Экспериментальная и клиническая фармакология лекарственных препаратов на основе диоксидина и доксициклина и их эффективность при мастите у коров 16.
| Вид материала | Автореферат |
- Клиническая эффективность и фармакоэпидемиология лекарственных средств у детей с аллергическим, 462.25kb.
- «Экспериментальная и клиническая фармакология» журнал к сведению, 84.61kb.
- Комплексный антибактериальный препарат на основе доксициклина и линкомицина для лечения, 374.02kb.
- Фундаментальные аспекты создания на основе минерала бишофит магний-содержащих лекарственных, 1046.55kb.
- Антиметастатическая активность препаратов природного происхождения 14. 00. 25 фармакология,, 1023.15kb.
- Экспериментальная фармакотерапия повреждений почек растительными лекарственными средствами, 911.7kb.
- Сравнительная эффективность респираторных фторхинолонов у пациентов с внебольничной, 446.84kb.
- Литература, 23.14kb.
- Оценка фармакодинамики комбинаций препаратов, применяемых для тотальной внутривенной, 395.75kb.
- Учебное пособие для медицинских вузов / сост. С. В. Мальчикова. Киров: Кировская государственная, 1247.91kb.
3.5. Разработка новых антимикробных лекарственных препаратов для лечения больных маститом коров и их фармако-токсикологическая и клиническая оценка
На основе химиотерапевтического средства диоксидин, проявляющего антимикробную активность в отношении грамотрицательных и грамположительных микроорганизмов, нами подобрано три комбинации антимикробных средств, обладающих синергидным действием: диоксидин и фурацилин в соотношении 1:0,2; диоксидин и гентамицина сульфата − 1:2, диоксидин и линкомицина гидрохлорид − 1:4. На их основе были разработаны препараты для лечения мастита у коров в период лактации.
Диофур, включающий в себя следующие компоненты, масс.% диоксидин − 1,0; фурациллин − 0,2; вода дистиллированная до 100,0
Диеномаст, комплексный препарат, содержащий следующие компоненты, масс.%: диоксидин − 1,0; гентамицина сульфат − 2,0; воск – 5,0; масло вазелиновое до 100,0.
Линдомаст, комплексный препарат, содержащий следующие компоненты, масс.%: диоксидин − 1,0; линкомицина гидрохлорид − 3,0; моноглицерид мягкий − 3,0; моноглицерид дистиллированный − 3,0; масло вазелиновое до 100,0.
3.5.1. Антимикробная активность диофура, диеномаста и линдомаста
Определение анимикробной активности препаратов диофур, диеномаст и линдомаст проведено совместно с сотрудниками отдела микробиологии, вирусологии и иммунологии и лаборатории диагностики инфекционных и инвазионных заболеваний института.
Результаты исследований, приведенных в таблицах 6, 7, 8, свидетельствуют, что диофур обладает широким спектром и высоким антимикробным действием в отношении основных возбудителей мастита в концентрации 0,98-7,8 мкг/мл, что превышает антимикробную активность диоксидина и фурациллина в 2-8 раз. Данная комбинация подавляет рост кокковой микрофлоры в концентрации 3,9-7,8 мкг/мл, а грамотрицательной – 0,98 мкг/мл (табл. 6).
Минимальная ингибирующая концентрация (МИК) диеномаста составляет 0,39-3,1 мкг/мл, что превышает антимикробную активность диоксидина и гентамицина сульфата в 2-32 раза, диеномаст ингибирует рост кокковой микрофлоры в концентрации 0,39-0,98 мкг/мл, а грамотрицательной – 0,39-3,1 мкг/мл (табл. 7).
Линдомаст подавляет рост исследованной микрофлоры в концентрации 3,1-25,0 мкг/мл (табл. 8), что превышает антимикробную активность диоксидина и линкомицина в отдельности в 2-16 раз.
Таблица 6
Антимикробная активность диоксидина, фурациллина и диофура
в отношении основных возбудителей мастита
| Штаммы микроорганизмов | МИК, мкг/мл | ||
| Диоксидин | Фурацилин | Диофур | |
| Staph. aureus ВМ-57 | 15,6 | 31,25 | 7,8 |
| Staph. aureus-589 | 7,8 | 31,25 | 3,9 |
| Str. agalactiae-2646 | 15,6 | 31,25 | 7,8 |
| Str. agalactiae-587 | 15,6 | 31,25 | 7,8 |
| Ent. faecalis-2890 | 15,6 | 62,5 | 7,8 |
| Ent. faecalis-2894 | 15,6 | 31,25 | 7,8 |
| E. сoli-1640 | 7,8 | 15,63 | 0,98 |
| E. сoli-1649 | 7,8 | 7,8 | 0,98 |
Таблица 7
Антимикробная активность диоксидина, гентамицина и диеномаста
в отношении основных возбудителей мастита
| Штаммы микроорганизмов | МИК, мкг/мл | ||
| Диоксидин | Гентамицина | Диеномаст | |
| Staph. aureus-209 Р | 25,0 | 1,56 | 0,39 |
| Staph. aureus-589 | 25,0 | 3,1 | 0,78 |
| Str. agalactiae-2646 | 12,5 | 3,1 | 0,78 |
| Str. agalactiae-587 | 25,0 | 1,56 | 0,39 |
| Ent. faecalis-2890 | 25,0 | 3,1 | 0,78 |
| Ent. faecalis-2894 | 12,5 | 6,25 | 0,78 |
| Ent. faесium-2899 | 50.0 | 3,1 | 0,39 |
| E. сoli-0138 | 50,0 | 0,78 | 0,39 |
| E. сoli-866 | 12,5 | 6,25 | 3,1 |
| E. сoli-643 | 50,0 | 0,78 | 0,39 |
Таблица 8
Антимикробная активность диоксидина, линкомицина и линдомаста
в отношении основных возбудителей мастита
| Штаммы микроорганизмов | МИК, мкг/мл | ||
| Диоксидин | Линкомицин | Линдомаст | |
| Staph. aureus-209 Р | 25,0 | 12,5 | 6,3 |
| Staph. aureus-589 | 25,0 | 6,3 | 3,1 |
| Str. agalactiae-586 | 12,5 | 12,5 | 6,3 |
| Str. agalactiae-587 | 25,0 | 25,0 | 3,1 |
| Ent. faecalis-640 | 50,0 | 100,0 | 25,0 |
| Ent. faecalis-2894 | 25,0 | 50,0 | 6,3 |
| Ent. faесium-2899 | 50,0 | 50,0 | 32,5 |
| E. сoli-644 | 50,0 | 100,0 | 25,0 |
| E. сoli-643 | 50,0 | 100,0 | 25,0 |
Таким образом, разработанные новые антимикробные препараты для лечения мастита у коров диофур, диеномаст и линдомаст обладают высокой антимикробной активностью в отношении грамположительной и грамотрицательной микрофлоры, изолируемой из секрета молочной железы больных маститом коров.
3.5.2. Изучение параметров токсичности препаратов диофур, диеномаст и линдомаст
Определение параметров токсичности препаратов диофур, диеномаст и линдомаст в остром опыте выполнено совместно с сотрудниками лаборатории экспериментальной фармакологии института.
3.5.2.1. Острая токсичность препаратов
Пероральный способ введения. Препараты вводили однократно внутрь в дозах от 3500 до 30000 мг/кг веса в объеме для белых мышей - 0,6 мл, для белых крыс - 6 мл (диофур – 6000,0-30000,0 мг/кг, диеномаст – 5000,0-20000,0 мг/кг, линдомаст – 4500,0-22500,0 мг/кг массы тела). Дозы являются предельно допустимыми по объему для перорального введения.
При внутрижелудочном введении препаратов диофур, диеномаст и линдомаст в изученных дозах за весь период наблюдения (14 дней) гибели животных не отмечено.
Подкожный способ введения. При подкожном введении данные препараты вводили однократно в дозах от 10 до 50 г/кг массы тела в объеме 1,0 мл на мышь и 5,0 мл на крысу.
Полученные данные позволили определить параметры острой токсичности диофура, диеномаста и линдомаста при подкожном введении (табл. 9).
Таблица 9
Параметры острой токсичности диофура, диеномаста и линдомаста для
лабораторных животных при однократном подкожном введении (мг/кг)
| Вид животных | Параметры токсичности | SLD50 | ||||
| МПД | LD16 | LD50 | LD84 | LD100 | ||
| Диофур | ||||||
| Белые мыши | 20000,0 | 46645,6 | 61462,2 (54900÷ 68100) | 77517,0 | 85234,8 | ±3280,4 |
| Белые крысы | 21000,0 | 38848,9 | 61330,6 (53600÷69100) | 85459,4 | 97112,0 | ±3866,0 |
| Диеномаст | ||||||
| Белые мыши | 4500 | 6166,7 | 11108,3 (9010÷13200) | 16227,2 | 18742,4 | ±1034,5 |
| Белые крысы | 5500 | 8048,4 | 12015,1 (11500÷13500) | 16069,7 | 18075,0 | ±757,1 |
| Линдомаст | ||||||
| Белые мыши | 10500,0 | 11877,0 | 15170,1 (13400÷17000) | 18326,2 | 19938,5 | ±878,0 |
| Белые крысы | 10000,0 | 11118,8 | 14017,5 (12600÷15500) | 16755,0 | 19000,0 | ±702,7 |
Результаты проведенных исследований показывают, что диофур, диеномаст и линдомаст по степени токсичности относятся к IV классу опасности – вещества малоопасные (ГОСТ 12.1.007-76).
3.5.2.2. Хроническая токсичность
Установлено, что многократное подкожное введение диофура в дозе 1227 мг/кг, диеномаста - 240 мг/кг и линдомаста - 280,0 мг/кг (1/50 LD50), а также введение диофура в дозе - 6133 мг/кг, диеномаста - 1202 мг/кг и линдомаста - 1400,0 мг/кг массы тела (1/10 LD50 в остром опыте) не вызывает существенных изменений в клиническом состоянии животных. Поведение, аппетит, частота дыхания у всех животных опытных групп, как в период применения препарата, так и в течение 10 дней после окончания применения оставались в пределах нормы. За период наблюдения у животных опытных групп не было отмечено нарушений функций пищеварения и мочеотделения.
 | Диофур. Скорость роста крыс опытных групп существенно не отличалась от скорости роста крыс контрольной группы. Среднесуточный прирост массы тела за весь период наблюдения (31 день) составил 103,8% при применении препарата в дозе 1227,0 мг/кг и 105,9% при применении препарата в дозе 6133 мг/кг массы тела по сравнению с контролем (рис. 1). |
| Рис. 1. Динамика изменения массы тела белых крыс при многократном подкожном введении диофура (% к исходной массе тела) | |
| Диеномаст. Скорость роста крыс опытных групп существенно не отличалась от скорости роста крыс контрольной группы. Среднесуточный прирост массы тела за весь период наблюдения (31 день) составил 100,7% при применении диеномаста в дозе 240,0 мг/кг и 98,7% при применении препарата в дозе 1202,0 мг/кг массы тела по сравнению с контролем (рис. 2). |  |
| Рис. 2. Динамика изменения массы тела белых крыс при многократном подкожном введении диеномаст (% к исходной массе тела) | |
 | Линдомаст. Скорость роста крыс опытных групп существенно не отличалась от скорости роста крыс контрольной группы. Среднесуточный прирост массы тела за весь период наблюдения (31 день) составил 104,0% при применении препарата в дозе 280,0 мг/кг и 100,5% при применении препарата в дозе 1400 мг/кг массы тела по сравнению с контролем (рис. 3). |
| Рис. 3. Динамика изменения массы тела белых крыс при многократном подкожном введении линдомаста (% к исходной массе тела) |
Таким образом, в течение курса применения диофура, диеномаста и линдомаста подопытные животные не отличались от контрольных животных по приросту массы тела. По окончании эксперимента статистически достоверных различий по массе тела животных контрольных и опытных групп также не обнаружено.
Коэффициенты массы внутренних органов крыс, которым применяли диофур и диеномаст, не отличались существенно от контроля. На 21 день применения линдомаста была отмечена тенденция увеличения коэффициента массы почек на 5,7% (доза 280,0 мг/кг) и на – 7,1% (доза 1400,0 мг/кг). Однако среднее значение этих показателей у крыс опытной группы не выходило за верхние границы нормы для данного вида и возраста животных.
При исследовании крови животных, получавших диофур в дозе 1227,0 и 6133 мг/кг массы тела, диеномаст – в дозе 240,0 и 1202 мг/кг и линдомаст – в дозе 280,0 и 1400,0 мг/кг, не отмечено достоверных изменений в морфологическом составе крови, биохимических показателях по сравнению с показателями в крови животных контрольной группы.
3.5.3. Местно-раздражающее действие лекарственных препаратов
Установлено, что при однократной аппликации на кожные покровы кролика при плотности нанесения от 0,020 до 0,10 г/см2 диофур, диеномаст и линдомаст не вызывают повреждение кожи в виде эритемы или её отёков.
После инстилляции каждого препарата в отдельности не выявлено изменений в клиническом состоянии организма кроликов (температуры тела, частоты пульса и количества дыхательных движений), а также изменения кровенаполнения конъюнктивы, состояния роговицы и век, не отмечено лакримации и выделений.
При визуальной оценке состояния конъюнктивы, роговицы и век опытных животных установлено, что препараты вызывают слабое раздражение конъюнктивы спустя два часа после инстилляции, которое исчезало уже к 3 часу.
Длительное воздействие. Установлено, что длительное накожное применение основы и препаратов не приводит к изменению поведения и аппетита животных. Не отмечено различий температуры тела и живой массы во всех группах кроликов. Толщина складки выстриженной и выбритой кожи животных контрольной и опытной групп на протяжении 20-ти дневного срока наблюдения не отличалась. Накожное нанесение препарата и основы приводило к незначительному увеличению толщины кожной складки в пределах 0,5-1,9% по отношению к контролю и исходному состоянию.
Таким образом, разработанные нами препараты не оказывают раздражающего действия на кожу.
3.5.4. Аллергенные свойства диеномаста и линдомаста
В результате проведенных исследований аллергенных свойств диофура, диеномаста и линдомаста при наружном, конъюнктивальном и парентеральном способе применения установлено, что 20-кратная аппликация диофура, диеномаста и линдомаста не вызывает контактного дерматита, отсутствует реакция конъюнктивы сенсибилизированных и интактных морских свинок на инстилляцию препаратов, следовательно реакция гиперчувствительности к препаратам отсутствует.
3.5.5. Влияние препаратов на организм и молочную железу
лактирующих коров.
Проведенными исследованиями установлено, что интрацистернальное введение препаратов диофур, диеномаст и линдомаст в дозе 10 мл вызывает незначительное, проходящее в течение 48 часов раздражение тканей молочной железы у лактирующих коров, а в дозах 10 и 20 мл не оказывает существенного влияния на биохимические и морфологические показатели крови.
3.5.6. Фармакинетические параметры препаратов
диофур, диеномаст и линдомаст
Опыты проведены на 18 лактирующих коровах симментальской породы в условиях опытной станции ВГАУ. Коровам опытных групп интрацистернально вводили один из препаратов (диофур, диеномаст, линдомаст) по 10 мл пятикратно каждые 24 часа, животным контрольных групп препараты не вводили, они служили контролем.
Диофур. Остаточные количества препарата диофур в молоке определяли на спектрофотометре (СФ-46) при длине волны 475 нм.
Установлено, что активнодействующие компоненты диофура (диоксидин и фурациллин) не накапливаются в секрете молочной железы и выводятся из организма в течение 24 часов.
Диеномаст. Определение содержания диоксидина в молоке, крови и моче проводили спектрофотометрически с использованием калибровочных кривых, а гентамицина сульфата бактериологическим методом с использованием тест-культуры Bacillus pumilus NСТС-8241.
 | Установлено, что через 7 суток после пятикратного интрацистернального введения диеномаста в исследуемых биологических жидкостях (молоке, крови и моче) активнодействующие компоненты препарата диоксидин и гентамицина сульфат не обнаруживаются (рис. 4). Таким образом, молоко в пищевых целях можно использовать на 7 сутки после последнего применения |
| Рис. 4. Содержание диоксидина и гентамицина в молоке коров |
диеномаста при условии полного исчезновения признаков мастита, подтвержденного диагностическими тестами.
Линдомаст. У коров опытной и контрольной групп брали молоко, кровь и мочу для определения остаточных количеств диоксидина и линкомицина гидрохлорида через 1, 3, 5, 7 суток после последнего введения линдомаста.
| Определение содержания диоксидина в молоке, крови и моче проводили спектрофотометрическим методом с использованием калибровочных кривых, содержание линкомицина гидрохлорида − бактериологическим методом с использованием тест-культуры Bacillus subtillis ATCC 6633, после пятикратного введения линдомаста. Установлено, что через 5 суток |  |
| Рис. 5. Содержание диоксидина и линкомицина в молоке коров |
после пятикратного интрацистернального введения линдомаста в исследуемых биологических жидкостях (молоке, крови и моче) активнодействующие вещества диоксидин и линкомицина гидрохлорид не обнаруживаются.
Таким образом, молоко в пищевых целях можно использовать на 5 сутки после последнего применения линдомаста при условии полного исчезновения признаков мастита, подтвержденного диагностическими тестами.