Особенности распределения генов hla класса II у больных поллинозами 14. 01. 04 Внутренние болезни
| Вид материала | Автореферат |
- Клинико-эпидемиологические особенности метаболического синдрома у больных профессиональными, 337.94kb.
- Влияние гормонально-метаболических нарушений на результаты аортокоронарного шунтирования, 376.97kb.
- Ранняя диагностика, особенности течения и лечения хронических субдуральных гематом, 453.03kb.
- Особенности кардио-респираторной системы у больных зрелого возраста с воронкообразной, 306.11kb.
- Расписание лекций по дисциплине «внутренние болезни», 62.03kb.
- Удк (616. 33 002. 44+616. 342-002. 44)-07: 616. 1 Морфо-функциональные особенности, 544.96kb.
- Рабочая учебная программа по специальности аспирантуры «внутренние болезни» Кафедра, 517.71kb.
- Оптимизация системного подхода в реабилитации больных сахарным диабетом с высокой коморбидностью, 922.15kb.
- Клинико-неврологические и нейропсихологические особенности ишемической болезни мозга, 367.52kb.
- Расписание лекций по дисциплине «внутренние болезни», 61.13kb.
На правах рукописи
АНДРЕЕВА ЕЛЕНА ЕВГЕНЬЕВНА
ОСОБЕННОСТИ РАСПРЕДЕЛЕНИЯ ГЕНОВ HLA
КЛАССА II У БОЛЬНЫХ ПОЛЛИНОЗАМИ
14.01.04 - Внутренние болезни
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени
кандидата медицинских наук
Астрахань - 2011
Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Астраханская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации
Научный руководитель:
кандидат медицинских наук, доцент
Заклякова Людмила Владимировна
Официальные оппоненты:
доктор медицинских наук, профессор
Каменев Виктор Федорович
доктор медицинских наук, профессор
Полунина Ольга Сергеевна
Ведущая организация: ГОУ ВПО «Ставропольская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России
Защита состоится « ___ » _________ 2011 года в ___часов на заседании диссертационного совета Д 208.005.01 при ГОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России по адресу: 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская, 121.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России
Автореферат разослан « ____ » _________ 2011 года
Ученый секретарь совета по защите
докторских и кандидатских диссертаций
Д 208.005.01,
кандидат медицинских наук, доцент Л.В. Заклякова
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ДИССЕРТАЦИИ
Актуальность проблемы
На рубеже XXI века рост распространенности аллергии в мире стал глобальной медико-социальной проблемой. Сегодня аллергические заболевания занимают ведущее место среди других патологических состояний и оказывают существенное влияние на здоровье и качество жизни населения развивающихся и развитых стран [J. Daniels, 2002; Г.Б. Федосеев с соавт., 2003; M. Masoli et al., 2004; W.J. Fokkens and C.M. Van Drunen, 2006; P.W. Hellings et al., 2006; А.Г. Чучалин с соавт., 2007; А.А. Баранов с соавт., 2008; М.Ю. Гущин с соавт., 2010].
Мировая статистика свидетельствует, что от 10 до 25% городского и сельского населения, проживающего в странах с высокоразвитой экономикой, страдает аллергическими заболеваниями [A.B. Kay, 2001; D.L. Hamilos, 2010]. Согласно данным Европейской белой книги аллергии (European allergy white paper), сегодня каждый третий ребенок в странах Европы страдает аллергией, а каждый десятый - бронхиальной астмой (БА) [С.Ф. Гладков и Н.К. Перевощикова, 2010].
В различных регионах Российской Федерации распространенность аллергических заболеваний колеблется от 15 до 35% [Л.А. Горячкина, 2004; Н.И. Ильина, 2004; Д.А. Безрукова, 2007; М.Ф. Балдуева, 2007; И.В. Маругин с соавт., 2009]. Высокий уровень заболеваемости аллергической патологией во многих странах мира послужил поводом для включения руководством ВОЗ в 1999 году аллергии и БА в число приоритетных медицинских проблем человечества на ближайшие 10 лет.
В настоящее время наследственный фактор рассматривается как основополагающий в формировании поллинозов, а поиск генов, маркирующих предрасположенность к развитию БА, Международный консенсус по бронхиальной астме определяет как одно из приоритетных направлений мировых научных исследований.
Открытие одной из самых полиморфных генетических систем человеческого организма – системы HLA и последующие плодотворные исследования в этой области показали тесную взаимосвязь продуктов HLA с заболеваниями и возможность их использования в качестве генетических маркеров предрасположенности или резистентности к той или иной патологии [L.P. Alekseev, 1999; D.A. Brewerton, 2003; А.А. Баранов с соавт., 2003; Б.Н. Левитан и Е.А. Попов, 2004].
Однако в клинической аллергологии работ, направленных на поиск иммуногенетических маркеров предрасположенности и резистентности к развитию того или иного аллергического заболевания, крайне мало, данные их весьма противоречивы. Актуальным представляется не только выяснение механизма ассоциаций между поллинозами и генами HLA, но и разработка прогностического сценария для данной группы больных. До сих пор остается неизвестным, почему у одних пациентов проявления поллиноза ограничиваются клиникой аллергического ринита (АР), а у других больных развивается БА.
Цель исследования
Усовершенствовать методы диагностики и прогнозирования поллинозов на основе изучения особенностей распределения генов HLA класса II у больных аллергическим ринитом и аллергической формой бронхиальной астмы.
Задачи исследования
1. Исследовать аллельный полиморфизм генов HLA класса II локусов DR и DQ у больных поллинозами в популяции русских астраханской геногеографической зоны
2. Изучить возможную половую и возрастную рестрикцию аллельных вариантов генов DRB1 и DQB1 у больных поллинозами
3. Установить маркеры повышенного риска развития и предикторы аллергического ринита и аллергической формы бронхиальной астмы из числа аллельных вариантов генов HLA класса II локусов DR и DQ и их гаплотипов
4. Провести сравнительный анализ маркерных специфичностей HLA аллергического ринита и аллергической формы бронхиальной астмы из числа аллельных вариантов генов DRB1 и DQB1
5. Оценить возможности метода HLA-типирования у пациентов с аллергическим ринитом и аллергической формой бронхиальной астмы для разработки индивидуальных прогностических сценариев характера течения поллиноза
Положения, выносимые на защиту
1. При поллинозах имеются ассоциативные связи с генами HLA класса II, что является прямым доказательством непосредственного участия иммунной системы в формировании предрасположенности и резистентности к аллергическому риниту и аллергической форме бронхиальной астмы
2. Предрасположенность и резистентность к развитию поллинозов генетически детерминированы и маркируются определенным набором аллелей HLA класса II, а также их гаплотипическими сочетаниями
3. Маркерные специфичности поллинозов из числа генов HLA класса II локусов DR и DQ обладают половой и возрастной рестрикцией
4. Особенности HLA-фенотипа больных могут быть использованы в качестве дополнительного критерия для разработки долгосрочного индивидуального прогноза возможных сценариев клинического течения поллинозов
5. Метод молекулярного HLA-типирования может быть использован для оценки степени риска развития аллергической формы бронхиальной астмы у пациентов, страдающих аллергическим ринитом
Научная новизна
Получены новые данные о характере ассоциативных связей генов HLA с риском развития поллинозов на примере русской популяции астраханской геногеографической зоны. Подтвержден факт существования прямого контроля со стороны иммунной системы за развитием и характером клинического течения поллинозов. Впервые установлено наличие половой и возрастной рестрикции иммуногенетических маркеров поллинозов из числа аллелей генов DRB1 и DQB1.
Впервые в отечественной практике с помощью метода полимеразой цепной реакции установлены неизвестные ранее ассоциации аллельных вариантов генов HLA II класса DRB1 и DQB1 с предрасположенностью и резистентностью к развитию поллинозов.
Впервые установлены маркеры повышенного риска развития и маркеры резистентности к развитию аллергического ринита и аллергической формы бронхиальной астмы из числа специфичностей HLA класса II локусов DR, DQ и их гаплотипов в популяции русских астраханской геногеографической зоны.
Разработаны новые дополнительные иммуногенетические критерии для прогнозирования и оценки степени риска развития аллергической формы БА у пациентов, страдающих АР.
Практическая ценность исследования
Результаты исследования расширяют возможности диагностики, дифференциальной диагностики и долгосрочного прогнозирования поллинозов в клинике внутренних болезней и аллергологии, в частности.
Полученные данные могут быть использованы в профилактической медицине для формирования групп повышенного риска развития поллинозов среди здорового населения, а также групп высокого риска развития аллергической формы БА у больных АР.
Метод молекулярного HLA-типирования целесообразно использовать для разработки сценариев долговременного индивидуального прогноза возможных вариантов течения поллинозов, в частности, для оценки степени риска развития БА у пациентов, страдающих АР.
Внедрение результатов исследования
Полученные при выполнении диссертационного исследования результаты внедрены в практику пульмонологического отделения и консультативной поликлиники ГУЗ «Александро-Мариинская областная клиническая больница» г. Астрахани. Основные положения работы используются в научно-педагогической деятельности кафедры факультетской терапии и профессиональных болезней с курсом последипломного образования и кафедры поликлинического дела и скорой медицинской помощи Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России.
Выводы диссертации включены в лекционный материал по темам «Аллергические заболевания» и «Бронхиальная астма», в план семинарских занятий со студентами, интернами, клиническими ординаторами и курсантами на указанных кафедрах АГМА. Материалы работы включены в методические рекомендации и практические руководства для врачей терапевтического профиля.
Апробация диссертации и публикации
Основные положения диссертации были представлены и обсуждены на XIV Международном конгрессе по реабилитации в медицине и иммунореабилитации (17-20 октября 2009 г., Тель-Авив, Израиль), на Национальной конференции «Аллергология и клиническая иммунология - практическому здравоохранению» (25-26 февраля 2010 г., Москва), на итоговых научно-практических конференциях сотрудников Астраханской государственной медицинской академии (2008, 2009), научных конференциях молодых ученых Астраханской государственной медицинской академии (2007, 2009), на заседаниях Астраханского областного научного общества терапевтов (2008, 2009).
Работа апробирована на межкафедральной конференции с участием кафедр АГМА и врачей АМОКБ г. Астрахани. По материалам диссертационного исследования опубликовано 9 печатных работ, в том числе 7 публикаций в изданиях, включенных в перечень ВАК РФ.
Объем и структура диссертации
Диссертация изложена на 161 странице машинописного текста, состоит из введения, литературного обзора, 4 глав, содержащих результаты собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций и библиографического указателя, содержащего 305 работ. Список литературы включает в себя 134 отечественных и 171 зарубежный первоисточник. Работа иллюстрирована 24 таблицами, 6 рисунками и 8 клиническими примерами. Диссертация выполнена в соответствии с планом научно-исследовательской работы Астраханской государственной медицинской академии.
СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ
Материалы и методы исследования
Для решения вопроса о возможном влиянии генетических факторов, связанных с системой HLA, на восприимчивость или резистентность к развитию поллинозов за период с 2004 по 2009 г.г. нами проведено исследование иммуногенетического статуса у 61 человека в популяции русских астраханской геногеографической зоны, находившихся на обследовании и лечении в пульмонологическом отделении ГУЗ «Александро-Мариинская областная клиническая больница» с диагнозом АР или аллергической формы БА в сочетании с АР.
При постановке заключительного клинического диагноза использованы общепринятые в настоящее время классификации аллергического ринита (ARIA, 2001) и бронхиальной астмы (GINA, 2006).
В общую анализируемую выборку «поллинозы» вошли 23 мужчины (37,7%) и 38 женщин (62,3%). Соотношение лиц мужского и женского пола в исследуемой группе пациентов составило 1: 1,65.
Возраст больных на момент включения в исследование колебался от 18 лет до 71 года: у мужчин - от 19 лет до 71 года, у женщин - от 18 до 65 лет. Средний возраст пациентов на момент включения в группу наблюдения составил 34,52 ± 0,72 года: у мужчин - 35,18 ± 1,43 года, у женщин - 33,43 ± 1,38 года и практически не имел гендерных отличий.
Возраст пациентов на момент появления первых клинических признаков заболевания колебался от 1 года до 64 лет: у мужчин - от 5 лет до 64 лет, у женщин - от 1 года до 33 лет. Средний возраст пациентов в дебюте заболевания составил 17,36 ± 1,24 года: у мужчин - 18,04 ± 1,35 года, у женщин - 16,95 ± 1,19 года. Таким образом, сроки начала заболевания в выборке практически не зависели от пола пациентов.
Все больные были разделены на две анализируемые выборки в зависимости от клинического варианта поллинозов. В 1-ую группу был включен 31 больной с диагнозом АР. Во 2-ую группу вошли 30 пациентов, у которых по результатам клинико-лабораторного обследования была диагностирована аллергическая форма БА в сочетании с АР.
Дебют заболевания в возрасте до 18 лет зафиксирован у 34 больных: у 22 пациентов с диагнозом АР и у 12 - с аллергической формой БА. Дебют заболевания после 18 лет установлен у 27 больных: у 11 пациентов с диагнозом АР и у 16 - с аллергической формой БА.
Для получения принципиально новых научных данных о существующих ассоциативных связях между продуктами HLA и поллинозами нами проведен поиск маркеров предрасположенности и резистентности к АР и аллергической форме БА из числа специфичностей HLA класса II локусов DR и DQ в изучаемой популяции.
У 61 больного с поллинозами методом PCR mSSP (полимеразная цепная реакция с сиквенс-специфическими праймерами, модифицированная) проведено молекулярное типирование аллельных вариантов генов DRB1 и DQB1. Исследование проводилось на базе иммуногенетической лаборатории ЗАО «Межрегиональный Центр иммуногенетических и гистотипирующих реагентов «Гисанс» (г. Санкт-Петербург) с помощью коммерческих наборов «HLA - Biotest» (Германия).
Для статистической обработки полученных результатов в качестве контрольной группы были использованы два популяционных контроля. Контрольную группу-1 составили 300 здоровых доноров крови - коренных жителей г. Москвы русской национальности. Контроль предоставлен отделом иммуногенетики ГНЦ «Институт иммунологии ФМБА России» (руководитель отдела - д.м.н., профессор Л.П. Алексеев). Контроль-2 составили 94 здоровых донора - коренных жителя астраханской геногеографической зоны русской национальности. Данные популяционного контроля опубликованы в 2005 году в журнале «Иммунология» совместной группой научных сотрудников ФГУ «Научно-исследовательский институт по изучению лепры Росздрава» (г. Астрахань) и ГНЦ «Институт иммунологии ФМБА России» (г. Москва).
Анализ результатов HLA-типирования проводился по общепринятой методике и включал изучение частоты регистрации отдельных аллелей и их сочетаний (гаплотипов), определение показателей относительного риска – RR, этиологической фракции – EF (для RR>1), превентивной фракции – PF (для RR<1). Достоверность полученных результатов оценивалась с помощью критерия χ2 с поправкой Йейтса на непрерывность выборки и с использованием корригированного значения (рс) степени достоверности для малых выборок. Математическая обработка данных проводилась с использованием программы «Microsoft Excel» для «Windows XP» а также компьютерной программы для популяционной генетики «ARLEQUIN» (Версия 3.1).
Результаты исследования
Частота регистрации аллельных вариантов генов DRB1 и DQB1 у больных поллинозами и в контролях представлена в таблице 1. Для некоторых аллелей установлены значительные изменения их частоты, как в сторону увеличения, так и в сторону снижения.
Так, у больных поллинозами зафиксировано значительное повышение уровня группы аллелей DRB1*15(02) до 41,0%, DRB1*17(03) до 18,0% и DRB1*08 до 18,0%, аллелей DQB1*0401/02 до 13,1% и DQB1*05 до 13,1%. Кроме того, в группе установлено значительное снижение частоты регистрации группы аллелей DRB1*13(06) до 19,7%, DRB1*07 до 21,3% и аллеля DQB1*0302 до 4,9% (таблица 1).
Таблица 1
Частота регистрации аллелей генов DRB1 и DQB1
у больных поллинозами и в контрольных группах
| Аллели HLA | Контроль-1 г. Москва n = 300 | Контроль-2 г. Астрахань n = 94 | Больные поллинозами n = 61 | |||
| абс. | % | абс. | % | абс. | % | |
| DRB1*01 DRB1*15(02) DRB1*16(02) DRB1*17(03) DRB1*04 DRB1*11(05) DRB1*12(05) DRB1*13(06) DRB1*14(06) DRB1*07 DRB1*08 DRB1*09 DRB1*10 DRB1*x DQB1*0201 DQB1*0301 DQB1*0302 DQB1*0303 DQB1*0304 DQB1*0305 DQB1*0401/02 DQB1*05 DQB1*06 DQB1*x | 56 75 38 46 58 75 15 77 14 78 10 4 8 46 101 118 47 20 1 0 10 113 126 64 | 18,7 25,0 12,7 15,3 19,3 25,0 5,0 25,7 4,7 26,0 3,3 1,3 2,7 15,3 33,7 39,3 15,7 6,7 0,3 0,0 3,3 37,7 42,0 21,3 | 14 27 5 10 19 31 3 36 0 30 4 5 3 - 39 49 12 7 - 0 4 21 53 - | 14,9 28,7 5,3 10,6 20,2 32,9 3,2 38,3 0,0 31,9 4,3 5,3 3,2 - 41,5 52,1 12,8 7,5 - 0,0 4,3 22,3 56,4 - | 7 25 5 11 10 15 2 12 1 13 11 1 1 8 22 15 3 2 1 0 8 21 27 23 | 11,5 41,0 8,2 18,0 16,4 24,6 3,3 19,7 1,6 21,3 18,0 1,6 1,6 13,1 36,1 24,6 4,9 3,3 1,6 0,0 13,1 34,4 44,3 37,7 |