Фармако-токсикологическая и терапевтическая оценка новых лекарственных форм анандина 16. 00. 04 Ветеринарная фармакология с токсикологией
| Вид материала | Автореферат |
- Токсикологическая оценка и экспериментальное обоснование применения полиферментных, 621.59kb.
- Программа-минимум кандидатского экзамена по специальности 16. 00. 04 «Ветеринарная, 204.06kb.
- Комплексный антибактериальный препарат на основе доксициклина и линкомицина для лечения, 374.02kb.
- "Ветеринарная и клиническая фармакология. Токсикология" Специальность: 111201 Ветеринария, 237.1kb.
- Примерная программа наименование дисциплины «Ветеринарная фармакология. Токсикология», 419.87kb.
- «Клиническая фармакология» Специальность: 111201 Ветеринария Пояснительная записка, 94.74kb.
- Клиническая эффективность и фармакоэпидемиология лекарственных средств у детей с аллергическим, 462.25kb.
- 1. Терапевтическая ценность и химический состав лекарственных растений, 308.39kb.
- Фундаментальные аспекты создания на основе минерала бишофит магний-содержащих лекарственных, 1046.55kb.
- Положение о лицензировании производства лекарственных средств проходит общественную, 36.89kb.
На правах рукописи
Черкай Злата Николаевна
ФАРМАКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКАЯ
И ТЕРАПЕВТИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА НОВЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ АНАНДИНА
16.00.04 – Ветеринарная фармакология с токсикологией
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени
доктора ветеринарных наук
Санкт-Петербург – 2007
Работа выполнена на кафедре фармакологии и токсикологи в Федеральном государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины» (ФГОУ ВПО «СПбГАВМ»).
Научный консультант – заслуженный деятель науки РФ
доктор ветеринарных наук, профессор
Соколов Владимир Дмитриевич
Официальные оппоненты: доктор биологических наук
Андросов Николай Сергеевич;
доктор ветеринарных наук, профессор
Уразаев Дмитрий Николаевич;
доктор биологических наук, профессор
Великанов Валерий Иванович
Ведущая организация – ФГУ «Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГУ «ВГНКИ»)
Защита состоится «11» октября 2007 года в «13.00» часов на заседании диссертационного совета Д.220.059.03 при ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины» по адресу: 196084, Санкт-Петербург, ул. Черниговская, 5;
тел./факс (812) 388-36-31, 388-10-55. Email: mail @ spbgavm.ru
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины».
Автореферат разослан «___» ____________ 2007 г.
Ученый секретарь
диссертационного совета О.В.Узюмова
1. Общая характеристика работы
Актуальность темы. Лекарственные средства являются важной составной частью практической и теоретической ветеринарной медицины. За последние десятилетия существенно расширились возможности фармакотерапии. Это связано, прежде всего, с бурным развитием химико-фармацевтической промышленности и введением в терапевтическую практику новых лекарственных веществ. Кроме того, достижения фундаментальных медико-биологических дисциплин позволяют на молекулярном уровне выявлять новые важные аспекты патогенеза распространенных заболеваний и определять характер воздействия лекарственных препаратов, что существенно влияет на развитие ветеринарной фармакологии (Соколов В.Д. и др., 1989 – 2005; Шахтместер И.Я., Тенцова И.Я., Ажгихин И.С.,2000; Бацанов Н.П., Булгаков Р.И., Алиев А.А., 2001; Карпенко Л.Ю., Бахта А.А.; 2005, Калишин Н.М., Федорова Н.А., 2005).
Обеспечить потребности ветеринарных врачей, лечебных учреждений и владельцев животных в лекарственных средствах сегодня невозможно без развития и поддержки отечественной фармации (Бацанов Н.П., Булгаков Р.И., Алиев А.А., 2001).
Учитывая вышесказанное, особый научный и практический интерес представляет создание политропных фармацевтических препаратов. Перспективность тенденции синтеза таких лекарственных средств определяет их фармакологическая способность одновременно оказывать этиотропное, патогенетическое, симптоматическое и реабилитационное действие. Кроме того, согласно практическому опыту, такие лекарства более эффективны, менее токсичны, технологичнее в применении и практичнее с экономической точки зрения, по сравнению с использованием разрозненных препаратов (Соколов В.Д., 1997; Цепков А.С., Девяткина И.А., Данилевская Н.В., 2001; Смирнов П.Н. и др., 2005; Милаев В.Б., Шабалина Е.В., Милаева О.Н., 2006).
В мировой литературе, имеются многочисленные подтверждения, целесообразности использования индукторов эндогенного интерферона при вирусных и бактериальных инфекциях, а также в качестве противоопухолевых и иммуномодулирующих лекарственных средств (Ершов Ф.И., 1996; Романцов М.Г., 1998; Фрейдлин И.С., 1998; Анников В.В., Хапрова Т.С., 2006; Топурия Л.Ю., 2006; Stites D.P., Terr F.I., 1991; Bikova J., Keisha A., Barene I.,2003).
Связано это с тем, что с иммунобиологической точки зрения, интерфероны рассматриваются, прежде всего, как иммуномодуляторы, влияющие на процессы дифференцировки и функциональную активность эффекторных клеток иммунной системы (Т-лимфоцитов, макрофагов/моноцитов). Под действием интерферона повышается эффективность иммунного распознавания антигена и усиливается фагоцитарная и цитолитическая функции, направленные на элиминацию возбудителя и/или антигенно измененных клеток (Карпенко Л.Ю.,1997; Фрейдлин И.С., 1998; Кузнецова Е.С., 2002; Лямжапова Г.П., 2005; Gaskell R.M., Gaskell C.J, 1988; Arlian L.G., 2003).
Одним из перспективных индукторов эндогенных цитокинов является анандин (1,2:5,6 -ди-о-изопропилиден - α-D-глюкофураноза - 3-0 - (N,N - диметиламинопропил) - 10 - метиленкарбоксилат - 9-акридон) для инъекций, который обладает высокой биологической активностью, низкой токсичностью и отсутствием аллергенного, мутагенного и эмбриотоксического действия на организм животных, хорошо сочетается с традиционными терапевтическими средствами. Перечисленные свойства анандина позволили предположить терапевтическую перспективность его включения с другими фармакологическими веществами (антибиотиками, пиретроидами и др.) в состав лекарственных форм для наружного применения (Коновалова В.Н., Гринявичус, Дуденас Р.З., 1979; Травкин О.В., Шведов О.Г., Яковлева Е.В.,1995; Гринберг Г.И., Этингова Н.И., Андреева Н.Р., 1995; Ершов Ф.И., 1999).
Наиболее известны в настоящее время и применяются в ветеринарной практике «Циклоферон» и «Анандин» (Мухина З.Н., Травкин О.В., 1997, Черкай З.Н., 2005-2006).
Поскольку среди многообразия болезней собак и кошек патологии кожи, ушей и глаз занимают особое место, а препараты, используемые для лечения, нередко рекрутируются из гуманной медицины, то разработка и внедрение новых эффективных ветеринарных препаратов для наружного применения является весьма актуальной.
В виду того, что болезни, как правило, возникают в условиях микробных ассоциаций на фоне сниженной резистентности организма, конструирование политропных лекарственных форм с включением в их структуру иммуномодулирующего компонента, представляет научный и практический интерес.
Цель работы. Разработать теоретическое, экспериментальное и клиническое обоснование перспективности создания лекарственных форм для наружного применения с анандином и внедрить их в ветеринарную практику в качестве терапевтических средств и препаратов выбора для ветеринарных специалистов.
Задачи исследования
1. Разработать и обосновать рецептуру капель глазных-интраназальных с анандином.
2. Изучить безвредность анандиновых глазных-интраназальных капель на лабораторных животных.
3. Разработать нормативно-техническую документацию для капель глазных-интраназальных «Анандин» и определить условия контроля качества препарата в соответствии с требованиями, предъявляемыми к глазным каплям.
4. Провести клинические испытания глазных-интраназальных капель «Анандин» и определить их терапевтическую активность при конъюнктивитах и инфекционном ринотрахеите кошек.
5. Разработать и обосновать лекарственную формулу ушных капель с анандином, обладающих противовоспалительным, антимикробным и регенерирующим действием (ушные капли «Анандин»).
6. Разработать и обосновать рецептуру ушных капель с анандином, обладающих противовоспалительным, антимикробным, регенерирующим и акарицидным действием (ушные капли «Анандин-плюс»).
7. Изучить безвредность и терапевтическую активность ушных капель «Анандин» и «Анандин-плюс» для лабораторных и мелких домашних животных (собак и кошек).
8. Установить методы контроля качества ушных капель с анандином. Разработать нормативно-техническую документацию на ушные капли «Анандин» и «Анандин-плюс».
9. Изучить антимикотические свойства «Анандина для инъекций» in vivo в эксперименте.
10. Разработать и обосновать рецептуру мази с анандином.
11. Провести биотестирование мази «Анандин» и определить ее безвредность на лабораторных животных.
12. Установить терапевтическую активность мази «Анандин» при дерматитах у собак.
13. Разработать нормативно-техническую документацию и методы контроля качества лекарственной формы «Анандин-мазь».
14. В сравнительном аспекте изучить терапевтические возможности и конкурентоспособность новых лекарственных форм «Анандина».
Научная новизна. Впервые разработаны и предложены фармацевтической промышленности рецепты следующих лекарственных форм с анандином: капли глазные-интраназальные «Анандин»; 2%-ная мазь «Анандин»; капли ушные «Анандин»; капли ушные «Анандин-плюс».
Дано теоретическое и практическое обоснование их лекарственных формул. В сравнительном аспекте детально изучены фармако-токсикологические свойства новых лекарственных форм анандина.
Установлена безвредность капель глазных-интраназальных «Анандин» на лабораторных животных и соответствие их качества жестким требованиям, предъявляемым Государственной фармакопеей XI к глазным лекарственным формам. Разработаны чувствительные и воспроизводимые методики количественного определения лекарственного вещества (анандина) в глазных каплях, позволяющие осуществить контроль их качества. На основании клинических исследований показана терапевтическая эффективность капель глазных-интраназальных «Анандин» при конъюнктивитах и инфекционном ринотрахеите кошек.
Впервые изучены антимикотические свойства анандина in vivo. Выяснены фармако-токсикологические свойства 2%-ной мази «Анандин». На основании разностороннего биотестирования установлена терапевтическая активность 2%-ной мази «Анандин» при питироспорозе и поверхностном кандидозе у собак.
Впервые разработаны рецепты отечественных ушных капель политропного действия «Анандин» и «Анандин-плюс».
Изучены: безвредность для животных, противовоспалительная и антимикробная активность ушных капель «Анандин». Отработаны схемы применения препарата при отитах у собак.
Исследована акарицидная активность ушных капель «Анандин-плюс». Доказана их терапевтическая активность и разработана оптимальная схема применения при отодектозе у кошек и собак, в том числе осложненном отитом. Предложена воспроизводимая методика количественного определения анандина в составе ушных капель, позволяющая контролировать их качество.
Теоретически обоснована и экспериментально доказана стратегия создания сложных лекарственных форм для наружного применения с целью достижения многопланового терапевтического действия (антимикробного, противовирусного, противогрибкового, противовоспалительного, регенерирующего и т.д.).
Приоритет проведенных исследований подтвержден техническими условиями, регистрационными удостоверениями и сертификатами соответствия на каждый вид лекарственной формы анандина, а также патентом «Способ лечения отодектоза кошек».
Практическая значимость работы. Для применения в ветеринарно-медицинской практике при работе с мелкими домашними животными предложены новые конкурентоспособные лекарственные формы: капли глазные-интраназальные «Анандин», 2%-ная мазь «Анандин», ушные капли «Анандин» и ушные капли «Анандин-плюс», имеющие ряд преимуществ. Разработаны эффективные схемы применения новых лекарственных препаратов для собак и кошек в терапевтических целях. Обоснована новая оригинальная концепция включения в рецептуру лекарственных форм для наружного применения веществ обладающих иммуномодулирующей и интерфероногенной активностью.
На основании данных, полученных в ходе экспериментальных исследований, научно обоснованы рациональные составы и технология глазных-интраназальных капель «Анандин», ушных капель «Анандин» и «Анандин-плюс», 2%-ная мазь «Анандин».
Многолетние научно-практические испытания лекарственных форм с анандином завершены созданием и утверждением четырех видов технических условий:
ТУ 9337-003-46913214-00 Капли глазные-интраназальные «Анандин»; ТУ 9337-002-46913214-00 Мазь "Анандин"»;
ТУ 9337-004-46913214-00 Капли ушные "Анандин"»;
ТУ 9337-005-46913214-00 Капли ушные "Анандин-плюс"».
На все лекарственные формы в Департаменте Ветеринарии Министерства сельского хозяйства Российской Федерации нами получены Регистрационные удостоверения: РУ № Р078-2-2.0-0942 на препарат капли глазные-интраназальные "Анандин"; РУ № Р078-2-2.0-0940 на препарат капли ушные "Анандин"; РУ № Р078-2-2.0-0941 на препарат капли ушные "Анандин-плюс"; РУ № Р078-2-2.0-0943 на препарат мазь "Анандин".
Обобщенные данные наиболее ценных научно-практических результатов представлены в монографии «Новые лекарственные формы индуктора эндогенного интерферона - анандина. Опыт применения в ветеринарной медицине» (2006) и внедрены в ветеринарных клиниках Северо-Западного и Центрального региона Российской Федерации (Санкт-Петербурге, Мурманске, Калининграде, Ярославле и Смоленске) с лечебной целью для собак и кошек.
Результатом фармако-токсикологических и клинических исследований стало получение сертификата соответствия № РОСС RU. ПР15.В.12549, № 0001.11ПР15 на серийный выпуск продукции «Ветпрепараты на основе Анандина» согласно приложению № 1142784: 10%-ный раствор «Анандина для инъекций», капли глазные-интраназальные “Анандин", мазь "Анандин", капли ушные для собак и кошек " Анандин" и "Анандин-плюс".
На основе объективных научно-практических данных разработаны и утверждены Временные наставления по применению «Ветеринарных препаратов на основе анандина» (1998), которые заменены в настоящее время Инструкциями по применению на следующие лекарственные формы: капли глазные-интраназальные «Анандин»; мазь «Анандин»; капли ушные «Анандин» и «Анандин-плюс», утвержденные Россельхознадзором России (2006).
В 2003 году нами получен Аттестат ФГУ «Всероссийский государственный научно-исследовательский институт контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов», удостоверяющий соответствие требованиям, предъявляемым к производству ветеринарных препаратов, и наличие условий для выпуска: капель глазных-интраназальных «Анандин», 2%-ной мази «Анандин», ушных капель «Анандин» и «Анандин-плюс».
Репрезентативная информация о научно-исследовательской работе используется в учебном процессе ветеринарных факультетов высших учебных заведений Минсельхоза России.
На защиту выносятся следующие положения
и результаты
1. Результаты теоретических и экспериментальных исследований по разработке рецептуры и технологии новых лекарственных форм анандина (3 вида капель и мазь).
2. Результаты фармако-токсикологического анализа их безвредности.
3. Результаты клинических испытаний по изучению терапевтической активности глазных-интраназальных капель «Анандин» при конъюнктивитах и инфекционном ринотрахеите кошек.
4. Результаты клинических испытаний по изучению терапевтической эффективности ушных капель «Анандин» при отитах у собак.
5. Результаты клинических испытаний по изучению терапевтической активности ушных капель «Анандин плюс» при отодектозе кошек и собак.
6. Результаты изучения антимикотической активности «Анандина для инъекций».
7. Результаты клинических испытаний мази «Анандин» при питироспорозе и поверхностном кандидозе у собак.
Апробация результатов диссертации. Основные положения диссертационной работы доложены и одобрены на ежегодных заседаниях Ученого совета ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская Государственная академия ветеринарной медицины» (ФГОУ ВПО «СПбГАВМ»), научных конференциях профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников, молодых ученых и аспирантов ФГОУ ВПО «СПбГАВМ» (1995–2003); Международных межвузовских научно-практических конференциях «Новые фармакологические средства в ветеринарии» (Санкт-Петербург, 1998-2004, 2007 гг.); конференции Ассоциации практикующих ветеринарных врачей «Актуальные проблемы ветеринарной медицины мелких домашних животных» (Санкт-Петербург, 1999), Международных симпозиумах «Современные проблемы ветеринарной диетологии и нутрициологии» (2001–2005 гг.), Международных научно-практических конгрессах «Ветеринария. Зоотехния» (2001–2006 гг.). Ряд выступлений отмечены Почетными дипломами.
Публикации. По теме диссертации опубликовано 40 научных работ, из них 10 статей в рецензируемых изданиях, рекомендованных ВАК России, 10 – в материалах международных и российских конференций, З учебных пособия, в том числе «Новые лекарственные формы индуктора эндогенного интерферона – анандина. Опыт применения в ветеринарии» (Гриф Минсельхоза России, 2006).
Объем и структура диссертации. Материалы диссертации изложены на 308 страницах компьютерного текста и включают введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, заключение, выводы, практические предложения, список использованной литературы (460 источников, из которых 328 отечественных и 132 иностранных). Работа содержит 36 таблиц, 19 схем, 4 цветных фотографии и 40 приложений.
ПРОГРАММА НАУЧНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
Материалы исследований
Новые лекарственные формы «Анандина»
Глазные-интраназальные
капли «Анандин»
Ушные капли «Анандин плюс»
2%-ная мазь «Анандин»
Ушные капли «Анандин»
Изучение безвредности на лабораторных животных
Мыши
Крысы
Морские свинки
Кролики-альбиносы
Отработка оптимальных доз и схем применения испытуемых препаратов
Лабораторные животные
Кошки
Широкие клиничекие испытания новых лекарственных форм
«Анандина» в ветеринарных клиниках мегаполисов
Российской Федерации
Объекты исследований
Кошки
Собаки
Ожидаемые результаты
Высокая терапевтическая эффективность препаратов при болезнях кошек и собак: сокращение сроков выздоровления животных
Утверждение нормативно-технической документации на новые препараты
Обоснование конкурентоспособности новых лекарств
с позиций:
клинической и
экономической
Востребованность
новых препаратов у ветврачей и расширение рынка отечественных лекарств
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1 Материал, объекты и методы исследований
Работа выполнена в течение 1998 – 2007 годов на базе кафедры фармакологии и токсикологии ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины», лаборатории научно-исследовательского общества «Медитэр», а также в государственных ветеринарных станциях по борьбе с болезнями мелких домашних животных и частных ветеринарных клиниках Санкт-Петербурга, Мурманска, Калининграда, Смоленска и Ярославля.
Опыты были поставлены на 120 белых мышах, 20 белых крысах, 60 морских свинках, 95 кроликах-альбиносах, 335 кошках и 620 собаках различных пород.
Объектом исследований стало сложное низкомолекулярное химическое соединение –1,2:5,6-ди-о-изопропилиден-α-D-глюкофураноза-3-0-(N,N-диметиламинопропил)-10-метиленкарбо-ксилат-9-акридон, именуемое далее как «Анандин®», включенное в состав лекарственных прописей четырех новых лекарственных форм глазных-интраназальных капель «Анандин», двух видов капель для ушей: «Анандин» и «Анандин плюс» и 2%-ной мази «Анандин».
Все исследования по безвредности новых лекарственных форм анандина проводили по общепринятым в фармакологии и токсикологии методам, в соответствии с Государственной Фармакопеей Российской Федерации (1990).
Дифференциальная диагностика дерматитов осуществлялась по методу, описанному Р.М. Васильевым (1995). На границе здорового и пораженного участков кожи у собак делали соскоб и готовили три препарата. Первый – нативный, содержащий соскобленный эпидермис. Его помещали на предметное стекло с 2 каплями 10%-ного раствора едкого калия и проводили микроскопию при малом (8х7) и среднем (40х7) увеличении. Это позволяло исключить паразитарные болезни кожи и сделать предварительное заключение о наличие в эпидермальных клетках и волосяных луковицах микроорганизмов и микромицетов.
Кроме того, при появлении на месте соскоба тканевой жидкости и крови, готовили второй и третий препараты – мазки-отпечатки. Оба препарата окрашивали по методу Филипсона и подвергали микроскопии при большом (90х7) увеличении. Второй препарат служил для идентификации микрофлоры в пораженном очаге. На основании третьего препарата выводили цитограмму, для выведения которой подсчитывали 200 клеток.
В ходе эксперимента определяли содержание лизосомально-катионных белков в нейтрофильных гранулоцитах капиллярной крови области поражения по методу М.Г. Шубича (1974) и миелопероксидазы – по методу Грейма-Кнолля (1963); проводили количественное определение аутомикрофлоры кожи по Н.Н. Клемпарской и Г.А. Шальновой (1966) и рН кожи – по Г.П. Лепневу в модификации М.Я. Левина (1993).
Кровь для исследования брали до кормления из лучевой вены в две пробирки, в одной ее стабилизировали, а другая служила для получения сыворотки. В крови определяли число эритроцитов и лейкоцитов на СФЭКе, количество гемоглобина – на ФЭКе по Г.В. Дервизу и А.И. Воробьевой (1959), скорость оседания эритроцитов по Панченкову, мазки крови для выведения лейкограммы окрашивали по методу Филипсона, содержание лизосомально-катионных белков в нейтрофилах и содержание миелопероксидазы определяли методами описанными выше, фагоцитарную активность нейтрофилов – по В.В. Никольскому (1974), общий белок – рефрактометрическим способом, содержание иммуноглобулинов определяли методом дискретного осаждения по Ж. Бадину и Ф. Роусселету в модификации М.А. Костыны (1983). Идентификацию Т- и В-лимфоцитов в одном препарате проводили методом Е-РОК и ЗС–РОК (1985).
Статистическую обработку полученных данных проводили согласно методике Г.С. Григоряна с соавт. (1988).
Безвредность новых лекарственных форм анандина изучали согласно методам, представленным в руководстве М.А. Беленького (1963).
Моделирование грибковых инфекций и изучение противогрибковой эффективности 10%-ного раствора «Анандина для инъекций» и 2%-ной мази «Анандин» осуществляли согласно методикам, описанным Т.М.Кокушиной, А.П.Кашкиным и О.Н.Экземпляровым (1983).
Среднюю продолжительность жизни белых мышей с экспериментальной моделью генерализованного кандидоза рассчитывали по методу Пригге, рекомендуемому Г.Н. Першиным (1959), для вычисления средней гармонической. Гармоническая средняя продолжительность жизни подопытных животных в этом случае получается следующим образом: сумма обратных величин продолжительности жизни погибших животных делится на общее количество животных в группе. От полученного частного берется обратная величина, которая и является гармонической средней продолжительности жизни отдельного животного данной группы.
Широкие клинические испытания проводили в пяти городах Российской Федерации на двух видах мелких домашних животных: кошках и собаках. Терапевтическую активность глазных-интраназальных капель «Анандин» изучали при остром конъюнктивите и инфекционном ринотрахеите кошек, в сравнительном аспекте, одним животным назначая только глазные-интраназальные капли, другим в сочетании с 10%-ным раствором «Анандина для инъекций». Лечебную эффективность ушных капель «Анандин» при острых наружных отитах у собак изучали в сравнении с препаратами-аналогами, используемыми в медицинской и ветеринарной врачебной практике. Сравнительную терапевтическую активность ушных капель «Анандин плюс» изучали при отодектозе и отодектозе, осложненном отитом, у кошек и собак. Антимикотическую активность 2%-ной мази «Анандин» изучали при питироспорозе и поверхностном кандидозе кожи у собак. Диагнозы при проведении широких клинических испытаний в каждом случае ставили комплексно с учетом клинической картины, лабораторного подтверждения и эпизоотической ситуации.