Сравнительная характеристика некоторых биохимических признаков риса
Курсовой проект - Разное
Другие курсовые по предмету Разное
?елухи, но и не начало перемалываться в муку. В кофемолку лучше засыпать рис небольшими партиями, так легче контролировать процесс перемалывания.
В случаи отсутствия кофемолки можно использовать ступку и пестик. На дно фарфоровой ступки кладется тонкая металлическая сетка, ею же обтягивается и пестик. Рис помещается в ступку и, слегка надавливая на зерно пестиком и вращая его, отделяя шелуху, избегая раздавливания зерна.
Полученную смесь засыпали в кулек, сделанный из бумаги, и закрывали его, так что бы внутри осталось свободное пространство. Встряхивали кулек несколько раз вверх-вниз. После проделанной операции и раскрытия кулька, очищенная зерновка оказывалась внизу, а шелуха вверху кулька.
Получение муки из очищенной зерновки или шелухи риса
Отделенную фракцию домалывали в кофемолке или в ступке пестиком. Затем смесь просеивали через сита с маленькими отверстиями. Оставшиеся не перемолотые частички вновь подвергали перемалыванию. Повторяли данную операцию до тех пор, пока не получили достаточного количества муки.
Выращивание проростков
Перед прорастанием риса тщательно вымыли растильни, подписали крышку и дно с внешней стороны тем названием сорта риса, который будет проращиваться в данной растильне.
На дно выкладывали лист фильтровальной бумаги, которая по площади больше площади дна растильни. Края бумаги подгибали на стенки растильни, для того чтобы потом зерно не оказалось под бумагой и тем самым было закрыто от света. На бумагу равномерно выкладывали зерно и заливали его водой, так что бы она полностью покрывала рис. Растильни прикрывали прозрачной крышкой на половину, для сохранения в них тепла, но что бы был доступ кислорода и света. С появлением зеленого стебля крышка не обязательна.
Каждый день меняли воду и промывали рис. Раз в неделю меняли фильтровальную бумагу.
Получение вытяжек исследуемого материала
Навеску массой 2г (мука из зерновки риса или шелухи, или из проростков) семян тщательно растирали в фарфоровой ступке со стеклянным песком, затем перенесли в мерную колбу на 25 мл, заливали водой до метки и настаивали 2 часа. Полученную смесь перемешивали и отфильтровывали, можно центрифугировать. Получили исследуемую вытяжку.
.2 Колориметрическое определение фосфора
Сущность всех методов определения фосфора состоит в том, что фосфорная кислота в присутствии молибденовокислого аммония в кислой среде образует комплекс (NH4)3[P(Mo3O10)4], который при взаимодействии с восстановителем дает синее окрашивание в кислой среде, молибденовую синь. Интенсивность окраски пропорциональна количеству фосфорной кислоты, содержащейся в растворе. Реакция протекает в кислой среде:
Молибденовая синь в растворе находится в коллоидном состоянии, легко адсорбируется поверхностно-активными веществами. Перед фотометрированием нельзя фильтровать уже окрашенные растворы.
От природы восстановителя зависит скорость реакции восстановления и чувствительность метода. Если в исследуемом растворе содержится белок, то необходимо его предварительно удалить.
Для этого в исследуемый раствор добавляют раствор трихлоруксусной или хлорной кислоты. Раствор хорошо перемешивают, осадок белка удаляют фильтрованием или центрифугированием. Если в растворе присутствуют кислотолабильные фосфорные соединения, то фильтрование или центрифугирование проводят на холоде, а кислоту из безбелкового раствора удаляют. От трихлоруксусной кислоты можно освободиться путем повторного встряхивания раствора с 5- 10-кратным объемом насыщенного водой эфира. Трихлоруксусная кислота переходит при этом в эфирную фракцию. После встряхивания и отстаивания эфир отсасывают водоструйным насосом. Хлорную кислоту удаляют в виде калиевой соли (КСlO4), образующейся при нейтрализации раствора 5н. раствором КОН. Вместо удаления кислот безбелковый раствор можно просто нейтрализовать раствором NaOH. При этом необходимо определить конечный объем пробы. Фосфат определяют прямо из полученного безбелкового раствора.
Наибольшее распространение среди колориметрических методов определения фосфора получил метод Фиске - Суббароу. Однако в ходе проделанной работы использовался другой метод: Лоури и Лопесу в модификации Скулачева - характеризующейся более высокой чувствительностью, чем другие колориметрические методы, и позволяющий определить от 0,3 до 6 мкг Р в 1 мл колориметрируемого раствора.
.2.1 Метод Лоури и Лопесу в модификации Скулачева
Принцип этого метода состоит в превращении фосфорномолибденового комплекса в синь под действием аскорбиновой кислоты. Ускорение реакции и повышение чувствительности метода достигаются присутствием ионов меди в инкубационной среде. Этот метод применяют в тех случаях, когда в анализируемой вытяжке, кроме неорганического фосфора, присутствуют лабильные органические фосфорсодержащие соединения. Восстановление фосфорномолибденового комплекса проводится при более низкой кислотности среды (рН 4), чем в методе Фиске-Суббароу (рН 0,65). В таких условиях лабильные фосфорные соединения более устойчивы.
Реактивы (готовят на бидистилляте):
) 0,1 М ацетатный буфер с рН 4;
) 1 % - ый раствор молибденовокислого аммония, приготовленный на 0,05 н. растворе H2S04;
) 1 % - ый раствор аскорбиновой кислоты, приготовленный на 0,001 М растворе сернокислой меди CuS045H20 (реактив нестоек, поэтому готовят небольшие порции в день определения)
Приготовление реактивов: