Технология производства вакцин против сальмонеллеза телят и поросят
Контрольная работа - Сельское хозяйство
Другие контрольные работы по предмету Сельское хозяйство
0 С, на агаре Сабуро - при температуре 18-220 С в течение 10 суток.
В посевах из вакцины не должно быть роста посторонних микроорганизмов. При росте вакцинных штаммов сальмонелл на МПА через 24 часа должны образовываться бесцветные, прозрачные, гладкие колонии S-формы, на МПБ через 16-24 часа - равномерное помутнение.
В мазках из посева вакцины, окрашенных по Граму, должны наблюдаться однородные грамотрицательные палочки, среди которых могут встречаться более крупные, удлиненные бактериальные клетки.
Определение количества живых бактерий и доз во флаконе с вакциной. Для проведения испытания используют 5 флаконов выборки с вакциной. Содержимое всех пяти флаконов смешивают. Затем из приготовленной объединенной пробы готовят отдельными пипетками разведения вакцины в пробирках растворителем от 10-1 до 10-9. Для этого в пробирки вносят по 4,5 см3 растворителя. Затем в первую пробирку добавляют 0,5 см3 суспензии вакцины, пятикратно пипетируют, отбирают 0,5 см3 содержимого из первой пробирки (первого разведения) и переносят во вторую пробирку с растворителем и т.д. На каждое разведение используют отдельную стерильную пипетку.
Для испытания применяют 2 разведения вакцины - 10-7 и 10-8. Из каждого разведения проводят посевы по 0,1 см3 на поверхность МППА или агара Хоттингера в 3 чашках, предварительно выдержанных при температуре 36-380 С в течение 72 часов. После инкубирования посевов в термостате при температуре 36-380 С в течение 36-48 часов, подсчитывают количество выросших колоний в чашках по каждому разведению. Полученные показатели суммируют и делят на количество чашек Петри, определяя среднее количество живых бактерий для каждого разведения, содержащихся в 0,1 см3. Затем средние показатели по каждому разведению увеличивают в 10 раз, получая количество живых микробных клеток исследуемой вакцины по одному разведению. После этого выводят среднюю концентрацию живых микробных клеток в 1 см3 вакцины, сложив результаты по двум взятым разведениям и разделив их на 2.
Количество живых бактерий во флаконах с вакциной вместимостью 5,0; 10,0; 20,0 и 50,0 см3 должно быть соответственно не менее 5, 10, 20 и 50 млрд. м.к.
Количество доз вакцины устанавливают путем деления показателя количества живых сальмонелл во флаконе с вакциной на количество живых микробных клеток содержащихся в одной дозе.
Одна иммунизированная доза для свиней соответствует 900-1000 млн. живых бактерий (усредненный показатель 950 млн. живых бактерий).
Пример:
В разведении 10-7 в 3-х чашках Петри выросло 660 колоний, следовательно 660: 3 х 10 х 107 = 22 млрд. живых бактерий в 1 см3 вакцины.
В разведении 10-8 в 3-х чашках Петри выросло 6- колоний, следовательно 60: 3 х 10 х 108 = 20 млрд. живых бактерий в 1 см3.
После этого показатели по каждому разведению суммируют и делят на количество испытуемых разведений, определяя средний показатель концентрации сальмонелл в 1 см3 вакцины: (22 млрд. м.к. + 20 млрд. м.к.): 2 = 21 млрд. микробных клеток. При фасовке во флаконы вакцины по 5 см3 соответственно живых микробных клеток будет содержать: 21 млрд. м.к. х 5 = 105 млрд м.к.
Для определения количества доз во флаконе, содержащем 5 см3 вакцины, количество живых бактерий, т.е. 105 млрд.м.к., делят на 950 млн.м.к. (усредненный показатель одной иммунизированной дозы для свиней) = 110 доз. Количество доз во флаконах при фасовке вакцины по 2,5; 5,0; 10,0 и 25,0 см3 должно быть соответственно не менее 5, 10, 20 и 50 доз.
Определение безвредности вакцины. Для проведения испытания используют 5 флаконов выборки с вакциной. Содержимое всех флаконов объединяют. Объединенную пробу вакцины разводят растворителем до концентрации 4 млн. живых микробных клеток в 1 см3.
Подготовленную вакцину вводят подкожно в область спины 10 белым мышам массой 16-18 г по 0,5 см3 (2 млн. живых микробных клеток) на животное. Наблюдение за животными осуществляют в течение 10 суток.
Вакцина должна быть безвредной для белых мышей. Допускается гибель 2 животных из 10 иммунизированных в течение 10 суток наблюдения.
Определение иммуногенной активности вакцины. Иммуногенную активность биопрепарата определяют на морских свинках или белых мышах.
Для испытания готовят объединенную пробу вакцины, которую разводят растворителем до концентрации 200 млн. живых бактерий в 1 см3.
Определение иммуногенной активности вакцины на морских свинках. 10 морским свинкам массой 350-400 г вводят вакцину подкожно в области паха по 200 млн. живых бактерий в объеме 1 см3. Через 14-16 суток иммунизированных и не привитых (контрольных) животных, аналогичной массы, заражают подкожно культурами вирулентных штаммов: Сальмонелла тифимуриум № 371, Сальмонелла суис № 370 (при испытании сухой живой вакцины против сальмонеллеза свиней) и Сальмонелла тифимуриум № 371, Сальмонелла дублин № 373 (при испытании вакцины против сальмонеллеза молодняка) в ЛД50 дозе - по 5 опытных и контрольных животных каждым сероваром. Наблюдение за животными осуществляют в течение 10 суток от момента гибели 50% контрольных животных.
Определение иммуногенной активности вакцины на белых мышах. 20 белых мышей массой 16-18 г вакцинируют подкожно в области спины в дозе по 2 млн. живых бактерий в объеме 0,5 см3 на одно животное. Через 14-16 суток иммунизированных белых мышей и 20 непривитых (контрольных), аналогичной массы, заражают подкожно культурами вирулентных штаммов: Сальмонелла суис № 370, Сальмонелла тифимуриум № 371 (при испытании сухой живой вакцины против сальмонеллеза свиней) и Сальмонелла дублин № 373, Сальмонелла тифимуриум № 371 (при испытании вакцины против сальмонеллеза молодн