Технология производства вакцин против сальмонеллеза телят и поросят
Контрольная работа - Сельское хозяйство
Другие контрольные работы по предмету Сельское хозяйство
ие показатели ферментолизата (перевара):
общий азот - 800-1200 мг%;
аминный азот - 600-900 мг%;
триптофан - 100-200 мг%.
Биохимические показатели контролируют согласно ГОСТ 20730-75 Мясопептонный бульон для ветеринарных целей.
К полученному ферментолизату добавляют 5-10 см3/дм3 хлороформа. Смесь инкубируют при температуре 90-1000 С в течение 30-40 минут, охлаждают до температуры 15-250 С, отстаивают в течение 24-48 часов.
Прозрачный надосадок декантируют и разводят очищенной водой до содержания аминного азота 200-250 мг%, триптофана - 60-80 мг%.
В приготовленный мясной гидролизат добавляют до 0,5% пептона, 0,5% натрия хлорида, 0,3% химически чистого двухосновного фосфорнокислого натрия.
К бульону Хоттингера добавляют 10% воды на выкипание. Среду кипятят в течение 30 минут, рН среды устанавливают 10%-ным раствором натрия гидроокиси или двууглекислой соды до рН 7,6-7,8.
Среду кипятят в течение 1 часа, отстаивают в варочном котле в течение 1-2 часов, фильтруют до полной прозрачности через плотный слой ваты и марли.
Вместо бульона Хоттингера допускается использование двухкомпонентной питательной среды из гидролизатов белков крови. Для ее изготовления используют кровь убойных животных, форменные элементы - отходы сывороточного производства. Кровь предварительно путем сепарации (центрифугирования) разделяют на плазму и эритроцитарную массу, которые раздельно ферментируют, очищают и для приготовления среды смешивают в определенном соотношении. Сущность метода приготовления двухкомпонентной питательной среды не раскрывается, та как он является ноу-хау и оформлен патентом.
Для повышения выхода биомассы бактериальных клеток к питательной среде добавляют 3-5% препарата ЩПГСК, 18,7-22,5 мг/ дм3 левамизола, 4-5 мг/ дм3 никотиновой кислоты и пиридоксина гидрохлорида, 25 мг/ дм3 тиамина хлорида, 8-10 мг/ дм3 пантетената кальция, 50 мг/ дм3 сульфата магния, 50 мг/ дм3 тиосульфата натрия и др.
Выращивание посевного материала 1 генерации
Бульон Хоттингера, среду на основе гидролизата белков мясокостной муки (ГБММ) или двухкомпонентную питательную среду на основе гидролизатов белков крови (ГБК) разливают в стеклянные флаконы емкостью 100-200 см3 до 50% их объема, укупоривают ватно-марлевыми пробками и стерилизуют при температуре 116-1180С в течение 45 минут.
Каждую монокультуру сальмонелл в объеме 0,5 см3 с полужидкого агара или сухой ампулы, после ресуспендирования в одной из питательных сред, засевают в отдельный флакон с питательной основой.
Культуры выращивают при температуре 36-380С в течение 8-10 часов. Полученные культуры проверяют на чистоту путем микроскопии мазков, окрашенных по Граму, антигенную структуру - с монорецепторными сальмонеллезными сыворотками.
Выращивание посевного материала 2 генерации
Проверенные монокультуры сальмонелл засевают из флаконов в количестве 20-25 см3 в стеклянные бутыли емкостью 10-16 дм3, содержащие 5-6 дм3 питательной среды (бульон Хоттингера, ГБММ или ГБК). Культуры выращивают в течение 16-18 часов при температуре 37-380С. Полученные культуры проверяют на чистоту роста микроскопией мазков, окрашенных по Граму, и антигенную структуру - с монорецепторными сальмонеллезными сыворотками.
Допускается выращивание посевного материала в ферментере объемом 5-100 дм3 в течение 6-8 часов при температуре 36-380С. Ферментер загружают стерильной питательной средой (бульон Хоттингера, ГБММ или ГБК) на 1/3 его объема. Для повышения выхода биомассы и иммуногенности вакцины в питательную среду вводят витамины, микроэлементы и стимулирующие добавки.
Получение производственных монокультур сальмонелл в ферментере
Выращенные монокультуры 2 генерации и проверенные на чистоту, засевают в отдельные стерильные ферментеры в количестве 8-10% культуры из баллонов или 5% монокультуры из ферментера.
Культивирование сальмонелл осуществляют в ферментере объемом 0,63 м3 заполненном на 1/3 стерильной питательной средой (бульон Хоттингера, ГБК или ГБММ) в течение 8-12 часов при температуре 37-400 С и постоянном перемешивании (120 об/мин) и подачи стерильного воздуха.
В процессе культивирования сальмонелл осуществляют дробную подачу стерильного раствора глюкозы.
В процессе роста рН культуры поддерживают в пределах 7,2-7,6.
Для повышения выхода биомассы сальмонелл и иммуногенности вакцины добавляют в питательные среды витамины, микроэлементы и стимулирующие добавки.
По окончании культивирования определяют концентрацию культур, чистоту роста микроскопией мазков, окрашенных по Граму.
Изготовление инактивированной вакцины против паратифа поросят и телят
Для изготовления биопрепарата используют исходные культуры S. dublin № 373, S. typhimurium № 371, S. choleraesuis № 370, которые разводят физиологическим раствором до концентрации 4 млрд.м.к./см3 в отдельных стерильных сборниках для инактивации. К баксуспензиям добавляют формалин(содержание формальдегида не менее 36%) до конечного содержания 0,3-0,4%. Используют для инактивации также перекись водорода, димерэтиленимин.
Инактивацию культур проводят в течение 15-18 суток при температуре 37-420 С или 7 суток при температуре 37-380 С и 30 минут при температуре 560 С.
В процессе инактивации суспензию перемешивают в течение 5 минут 2 раза в сутки. После окончания процесса инактивации берут пробу для проверки на чистоту роста путем микроскопии мазков, окрашенных по Граму, и посева на питательные среды: по 3 флакона с МПБ и МПА и 3 пробирки с МПА и МПБ и средой Сабуро.
В течение