Аттенуированной вакцины против краснухи

Вид материала

Автореферат

Содержание Список работ, опубликованных по теме диссертации 4.Усовершенствование методов определения биологической активности вирусов кори, паротита и краснухи в моно- и ассоциированных пр 5. Характеристика альтернативной клеточной культуры для производства моно- и ассоциированных вакцин против детских вирусных инфе 6. Краснуха в России: стратегия и тактика вакцинации / В.В. Семериков, Л.И Мельчукова, А.Я. Колобов, В.Ф. Попов, И.Н. Лаврентьев 9. Разработка отечественной вакцины против краснухи / И.Н. Лаврентьева 24. Генетическая характеристика вируса краснухи в период вакцинопрофилактики/ И. Н. Лаврентьева Список сокращений

Подобный материал:

• Вакцинация против гриппа Почему вакцины против гриппа каждый год разные?, 389.79kb.
• Вакцинация. Прививки, 68.12kb.
• Лекция №3. Тема: профилактика туберкулеза, 67.13kb.
• Активизирующий опросник "За и против", 392.33kb.
• Название вакцины, 17.17kb.
• Встатье данной статье представлен подробный отчет об этапах разработки, испытаний, 472.34kb.
• Текст с ошибками "Александр Невский". Задание:  Найдите в данном тексте ошибки и укажите, 20.96kb.
• Разработка и внедрение технологии промышленного производства и системы управления качеством, 660.17kb.
• Д-р Марк Сиркус Ртуть, вакцины и медицина, 266.55kb.
• Создание унифицированной системы управления эпидемическим процессом кори, краснухи, 666.42kb.

ВЫВОДЫ

1. Сравнительный филогенетический анализ современных изолятов вируса краснухи, циркулирующих на территории Пермского края, вакцинных штаммов «Орлов-В», Wistar RA27/3 и четырех штаммов вируса краснухи, выделенных на других территориях России в 1967- 97 г.г. показал, что российские штаммы относятся к одной генетической группе и идентифицированы как вирусы генотипа 2с; вакцинный штамм Wistar RA27/3 относится к вирусам Rubella 1 генетической линии. Установлено более тесное генетическое родство между российскими изолятами и штаммом «Орлов-В» по отношению к штамму Wistar RA27/3: индекс генетической близости составляет 0,74 и 0,99, соответственно.

2. Массовая иммунизация против краснухи детей 1-2 года жизни, проведенная на территории Пермского края вакциной Rudivax (действующее начало – вакцинный штамм Wistar RA27/3) оказала влияние на биологический фактор эпидемического процесса. Создание коллективного иммунитета в группе детей младшего возраста при пороге привитости, равном 460,0 на 1000 детского населения в течение четырех лет применения вакцины вызвало достоверное увеличение генетической дивергенции изолятов вируса краснухи (коэффициент корреляции r = 0,76; t = 4,58; р<0,01) с 1,15% (2000 – 2002 гг.) до 3,14 % ( 2004 – 2005 гг.) (р<005).

3. Диплоидные линии клеток фибробластов легкого, почек, кожно-мышечного лоскута эмбриона человека обеспечивают репродукцию вируса краснухи. Чувствительность диплоидной линии клеток кожно-мышечного лоскута эмбриона человека «М-22» к вакцинному штамму «Орлов-В» соответствует чувствительности первичной культуры клеток ППК, к которой адаптирован указанный штамм. Средние показатели инфекционной активности вируса в первичной (ППК) и диплоидной («М-22») культурах клеток составляют 3,9 lg ТЦД₅₀/мл и 4,2 ТЦД₅₀/мл, соответственно.

4. Проведением одного дополнительного пассажа штамма «Орлов-В» в диплоидной линии клеток «М-22» получен аттенуированный штамм вируса краснухи «Орлов-Д». Репродукция штамма «Орлов-Д» не требует адаптации вируса к данному тканевому субстрату: инфекционную активность, равную 4,0 – 4,2 lg ТЦД₅₀/мл, стабильный rct₄₀ ± фенотип регистрировали с первого по десятый пассаж вируса в указанной культуре клеток.

5. Сравнительный генетический анализ штаммов Wistar RA27/3 и «Орлов-Д» выявил, что доля нуклеотидных замен в структуре гена Е1 исследованных штаммов составляет 6,7 %. При этом 34,3 % из них является значимыми, обуславливают различия в структуре поверхностного глико-протеина Е1. Наиболее важным различием между штаммами является замена в положении 208 аминокислоты тирозин (штамм «Орлов-Д») на гистидин (штамм Wistar RA 27/3) в высоко консервативном участке молекулы Е1.

6. Диплоидная линия клеток «М-22» - тканевой субстрат, не требующий специальных условий культивирования, устойчива к криоконсервации; характеризуется стабильной чувствительностью к вирусу краснухи на протяжении длительного периода жизнедеятельности клеток в фазе их активного роста ( 20 - 35 пассаж линии клеток). Линия «М-22» поддерживает также репродукцию вакцинных штаммов вируса кори Л-16 (4,0-6,0 lg ТЦД₅₀/0,5 мл) и вируса эпидемического паротита Л-3 (4,0 -5,0 lg ТЦД₅₀/0,5 мл).

7. Репродукция штамма «Орлов-Д» в диплоидной линии клеток «М-22» не сопровождается цитодеструктивным действием вируса на клетки, характеризуется более интенсивной динамикой формирования инфекционных вирусных частиц по отношению к его репродукции в первичной культуре клеток ППК. Указанные особенности позволяют получить удвоенный объем вакцинного препарата с более низким содержанием белка (100 - 230 мкг/мл) по сравнению с препаратом, полученном на первичных клетках ППК (500-780 мкг/мл) при равном количестве инфицированных клеток. Лиофилизированный штамм «Орлов-Д» характеризуется стабильной биологической активностью (3,4 – 3,8 lg ТЦД50/0,5 мл) в условиях хранения при температуре – 20^о С на протяжении 10 лет наблюдения. Это обстоятельство, а также наличие банка посевных клеток «М - 22» может обеспечить многолетнюю потребность в вакцине против краснухи на территории РФ.

8. Снижение реактогенности штамма «Орлов» с 30% до 2% клинических реакций средней тяжести в процессе аттенуации вируса в первичной культуре клеток ППК сопровождается заменой в положении 57 белка Е1 аминокислоты валин на изолейцин. Штамм «Орлов-Д» характеризуются стабильностью структуры гена Е1 при культивировании в культуре клеток «М-22» на протяжении минимум 5 пассажей вируса в указанной линии клеток.

9. В доклиническом изучении на обезьянах макака-резус установлено, что штамм «Орлов-Д не обладает остаточной нейровирулентностью, контагиозностью и по параметрам специфической безопасности соответствует требованиям, предъявляемым к штаммам для живых противовирусных вакцин.

10. Однократное введение серонегативным к краснухе обезьянам макака-резус препарата из штамма «Орлов-Д» с инфекционной активностью 1000 ТЦД 50/0,5 мл вызывает 100% сероконверсии и формирование вирусспецифических антител в высоких титрах (в РТГА 1 : 160 - 1 : 1280 ). Препарат из штамма «Орлов-Д» обладает протективностью, защищает иммунизированных животных от заражения патогенным вирусом краснухи (штамм «Лебедев»); характеризуется иммунологической безопасностью: продолжительность изменения активности иммунокомпетентных клеток и интерферонового статуса под влиянием вакцинации не превышает 45 суток после введения препарата. По изученным параметрам штамм «Орлов-Д» не уступает препаратам сравнения - вакцинным штаммам вируса краснухи «Орлов-В» и Wistar RA27/3.

11. Полученные результаты свидетельствуют о возможности получения живой аттенуированной вакцины против краснухи на основе штамма «Орлов-Д» и диплоидной линии клеток «М- 22» и целесообразности ее применения на территории с эндемичной циркуляцией вируса краснухи генотипа 2с.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Вакцинопрофилактика краснухи/ И.Н. Лаврентьева // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 1996. - № 1. – С. 37 – 45.

2. Этиология и профилактика краснухи / И. Н. Лаврентьева // Краснуха.

Синдром Врожденной краснухи. Информационный сборник Pasteur Merieux Connaught. – М. – СПб., 1997. – С. 5 – 17.

3. Вакцинопрофилактика краснухи. Анализ зарубежного опыта / И.Н. Лаврентьева // Матер. VII съезда всероссийского науч.-практ. общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. – М., 1997. – С. 104 -105.

4.Усовершенствование методов определения биологической активности вирусов кори, паротита и краснухи в моно- и ассоциированных препаратах / И.Н. Лаврентьева, Л.Ю. Тарос, Л.П. Сухобаевская, Е.А. Николаева // Матер.VII Съезда всероссийского науч.-практ. общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов – М.,1997.- С. 105 – 106.

5. Характеристика альтернативной клеточной культуры для производства моно- и ассоциированных вакцин против детских вирусных инфекций / И.Н. Лаврентьева, Л.П. Сухобаевская, Л.Ю. Тарос, Н.Б. Румель // Матер. VII съезда всероссийского науч.-практ.общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. – М.,1997. – С. 106 – 107.

6. Краснуха в России: стратегия и тактика вакцинации / В.В. Семериков, Л.И Мельчукова, А.Я. Колобов, В.Ф. Попов, И.Н. Лаврентьева // Матер. VII съезда всероссийского науч.-практ. общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. – М., 1997. – С. 139 – 140.

7. Эпидемиологический надзор за краснухой в Санкт-Петербурге /А.А. Соболевская, О. В. Парков, И.Н. Лаврентьева, В, П. Рыбков, С.С. Вашукова / Идеи Пастера в борьбе с инфекциями: Матер. II Междунар. конфер. – СПб., 1998. – С. 25.

8. Изучение чувствительности диплоидных линий клеток человека к вирусам кори, паротита и краснухи для совершенствования технологии производства детских противовирусных вакцин / И.Н. Лаврентьева, Л.П. Сухобаевская, Л.Ю. Тарос, Н.Б. Румель, Л.Ф. Литвинчук //Идеи Пастера в борьбе с инфекциями: матер. II Междунар. конфер. – СПб., 1998. – С. 49.

9. Разработка отечественной вакцины против краснухи / И.Н. Лаврентьева // вирусные инфекции на пороге XXI века: эпидемиология и профилактика: Матер. науч. конфер. с международ. участием, посвященной 200-летию ВМА. – СПб., 1999. – С. 223.

10. Вакцинопрофилактика краснухи. Стратегия и тактика/ И.Н. Лаврентьева, В.В. Семериков // Вакцинопрофилактика в XXI веке: матер. науч-прак. конф. Западно- Уральского региона. – Пермь, 2000 г. – С. 35 – 37.

11. Rubella in Russian Federation epidemiological feature and control measures to prevent the Congenetal rubella syndrome / V.V. Semericov, I.N. Lavrentyeva, V.F. Popov // Epidemiol. infect. – 2000. – v. 125. – 359 – 366 p.

12. Эпидемиологический надзор и контроль за краснушной инфекцией / В.В. Семериков, И.Н. Лаврентьева // Достижения отечественной эпидемиологии в XX веке. Взгляд в будущее: матер. науч. конференции, посвященной 80-летию академика В.Д.Белякова. – СПб., 2001. – С. 92 – 93.

13. Краснуха / В.В Семериков, И.Н. Лаврентьева, В.К. Таточенко, Л.Л. Нисевич, И.В. Фельдблюм. – Пермь - СПб- М., 2002. – 175 с.

14. О перспективах развития вакцинопрофилактики краснухи /В.В. Семериков, И.Н. Лаврентьева, И.В. Фельдблюм // Ликвидация и элиминация инфекционных болезней - прогресс и проблемы: Матер. 3-ей международ. конф., посвященной 80-летию института имени Пастера. – СПб., 2003 г. – С. 34.

15. Штаммы вируса краснухи для живой аттенуированной вакцины / И.Н. Лаврентьева, Л.П. Сухобаевская, В.З. Агрба, Л.А. Яковлева, Ю.А. Радюкевич, А.Б. Жебрун // Эпидемиология и вакцинопрофилактика.- 2003. - № 4.- С. 7 - 10.

16. Краснуха: Направления эпидемиологического надзора и профилактики/ В.В. Семериков, И.Н. Лаврентьева, И.В. Фельдблюм // Актуальные вопросы вакцинно-сывороточного дела в XXI веке: Матер. Всерос. науч. конф., посвященной 105-летию Пермского НПО «Биомед».- Пермь., 2003 г.- С.73 – 76.

17. Результаты доклинического изучения вариантов вакцинного штамма вируса краснухи «Орлов» для получения живой аттенуированной вакцины /

И. Н. Лаврентьева, Л.А. Яковлева, В.В. Семериков // Пермский медицинский журнал. – 2005. - № 1. – С. 78 – 81.

18. Актуальные вопросы и перспективы специфической профилактики краснухи в России/ И.Н. Лаврентьева, Л.П. Сухобаевская, А.Б. Жебрун // Теоретические и практические аспекты элиминации кори: сб. научных трудов к 145-летию со дня рождения Г.Н. Габричевского. – М., 2005. – С. 61 – 65.

19. Обезьяны макака-резус как модель для доклинического изучения вакцинных штаммов вируса краснухи/ И.Н. Лаврентьева, А.Б. Жебрун, В.З. Агрба, Л.А. Яковлева // Перспективные направления использования лабораторных приматов в медико-биологических исследованиях: Матер. Всерос. науч. конф. – Сочи-Адлер, 2006. – С. 38 – 43.

20. Доклиническое изучение вариантов вакцинного штамма вируса краснухи «Орлов» / И.Н. Лаврентьева, Л.П. Сухобаевская, В.З. Агрба, Л.А. Яковлева, А.В. Семенов // Биопрепараты. – 2006. - № 1. – С. 19 – 22.

21. Laboratoire des infections infantiles virales / I. Lavrenieva, L. Soukhobaevskaya, A. Antipova / Rapport D’Active des departments de recherché en 2006 – 2007. – Institut Pasteur de Saint-Peterbourg., 2007. – P. 43 – 47.

22. Доклиническое изучение вакцинных штаммов вируса краснухи / И.Н. Лаврентьева, Л.П. Сухобаевская, В.З. Агрба, Л.А. Яковлева, А. Б. Жебрун // Итоги и перспективы обеспечения эпидемического благополучия населения российской Федерации: материалы IX съезда Всерос. научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. – М., Санэпидемиа., 2007. – Т.2. – С. 151 – 152.

23. Влияние иммунизации против краснухи на формирование специфических и неспецифических факторов иммунитета в опыте на обезьянах макака-резус / И.Н. Лаврентьева, А.Б.Жебрун, Л.П. Сухобаевская, В.З. Агрба, Д.Д. Карал-Оглы // Фундаментальные и прикладные проблемы медицины и биологии в опытах на обезьянах: Материалы междунар. научн. конф. - Сочи – Адлер, 2007. – С.86 – 94.

24. Генетическая характеристика вируса краснухи в период вакцинопрофилактики/ И. Н. Лаврентьева, В. В. Семериков// в кн.: Инфекционная заболеваемость в Северо- Западном федеральном округе России. Закономерности и особенности эпидемического процесса в современный период. – СПб., 2007. – С. 33 – 37.

25. Молекулярно-биологические механизмы аттенуации вируса краснухи / И.Н. Лаврентьева, А.В. Марков // Вестник Российской военно-медицинской академии. – 2008. - №2. – С. 112 – 113.

26. Краснуха в России: изменчивость возбудителя в период вакцинопрофилактики инфекции /И.Н. Лаврентьева, В.В. Cемериков, А.Б. Жебрун, И.В. Фельдблюм, А.В. Марков // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. – 2008. - № 3. – С. 26 – 31.

27. Молекулярно-биологические свойства аттенуированных штаммов вируса краснухи / И.Н. Лаврентьева // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. – 2008. - № 4. – С. 55 – 59

28. Поствакцинальный иммунитет при иммунизации против краснухи штаммом Орлов-Д» в эксперименте / И.Н. Лаврентьева, В.В. Семериков, В.З. Агрба, Л.П. Сухобаевская, А.Ю. Антипова // Пермский медицинский журнал. – Пермь. - 2008. - № 4. – С. 68 – 75.

29. Генетические маркеры аттенуации вируса краснухи / И.Н. Лаврентьева, А.В. Марков, Л.П. Сухобаевская, А.Ю. Антипова // Идеи Пастера в борьбе с инфекциями: Матер. IV-ой Междунар. конф. Института им. Пастера. – СПб., 2008. – С. 17.

30. Генетическая стабильность вируса краснухи при адаптации к новой системе клеток / И.Н. Лаврентьева, А.В. Марков, Л.П. Сухобаевская, А.М. Мартынова // Идеи Пастера в борьбе с инфекциями: Матер. IV-ой Международ. конф. Института им. Пастера. – СПб., 2008. – С. 18.

31. Изменчивость возбудителя краснухи в период вакцинопрофилактики краснушной инфекции / В.В. Семериков, И.Н. Лаврентьева, А.В. Марков // Создание и перспективы применения медицинских иммунобиологических препаратов: Материалы Всеросс. науч.-практ. Конф., посвященной 110-летию филиала ФГУП «НПО Микроген» «Пермское научно-производственное объединение «Биомед». – Пермь, 2008. – С. 46 – 48.


Автор выражает глубокую признательность научному консультанту, доктору медицинских наук, члену-корреспонденту РАМН, профессору А.Б. Жебруну за идею настоящей работы. Глубокую благодарность рецензентам – доктору медицинских наук, профессору С.Л. Мукомолову, доктору медицинских наук А.Ж. Василенко. Сердечная благодарность - руководителю лаборатории клеточных культур ГУ ИПВЭ им. М. П. Чумакова, доктору медицинских наук, профессору Л.Л. Мироновой. Особую признательность – директору НИИМП, академику РАМН Б.А. Лапину и сотрудникам института: доктору медицинских наук, профессору В. З. Агрба, доктору медицинских наук, профессору Л.А. Яковлевой. Автор благодарит также зав. кафедрой эпидемиологии Пермской медицинской академии им. Вагнера, доктора медицинских наук, профессора И. В. Фельдблюм, главного эпидемиолога-эксперта ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Пермском крае», доктора медицинских наук В.В. Семерикова; заместителя директора по инновационным проектам Санкт-Петербургского диагностического центра ООО НПФ «Хеликс», А.В.Маркова, заместителя главного врача клиники ФГУН НИИДИ ФМБА, кандидата биологических наук А. В. Семенова. Особая благодарность – сотрудникам лаборатории детских вирусных инфекций ФГУН «НИИЭМ имени Пастера» Роспотребнадзора.


СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ


BHK-21 – перевиваемая культура клеток почки сирийский хомяка

С – цитозин

G – гуанин

L – 41 – перевиваемая культура клеток костного мозга человека, больного лейкемией

RK-13 – перевиваемая культура клеток почки кролика

Vero - перевиваемая культура клеток почки зеленой мартышки

T – тимин

АГ – антиген

АТ - антитело

ВОЗ – Всемирная организация здравоохранения

ВСЖ – вируссодержащая жидкость

ВБН – вирус болезни Ньюкасла

ВВС – вирус везикулярного стоматита

ВЭМ – вирус энцефаломиокардита мышей

ГИСК – Государственный институт стандартизации и контроля

ГКМВ – Государственная коллекция музейных вирусов

ДКЛЧ – диплоидные клетки фибробластов легкого эмбриона человека

ДКПЧ – диплоидные клетки фибробластов почки эмбриона человека

ИНФ – интерферон

МИ – множественность инфицирования

МИБП – медицинские иммунобиологические препараты

МУ – методические указания

НИИЭМ – научно исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии

НИИМП – научно-исследовательский институт медицинской приматологии

ОВС – объединенный вирусный сбор

П.о – пара оснований

ППК – первично-трипсинизированная культура клеток почки кролика

ПЦР – полимеразная цепная реакция

РТГА – реакция торможения гемагглютинации

СПЭВ – перевиваемая культура клеток почки свиньи

ТЦД₅₀ – пятидесятипроцентная тканевая цитопатогенная доза

ЦНС – центральная нервная система

ЦПД – цитопатогенное действие