Экспериментальная и клиническая фармакология лекарственных препаратов на основе диоксидина и доксициклина и их эффективность при мастите у коров 16.
| Вид материала | Автореферат |
- Клиническая эффективность и фармакоэпидемиология лекарственных средств у детей с аллергическим, 462.25kb.
- «Экспериментальная и клиническая фармакология» журнал к сведению, 84.61kb.
- Комплексный антибактериальный препарат на основе доксициклина и линкомицина для лечения, 374.02kb.
- Фундаментальные аспекты создания на основе минерала бишофит магний-содержащих лекарственных, 1046.55kb.
- Антиметастатическая активность препаратов природного происхождения 14. 00. 25 фармакология,, 1023.15kb.
- Экспериментальная фармакотерапия повреждений почек растительными лекарственными средствами, 911.7kb.
- Сравнительная эффективность респираторных фторхинолонов у пациентов с внебольничной, 446.84kb.
- Литература, 23.14kb.
- Оценка фармакодинамики комбинаций препаратов, применяемых для тотальной внутривенной, 395.75kb.
- Учебное пособие для медицинских вузов / сост. С. В. Мальчикова. Киров: Кировская государственная, 1247.91kb.
На правах рукописи
КЛИМОВ Николай Тимофеевич
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ И КЛИНИЧЕСКАЯ ФАРМАКОЛОГИЯ
ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ НА ОСНОВЕ ДИОКСИДИНА И ДОКСИЦИКЛИНА И ИХ ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРИ МАСТИТЕ
У КОРОВ
16.00.04 – ветеринарная фармакология с токсикологией
16.00.07 – ветеринарное акушерство и биотехника
репродукции животных
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени
доктора ветеринарных наук
Воронеж – 2009
Работа выполнена в отделе патологии воспроизводства и молочной железы и лаборатории экспериментальной фармакологии ГНУ Всероссийский НИВИ патологии, фармакологии и терапии Россельхозакадемии
Научные консультанты: доктор ветеринарных наук, профессор
Шабунин Сергей Викторович
заслуженный деятель науки РФ,
доктор ветеринарных наук, профессор
-
Париков Виталий Александрович
Официальные оппоненты:
заслуженный деятель науки РФ
доктор ветеринарных наук, профессор
Аргунов Муаед Нуртдинович
заслуженный деятель науки РФ
доктор ветеринарных наук, профессор
Никитин Виктор Яковлевич
доктор ветеринарных наук, профессор
Турченко Алексей Николаевич
Ведущая организация: ФГОУ ВПО Саратовский государственный аграрный университет
Защита состоится «___» декабря 2009 г на заседании диссертационного совета ДМ 006.004.01 во Всероссийском научно-исследовательском ветеринарном институте патологи, фармакологии и терапии Россельхозакадемии по адресу: 394087, г. Воронеж, ул. Ломоносова, д. 114-б.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.
Автореферат разослан «___» ноября 2009г.
Ученый секретарь
диссертационного совета,
кандидат биологических наук Т.И. Ермакова
- ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
1.1. Актуальность темы. Воспаление молочной железы – мастит у коров имеет широкое распространение и наносит огромный экономический ущерб за счет снижения удоев, санитарных и технологических качеств молока, преждевременной выбраковки высокопродуктивных коров, заболеваемости новорожденных телят, затрат на лечение больных животных (Д.Д. Логвинов с соавт., 1970; Г.В. Зверева, 1971; В.И. Мутовин, 1974; Н.К. Оксамитный, 1982; В.И. Беляев с соавт., 1983; И.С. Загаевский, 1986; А.П. Солдатов, 1986; М.Г. Миролюбов, 1988; В.Я. Никитин, 1988; В.А. Париков, 1990; А.Я. Батраков, 1991; В.И. Слободяник, 1994; Г.Н. Кузьмин, 1995; В.В. Подберезный, 1995; Л.К. Попов, 1998; Н.Г. Гасанов, 1999; Л.Д. Демидова, 2002; В.П. Родин, 2002).
По данным Национального Совета по маститу США общий ущерб, наносимый этой болезнью, складывается из снижения молочной продуктивности – 70%, преждевременной выбраковки коров – 14%, ухудшения качества молока – 8%, увеличения расходов на лечение – 8%.
Наибольшую хозяйственно-экономическую проблему представляет субклинический мастит, встречающийся в 2-7 раз чаще, чем клинически выраженный. Он может регистрироваться у 20-80% лактирующих коров (В.А. Париков с соавт., 2000; В.К. Копытин с соавт., 2002).
Отечественной наукой и практикой достигнуты определенные успехи в решении проблемы мастита у животных. Разработаны и внедряются в производство методы ранней диагностики, профилактики и лечения данного заболевания путем применения различных антимикробных препаратов и физиотерапевтических средств (В.А. Париков, 1990; В.И. Слободяник, 1994; В.П. Иноземцев 1997).
Вместе с тем, несмотря на имеющиеся достижения, проблема мастита продолжает оставаться одной из актуальных для ветеринарной науки и практики. Длительное и повсеместное, а порой бессистемное применение химиотерапевтических средств, привело к снижению эффективности лечения данного заболевания из-за образования лекарственно устойчивых штаммов микроорганизмов, вызывающих развитие воспалительного процесса (В.М. Ивченко, 1988; В.И. Слободяник с соавт., 1994; Г.Н. Кузьмин, 1995; А.И. Ивашура с соавт., 1998; В.Л. Юрков с соавт., 2001; В.Ю. Коптев с соавт., 2002 и др.).
В то же время, в борьбе с маститом практически нельзя обойтись без применения антимикробных средств, поскольку основными возбудителями заболевания являются различные патогенные микроорганизмы, к тому же часто обладающие полирезистентностью к большинству антибиотиков. Поэтому в решении проблемы профилактики и лечения этого заболевания в современных условиях разведения молочного скота необходимы дальнейшие исследования по изучению этиологической структуры мастита, выявлению связей между степенью микробной обсемененности молочной железы и выраженностью воспалительного процесса, разработке новых более эффективных антибактериальных препаратов и их фармако - токсикологической оценке в соответствии с современными требованиями. Крайне необходимо формирование новых подходов к использованию антимикробных средств в зависимости от степени пораженности молочных стад маститом и новых принципов антибактериальной терапии, включая выбор оптимальных доз, продолжительности курса лечения.
1.2. Цель и задачи исследований. Целью данной работы является изучение и разработка новых средств и способов фармакотерапии и фармакопрофилактики мастита у коров. Для её достижения были поставлены следующие задачи:
1. Изучить распространение, формы проявления и этиологическую структуру мастита у коров в хозяйствах различных регионов России.
2. Установить показатели бактерицидности и микробной обсемененности кожи вымени у клинически здоровых коров и при заболевании субклиническим маститом.
3. Выявить эффективность использования средств неспецифической патогенетической терапии при субклиническом мастите у коров.
4. Обосновать состав и разработать препараты для лечения мастита у коров в период лактации на основе диоксидина, изучить их фармако-токсикологические свойства и терапевтическую эффективность.
5. Разработать препараты на основе доксициклина для профилактики мастита у коров и дать им фармако-токсикологическую оценку.
6. Разработать новые принципы оздоровления молочных стад от мастита в зависимости от уровня заболеваемости коров.
1.3. Научная новизна. Выявлено значение технологических факторов и патогенной микрофлоры в развитии воспалительного процесса в молочной железе при разной степени пораженности коров маститом. Показано, что преобладающим возбудителем заболевания является агалактийный стрептококк и золотистый стафилококк (в монокультуре и в ассоциациях), а также энтерококки. Впервые определена взаимосвязь микробной обсемененности молочной железы и заболеваемости коров маститом с бактерицидными свойствами кожи вымени. Созданы комплексные антибактериальные препараты на основе диоксидина – диофур, диеномаст и линдомаст для лечения коров, больных маститом, в период лактации и комплексные препарты пролонгированного действия на основе доксициклина – доксимаст и неодоксимаст для профилактики данного заболевания. Показано синергидное антибактериальное действие компонентов разработанных препаратов, дана их фармако-токсикологическая и клиническая оценка. Определена перспективность использования созданных препаратов в ветеринарной практике.
Определена эффективность терапии коров, больных субклиническим маститом, общестимулирующими патогенетическими средствами.
Научная новизна подтверждена тремя патентами на изобретения: (№ 2048805, №2350332 и №2367433).
1.4. Практическая значимость и реализация результатов исследований. На основании результатов исследований разработаны и предложены производству эффективные антибактериальные препараты (диофур, диеномаст, линдомаст) и способ лечения мастита у коров в период лактации, обеспечивающие выздоровление соответственно 93,6 и 83,7% животных, а также для его профилактики (доксимаст, неодоксимаст), позволяющие предупредить развитие мастита у 92,4 - 97,0 % коров.
Материалы исследований вошли в «Комплексную экологически безопасную систему ветеринарной защиты здоровья животных», - М., 2000; «Методические рекомендации по диагностике, терапии и профилактике мастита у коров», одобренные бюро Отделения ветеринарной медицины РАСХН 1 июня 2005г (протокол №3), а также в нормативную документацию и наставление по применению диофура в ветеринарии, утвержденного 1 июня 1999г (регистрационный номер ПВР -2-1.9/00081) и Инструкцию по применению диеномаста для лечения мастита у коров, утвержденную 18 июня 2007г (регистрационный номер ПВР-2-0.2/01043).
1.5. Апробация работы. Основные положения диссертации представлены и одобрены на: VIII Всероссийском симпозиуме по машинному доению сельскохозяйственных животных (Оренбург, 1995); Международной научно-практической конференции, посвященной 35-летию организации ВНИВИПФиТ «Актуальные проблемы болезней органов размножения и молочной железы у животных» (Воронеж, 2005); Международной научно-производственной конференции, посвящённой 100-летию со дня рождения проф. А.А. Авророва «Актуальные проблемы ветеринарной патологии и морфологии животных» (Воронеж, 2006); Республиканской научно-производственной конференции посвященной 90-летию со дня рождения И.Ф. Заянчковского «Актуальные проблемы физиологии и патологии размножения животных» (Уфа, 2007); 1-ом съезде ветеринарных фармакологов России «Достижения ветеринарной науки – на вооружение практическому животноводству» (Воронеж, 2007); научно-практической конференции «Проблемы повышения продуктивного долголетия животных» (Курган, 2007); XIV международном симпозиуме по машинному доению сельскохозяйственных животных (Углич, 2008); Международной научно-практической конференции, посвящённой 100-летию со дня рождения проф. В.А. Акатова «Современные проблемы ветеринарного обеспечения репродуктивного здоровья животных» (Воронеж, 2009); Международной научно-практической конференции, посвященной 35-летию образования факультета ветеринарной медицины Кубанского государственного аграрного университета «Достижения современной ветеринарной науки и практики в области охраны здоровья животных» (Краснодар, 2009).
1.6. Публикации. Основные научные результаты, включенные в диссертацию, опубликованы в 35 печатных работах, в том числе в 10 статьях ведущих научных журналов, рекомендованных ВАК Минобразования РФ, 2 монографиях и в 3 патентах.
1.7. Основные положения, выносимые на защиту:
- этиологическая структура мастита у коров в зависимости от уровня их заболеваемости;
- бактерицидность и микробная обсемененность кожи вымени клинически здоровых лактирующих коров и при заболевании их маститом;
- фармако-токсикологическая и клиническая характеристика комплексных антимикробных препаратов на основе диоксидина для терапии мастита у коров в период лактации;
- фармако-токсикологическая оценка и клиническая характеристика антибактериальных препаратов на основе доксициклина для профилактики мастита у коров;
- этапная фармакотерапия и фармакопрофилактика в комплексной системе оздоровления молочных стад от мастита.
Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на 271 страницах текста в компьютерном исполнении, включает обзор литературы, материал и методы исследований, результаты собственных исследований и их анализ, выводы, практические предложения, список литературы, содержащий 531 источник, в том числе 169 зарубежных авторов, и приложения. Диссертация содержит 69 таблиц и 18 рисунков.
- МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
Научные исследования выполнены в 1990-2008 гг. в соответствии с планом научно-исследовательских работ Всероссийского НИВИ патологии, фармакологии и терапии по заданиям: 04.03 (номер гос. регистрации 01.9.40.00.75.89), 04.03 Д (номер гос. регистрации 01.9.90001257), 04.01.03 (номер гос. регистрации 01.200.117018), 08.04. (номер гос. регистрации 15070.36660226906).
Для изучения степени распространения и форм проявления мастита у коров проведено клиническое обследование 7355 коров 15 хозяйств Белгородской, Воронежской, Липецкой и Орловской областей. Диагноз на заболевание устанавливали в соответствии с «Наставлением по диагностике, терапии и профилактике мастита у коров» (М., 2000).
Этиологическая структура мастита у коров изучалась путём бактериологического исследования секрета из 112 пораженных маститом долей вымени в соответствии с «Методическими указаниями по бактериологическому исследованию молока и секрета вымени коров» (М., 1983).
Изучение бактерицидности и микробной обсеменённости кожи вымени у здоровых и больных маститом коров во взаимосвязи с показателями титра лизоцима М и количества соматических клеток в молоке и секрете выполнено на 30 коровах. Бактерицидные свойства кожи вымени определяли по методике Н.Н. Клемпарской и О.Г. Алексеевой (1959) в модификации А.А. Гинзбург (1976), титр лизоцима М по В.И. Мутовину (1974), подсчёт соматических клеток на приборе «Фоссоматик».
Разработка рационального метода патогенетической терапии у коров с использованием ПДЭ, АСД-2Ф и витаминных препаратов проведена на 244 животных. Использовали клинические, бактериологические и иммунологические методы. Определение суммарных иммуноглобулинов осуществляли цинк-сульфатным методом (М.А. Воловенко, 1975).
Разработка новых антибактериальных препаратов на основе диоксидина и доксициклина осуществлялась на основе определения антимикробной активности отдельных компонентов и различных сочетаний, определения их фармакодинамики и фармакокинетики.
Антимикробную активность изучали методом серийных разведений (В.И. Антонов, 1981) и дисков в отношении референтных и полевых штаммов микроорганизмов – основных возбудителей мастита.
Изучение острой и хронической токсичности препаратов проведено общепринятыми методами (М.П. Беленький, 1963; И.В. Саноцкий, 1970; О.Н. Елизарова, 1971) на половозрелых нелинейных разнополых белых мышах с массой тела 20-22 г (n=660), белых крысах с массой тела 110-220 г (n=800).
Общетоксическое действие препаратов оценивали по динамике массы тела животных при взвешивании 1 раз в неделю, гематологическим показателям и состоянию системы гомеостаза – по окончании курса инъекций и через неделю восстановительного периода.
Гематологические исследования проведены по общепринятым методам, биохимические – в соответствии с «Методическими указаниями по применению унифицированных биохимических методов исследований крови, мочи и молока в ветеринарных лабораториях» (М., 1981).
Раздражающее действие препаратов на кожу изучали на кроликах методом кожных и конъюнктивальных проб, а их аллергенные свойства определяли с помощью кожно-провокационной пробы (О.Л. Алексеева, Л.А. Дуева, 1978).
Влияние препаратов, разработанных на основе диоксидина, на молочную железу лактирующих коров изучено на 9 клинически здоровых коровах на 3-5 месяце лактации.
Исследования по установлению времени нахождения компонентов препаратов в секрете молочной железы, крови и моче проведены на 18 лактирующих коровах. В секрете молочной железы, крови и моче определеляли содержание диоксидина, фурациллина, гентамицина сульфата и линкомицина гидрохлорида, входящих в состав препаратов, через 12; 24; 36; 48; 60; 72 и 96, 120 часов после их введения. Определение содержания гентамицина сульфата и линкомицина гидрохлорида проводили микробиологическими методами диффузии в агар, а концентрацию диоксидина и фурацилина – хроматографически. При проведении исследований руководствовались «Методическими указаниями по определению остаточных количеств антибиотиков в продуктах животноводства» № 3049-84 от 29.06.84.
Клинико-фармакологическая оценка разработанных препаратов и их компонентов проведена на 138 коровах, больных субклиническим маститом, и 117 коровах, больных клинически выраженным катаральным маститом на базе ЗАО «Манино Воронежской, ЗАО «Должанское» и ОАО «Роговатовская Нива» Белгородской, СПК «Здоровецкий» и АОНП «Успенское» Орловской областей.
Препараты вводили внутрицистернально по 10 мл один раз в сутки в течение 3-4 дней. Оценка эффективности лечения осуществлялась путем клинического обследования молочной железы, количественного определения соматических клеток в молоке методом Прескотта-Брида, а также с использованием счетчика соматических клеток DCC фирмы ДеЛаваль и постановки пробы отстаивания.
Терапевтическая эффективность диофура определена на 72 коровах, больных субклиническим (n=36) и клинически выраженным катаральным маститом (n=36) в сравнении с мастисаном А и 1% диоксидином.
Определение эффективности применения диеномаста и его компонентов для терапии субклинического и клинически выраженного катарального мастита проведено на 81 больных коровах.
Изучение терапевтической эффективности линдомаста и его компонентов проведено на 102 больных субклиническим и клинически выраженным катаральным маститом.
Производственная оценка эффективности диофура, диеномаста и линдомаста проведена на 642 больных маститом коровах (199 - субклиническим, 171- клиническим выраженным катаральным, 143 - гнойно-катаральным и 129 - серозным).
Изучение эффективности применения доксимаста для профилактики мастита в послеродовый период проведено в сравнении с препаратом септогель на 370 коровах переводимых в сухостой. Препараты вводили внутрицистернально однократно после последнего доения.
Изучение эффективности применения неодоксимаста для профилактики мастита у коров после отела проведено на 80 коровах, разделенных по принципу аналогов на 4 группы. Животным первой группы (n=20) после последнего доения однократно внутрицистернально вводили неодоксимаст в дозе 10 мл, второй (n=20) – септогель, третьей (n=20) – орбенин ДС согласно наставлений по их применению, коровы четвертой группы (n=20) – служили в качестве отрицательного контроля и им препарат не вводили.
Профилактическую эффективность доксимаста и неодоксимаста определяли в первый день после отела по результатам исследования секрета молочной железы с 2% раствором мастидина и пробой отстаивания.
Гематологические, биохимические, иммунобиологические, бактериологические, фармакологические и токсикологические исследования проведены совместно с сотрудниками других подразделений института, за что автор выражает им свою признательность и благодарность.
Полученный цифровой материал подвергали математической обработке с помощью программы ExStat на ЭВМ РС АМD K7-800 Athlon.
Экономическую эффективность лечебно-профилактических мероприятий оценивали по «Методике определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий» (М., МГАВМиБ им. К.И. Скрябина, 1997).
3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Распространение и формы проявления мастита у коров в хозяйствах с различной технологией их содержания и использования
Установлено, что заболеваемость коров маститом в хозяйствах различная и колеблется от 7,1 до 60,3%. В целом из 7355 обследованных коров мастит диагностирован у 2598 животных, что составляет 34,9%. На долю субклинического мастита приходится 79,1% и на долю клинически выраженного – 20,9%.
При этом следует отметить, что в хозяйствах с уровнем молочной продуктивности свыше 6500 кг заболеваемость маститом наименьшая и составляет в среднем 15,26%, менее 4500 кг − наибольшая - 46,78%, от 4500 кг до 6500 кг молока - 35,93%. То есть, чем ниже заболеваемость коров маститом, тем выше их молочная продуктивность.
Заболеваемость маститом коров чёрно-пестрой породы составила 32,51%, а симментальской – 41,23%. При этом заболеваемость коров черно-пёстрой породы с уровнем продуктивности 6000 кг и выше составила 20,3%, а 4600 кг и менее – 53,05%, а коров симментальской породы с продуктивностью более 5000 кг − 35,80%, 4300 кг и менее − 43,0%.
Нами также установлено, что при привязном содержании и доении коров на линейной доильной установке заболеваемость маститом составляет 37,3%, при беспривязном содержании и доении в доильных залах, оснащенных в основном импортной доильной техникой, – 30,3%. При грубых нарушениях в технологии машинного доения заболеваемость животных маститом возрастает до 52,5%, а при соблюдении технологии доения составляет менее 10,0%.
По уровню заболеваемости коров сельхозпредприятия (молочные фермы) можно разделить на три группы: первая − заболеваемость превышает 30%, вторая – составляет 10-30% и третья − менее 10%.
Наибольшая заболеваемость коров маститом (более 30%) отмечена в период лактации и при запуске. Особенно это выражено в тех хозяйствах, где недостаточно внимания уделяется диагностике и профилактике этого заболевания, а также соблюдению технологии доения независимо от использованных доильных систем (запоздалое или преждевременное подключение доильного аппарата, несвоевременное снятие доильных стаканов с вымени, использование изношенной сосковой резины). В то же время при полном соблюдении технологии машинного доения и отсутствии погрешностей в работе доильной техники уровень заболеваемости маститом составляет менее 10%, при времени доения одной коровы не более 5 минут.
Проведенными исследованиями установлено, что при отсутствии антисептической обработки сосков вымени коров после доения заболеваемость маститом в среднем составила 35,2%, а при её наличии - 22,6%. Это свидетельствует как о необходимости проведения данной процедуры, так существенной роли микрофлоры в возникновении и развитии воспалительного процесса в молочной железе.
Также следует отметить, что даже при соблюдении технологии доения коров на самом современном доильном оборудовании, заболеваемость маститом при ежемесячном обследовании составляет 7,1-9,3%, что также указывает на ведущую роль микрофлоры окружающей среды в этиологии мастита.