диагностические сыворотки, их получение, применение.

7. Диагностикумы, их получение, применение.

8. Применение бактериофагов для лечения и диагностики.


I. Профилактические и лечебные препараты

Одним из важнейших направлений прикладной иммунологии является создание эффективных препаратов для иммунопрофилактики и иммунотерапии инфекционных заболеваний. Среди таких препаратов различают:

1. Вакцины и анатоксины.

2. Иммунные сыворотки и иммуноглобулины.


Вакцины

Вакцины  препараты, используемые для активной иммунизации людей и животных. Э.Дженнером была получена первая вакцина, содержащая вирус коровьей оспы (vacca - корова). Название вакцины было дано Л. Пастером всем прививочным препаратам, полученным из микроорганизмов и их продуктов. Вакцины должны обладать определенными свойствами (физико-химическими, антигенными) и при правильном дозировании и введении животным давать соответствующую реакцию и создавать активный иммунитет против той или иной болезни.

Различают вакцины живые, убитые, субъединичные, генно-инженерные и другие.


Живые вакцины изготовляют из специально полученных штаммов микроорганизмов с ослабленной вирулентностью и полноценными иммуногенными свойствами. Для этого вначале прибегают к селекции и направленному изменению бактериальных культур и вирусов (на фоне сохраненной антигенной структуры). Это достигается: выращиванием возбудителя в средах, недостаточно для его развития благоприятных (туберкулезная вакцина в БЦЖ); пассажами через организм маловосприимчивых животных (вакцина против рожи свиней, вакцина против бешенства, вакцина против вируса чумы свиней и вируса Ньюкастловской болезни); обработкой химическими веществами и физическими агентами (вакцины против пастереллеза птиц, против сибирской язвы (СТИ, ГНТИ), вакцины Ценковского, бруцеллеза ВА-19, против паратифа телят Т_с-177).

Живые вакцины обычно более эффективны, создают, как правило, напряженный иммунитет, сходный с постинфекционным. В большинстве случаев достаточно бывает однократной вакцинации живой вакцины, так как вакцинный штамм может размножаться и персистировать в организме.

Однако после их применения могут возникнуть поствакцинальные осложнения, особенно у животных с пониженной резистентностью к заболеваниям. Вакцины чаще леофильно высушивают: из замороженного состояния, в вакууме.

Убитые вакцины представляют собой взвесь убитых (инактивированных) микроорганизмов. Их готовят из штаммов микроорганизмов, обладающих максимально выраженными иммуногенными свойствами. Для инактивации вакцин используют разные методы: нагревание, УФ-лучи, ультразвук, химические вещества (спирт, формалин, фенол и другие). Инактивацию проводят в условиях, исключающих денатаруцию антигенов. Примерами убитых вакцин могут служить: формолвакцина против эмфизематозного карбункула, формолвакцина против оспы свиней и против паратифа телят.

Вакцины, содержащие убитые микробы, безопасны, вызывают медленное образование иммунитета и менее эффективны в условиях действующего очага инфекции.

Следует учитывать, что аттенуированный (ослабленный) или убитый возбудитель  это множество различных антигенных детерминант, из которых протективностью, т.е. способностью индуцировать защитный иммунитет, обладают очень немногие. В связи с этим целесообразно усовершенствовать вакцины путем использования компонентов бактериальной клетки и вирионов, обладающих наиболее выраженным протективным действием.

Вакцины, содержащие отдельные антигенные комплексы микробных клеток и вирионов, называют субъединичными. При введении их в организм субъединичные вакцины благодаря хорошей растворимости и относительно низкой молекулярной массе быстро метаболируются и выводятся из организма, не обеспечивая длительного иммуногенного раздражения. Поэтому к ним обычно добавляют вещества-адъюванты (adjuvans - помогающий): гидроокись аммония, алюмо-калиевые квасцы, фосфаты аммония, кальция и другие. Адъюванты укрупняют антигенные частицы, созюдают в месте введения депо (депонированные вакцины), т.е. удлиняют период иммуногенного раздражения. Кроме того, адъюванты усиливают фагоцитоз, митоз иммунокомпетентных клеток.

Генно-инженерные вакцины получают поэтапно. Сначала составляют генетическую карту генома данного возбудителя. Затем гены, контролирующие протективные антигены, переносят в геном других микроорганизмов, например в дрожжевую клетку или кишечную палочку, клонируют в них, добиваясь экспрессии этих генов в новых условиях. Синтезируемые новыми клетками антигены (белки) очищают от балластных веществ и адсорбируют на адъювантах. Созданы генно-инженерные вакцины против ящура, бешенства.

Ассоциированные вакцины. Большое значение в животноводстве имеет ассоциированная иммунизация, т.е. введение в организм ассоциированных вакцин, содержащих одновременно антигены нескольких возбудителей, например: ассоциированная вакцина против эмфизематозного карбункула, злокачественного отека и пастереллеза крупного рогатого скота, ассоциированная вакцина против ботулизма и пастереллеза норок.


Анатоксины

Анатоксины используют для создания искусственного активного антитоксического иммунитета (столбняк, ботулизм и другие). Анатоксин представляет собой экзотоксин (фильтрат бульонной культуры токсигенного микроба), обезвреженный длительным (1830 дней) воздействием формалина при температуре 3740^оС.


Анатоксин контролируют на стерильность, безвредность и иммуногенность. Анатоксины очищают от балластных белков и адсорбируют на адъювантах.

Иммунные сыворотки и иммуноглобулины

При многих бактериальных и вирусных инфекциях антитела играют защитную роль, нейтрализуя токсины и внеклеточные вирусы, способствуют очищению организма от возбудителя. Однако накопление достаточного количества антител наблюдается, как правило, не ранее чем через 23 недели после начала заболевания. Поэтому для создания искусственного пассивного иммунитета используют введение животным иммунных сывороток или иммуноглобулинов.

Сыворотки применяют с профилактическими и лечебными целями. Для профилактики их используют, когда имеется непосредственная опасность заражения, например, столбняком, анаэробными инфекциями при ранении. Сыворотку вводят чаще внутримышечно или внутривенно.

Иммунные сыворотки получают путем многократной иммунизации лошадей, от которых можно получить сравнительно много крови. Животных иммунизируют соответствующими антигенами: анатоксинами для получения антитоксических сывороток и вакцинами для получения антибактериальных и антивирусных сывороток. После окончания иммунизации у животного стерильно берут кровь, из которой получают сыворотку. Сыворотку проверяют на активность (титр антител), стерильность, безвредность, очищают от балластных белков. Чаще для этого применяют метод ферментативного гидролиза, осаждение активных фракций сульфатом аммония и диализ  «Диаферм».

Из сывороток получают иммуноглобулины путем спиртоводного осаждения при низкой температуре. Из крови гипериммунизированных животных получают иммуноглобулины против бешенства, сибирской язвы, чумы, лептоспироза и т.д.


II. Диагностические препараты

Диагностические препараты используются для:

1) определения с помощью специальных иммунных сывороток вида и типа микроорганизма, выделенного от больного животного;

2) обнаружения антител в сыворотке больного животного;

3. выявления аллергической перестройки организма, возникающей при некоторых инфекционных заболеваниях.
   

Диагностические сыворотки

Диагностические сыворотки содержат специфические антитела, с их помощью можно выделить антигены соответствующего возбудителя. Диагностические сыворотки подразделяются на агглютинирующие, преципитирующие, нейтрализующие, люминисцентные, меченые (конъюгированные) ферментом и другие.

Все диагностические иммунные сыворотки готовят путем иммунизации животных (кроликов, лошадей) соответствующим антигеном. Полученные от иммунизированных животных сыворотки титруют (определяют титр соответствующих антител), в стерильных условиях разливают в ампулы.

Свободные аминогруппы F_c фрагментов антител в иммунных сыворотках можно конъюгировать ферментами, флюоресцентными красителями, изотопами. Эти сыворотки используют для диагностики в реакциях ммунофлюоресцентного и иммуноферментного анализа, радиоиммунного анализа.

Диагностикумы

Диагностикумы используют для определения специфических антител в сыворотке животного. Чаще всего диагностикумы представляют собой гомогенную взвесь убитых микробов или вирусов. Диагностикумы из большинства бактерий готовятся путем инактивации их взвеси формалином, этиловым спиртом, прогреванием и другими методами.

В ряде случаев для серодиагностики применяют не целые микроорганизмы, а выделенные из микробных тел антигены. Это достигается различными методами: дезинтеграцией химическими веществами, кипячением, ультразвуком и т.д.

Бактериофаги

Бактериофаги характеризуются высокой специфичностью, поэтому их можно использовать для:

1) фаготерапии  лечения некоторых инфекционных заболеваний;

2) фагопрофилактики  предупреждения некоторых заболеваний;

3) диагностики.

Аллергены

Аллергены  это препараты, которые применяют с целью диагностики соответствующего заболевания, для выявления иммунологической перестройки организма в результате вакцинации или заболевания. Основные требования к аллергенам  высокая чувствительность и специфичность.


Микробные аллергены чаще готовят из фильтратов бульонных культур. Вводят накожно, внутрикожно или на конъюктиву глаза.

При положительной реакции на месте введения аллергена развивается местная воспалительная реакция: отечность, гиперемия, выделение гноя из внутреннего угла глаза и др.


Ход работы:

I. Изучить вакцины:

а) живые вакцины  БЦЖ, СТИ,

б) убитые вакцины,

в) субъединичные вакцины.

II. Изучить анатоксины: столбнячный, ботулинический.

III. Изучить иммунные сыворотки и иммуноглобулины. Просмотреть образцы следующих сывороток:

а) сыворотку против сибирской язвы,

б) сыворотку против паратифа поросят,

в) поливалентную сыворотку против лептоспироза.

IV.Изучить аллергены. Просмотреть образцы следующих аллергенов:

а) альтуберкулин Коха,

б) туберкулин ППД,

в) бруцеллизат ВИЭМ,

г) бруцеллин ВИЭМ.

Разобрать способы введения.

V. Изучить диагностические сыворотки:

а) агглютинирующую сальмонелезную поливалентную,

б) агглютинирующую сальмонелезную групповую О-сыворотку,

в) агглютинирующую сальмонелезную типовую Н-сыворотку,

г) люминесцирующую сыворотку чумную,

д) люминесцирующую сыворотку бруцеллезную,

е)преципитирующую сибиреязвенную сыворотку. Просмотреть образцы сывороток, разобрать способы их приготовления, применения.

VI. Изучить диагностикумы:

а) сальмонелезный ОН-диагностикум,

б) бруцеллезный диагностикум,

в) эритроцитарный сибиреязвенный диагностикум,

г) бруцеллезный эритроцитарный диагностикум. Просмотреть образцы диагностикумов, разобрать способы их получения, применения.


VII. Изучить бактериофаги:

а) для лечения: стафилококковый, стрептококковый,

б) для диагностики: чумной диагностический фаг.


Тесты для проверки знаний:

1. Туберкулины для аллергодиагностики животному вводят:

а) внутрикожно, б) внутривенно, в) внутримышечно, г) на конъюктиву.


Ответ: а, г


2. Для активной иммунизации против сибирской язвы животным вводят:

а) противосибиреязвенную сыворотку, б) вакцину СТИ, в) вакцину ГНТИ, г) противосибиреязвенный иммуноглобулин, д) вакцины Ценковского.

Ответ: б, в, д

3. Живые вакцины:

а) содержат иммуноглобулины, б) создают пассивный иммунитет организма, в) создают активный иммунитет, г) состоят из аттенуированного штамма.

Ответ : в, г


Ключевые слова: вакцины, иммунные сыворотки, иммуноглобулины, аллергены, диагностикумы, бактериофаги.

ЛИТЕРАТУРА

1. Вирусные инфекции. Труды института имени Пастера. С.-Пб.: НИИ эпидемиологии и микробиологии, 1992. 122 с.
   
2. Кочемасова З.Н. и др. Санитарная микробиология и вирусология. М.: Медицина, 1987. 440 с.
   
3. Красильников А.П. Микробиологический словарь-справочник. Минск: Беларусь, 1986. 210 с.
   
4. Краткий определитель бактерий. Под ред. Дж. Хоулта. М.: Мир, 1980. 312 с.
   
5. Лукомская К.А. Микробиология с основами макробиологии. М.: Мир, 1987. 120 с.
   
6. Покровский В.Н. Бактериофаг – вирус бактерий. М.: Знание, 1986. 310 с.
   
7. Пяткин К. Д. Микробиология. М.: Медицина, 1971. 352 с.
   

8. Стейниер Р., Эдельберг Э., Дж. Ингрэм. Мир микробов. Т.1, 2, 3. М.: Мир, 1979. 270 с.
   

СОДЕРЖАНИЕ


ПРЕДИСЛОВИЕ ………………………………………………………………. 3

Раздел I. МОРФОЛОГИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ

1. Правила работы в бактериологической лаборатории .

Техника приготовления и простая окраска препаратов.

Морфология микроорганизмов ……………………………………………. 4

2. Структура бактериальной клетки. Сложные методы окраски ………….. 7
   

Раздел II. ФИЗИОЛОГИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ

3. Питательные среды. Выделение чистых культур

бактерий (I этап) …………………………………………………..………. 13

4. Ферменты бактерий. Выделение чистых культур

бактерий (II и III этапы). Определение чувствительности

микроорганизмов к антибиотикам, УФО и химическим

веществам. Культивирование анаэробов …………………………………. 18

5. Выделение чистых культур (IV этап). Влияние факторов

внешней среды на микроорганизмы. Понятие о стерилизации

и дезинфекции ………………………………………………………………. 23

6. Генетика микроорганизмов ………………………………………………… 28

Раздел III. САНИТАРНОБАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЕ

ИССЛЕДОВАНИЯ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ

7. Санитарнобактериологическое изучение природных

биоценозов …………………………………………………………………… 31

Раздел IV. ИНФЕКЦИЯ И ИММУНИТЕТ

8. Реакции иммунитета ………………………………………………………... 38

9. Методы лабораторной диагностики инфекционных болезней

сельскохозяйственных животных, вызываемых бактериями ……………. 45

10. Лабораторная диагностика вирусных инфекций ………………………….. 50

Раздел V. МИКРОФЛОРА КОРМОВ, МОЛОКА И

МОЛОЧНОКИСЛЫХ ПРОДУКТОВ

11. Микробиологическое исследование кормов ………………………………. 53

12. Микробиологическое исследование молока и

молочнокислых продуктов …………………………………………………. 62

13. Препараты, используемые для лечения, профилактики и

диагностики инфекционных заболеваний

сельскохозяйственных животных ………………………………………….. 66

Литература ……………………………………………………………………….. 73