Фармако-токсикологическая и терапевтическая оценка новых лекарственных форм анандина 16. 00. 04 Ветеринарная фармакология с токсикологией
| Вид материала | Автореферат |
- Токсикологическая оценка и экспериментальное обоснование применения полиферментных, 621.59kb.
- Программа-минимум кандидатского экзамена по специальности 16. 00. 04 «Ветеринарная, 204.06kb.
- Комплексный антибактериальный препарат на основе доксициклина и линкомицина для лечения, 374.02kb.
- "Ветеринарная и клиническая фармакология. Токсикология" Специальность: 111201 Ветеринария, 237.1kb.
- Примерная программа наименование дисциплины «Ветеринарная фармакология. Токсикология», 419.87kb.
- «Клиническая фармакология» Специальность: 111201 Ветеринария Пояснительная записка, 94.74kb.
- Клиническая эффективность и фармакоэпидемиология лекарственных средств у детей с аллергическим, 462.25kb.
- 1. Терапевтическая ценность и химический состав лекарственных растений, 308.39kb.
- Фундаментальные аспекты создания на основе минерала бишофит магний-содержащих лекарственных, 1046.55kb.
- Положение о лицензировании производства лекарственных средств проходит общественную, 36.89kb.
2.2.9.Клинические испытания ушных капель «Анандин»
Широкие клинические испытания ушных капель «Анандин» проводили в сравнении с препаратами-аналогами в нескольких городах РФ на собаках различных пород и возраста с диагнозом острый наружный отит. В качестве комплексных препаратов-аналогов для сравнительной оценки терапевтической активности нового препарата использовали следующие официнальные ушные капли: «Софрадекс®» (содержащий в своем составе неомицин, грамицидин, дексаметазон), «Аурикан®» (метасульфобензоат натрия, гексамедина изотионат, тетракаина гидрохлорид, линдан) и «Отоферонол®» (циклоферон, изопропиловый спирт, полиэтиленоксид).
В эксперименте задействовали 400 собак, которых условно подразделили на 4 опытные группы. Всем животным лекарственные препараты назначали 2 раза в день в течение 10 дней, в дозе для собак малых пород – 3 капли, для средних и крупных пород – 4-5 капель в каждое ухо, для «Аурикана» – 5-10 капель. Пациентам из 1-ой опытной группы закапывали ушные капли «Анандин», из 2-ой опытной группы – «Софрадекс», из 3-ей опытной группы – «Аурикан», из 4-ой опытной группы – «Отоферонол». На протяжении всего эксперимента вели наблюдение за изменениями клинической картины болезни, отмечали сроки купирования патологического процесса.
Полученные данные наглядно иллюстрируют, что при первичном остром наружном отите лекарственные средства дают положительный терапевтический эффект более чем в 60% случаев, особенно если в их состав входят антибиотики или антисептики широкого спектра действия, а также глюкокортикоиды и местные анестетики («Софрадекс» и «Аурикан»). Однако следует особенно подчеркнуть, хороший терапевтический результат, полученный в 1-й опытной группе, где применяли новый лекарственный препарат – ушные капли «Анандин». В его составе не было ни глюкокортикоидов, ни местных анестетиков, но количество исцелившихся животных составило 92%. Высокий противовоспалительный эффект от применения новых ушных капель был обусловлен фармакологическими эффектами «Анандина», а именно способностью индукции высоких титров эндогенного интерферона в больном организме, запускающего каскад выработки противовоспалительных цитокинов. Содержание Грамицидина С в составе капель, позволило оказать быстрое и сильное бактерицидное действие, что также способствовало выздоровлению большинства пациентов к 10-му дню в этой группе.
В группах, где применяли: «Софрадекс» к 10-му дню выздоровело 95% собак, «Аурикан» – 94%, «Отоферонол» – 64%. Самый низкий лечебный эффект получен в 4-й опытной группе. Следовательно, одного интерфероногенного препарата недостаточно для исцеления от острого гнойного отита. Залогом успешной терапии может быть лишь его сочетание с антибиотиками.
Таким образом, по терапевтической эффективности новый отечественный лекарственный препарат – ушные капли «Анандин», не уступает препаратам-аналогам: Аурикану и Софрадексу, превосходя Отоферонол, при лечении острого наружного отита у собак, являясь приемлемым по своей экономической стоимости для широкого круга потребителей.
2.2.10. Обоснование рецепта ушных капель
«Анандин плюс»
В международной ветеринарной практике для лечения животных, страдающих отодектозом, предложен целый ряд препаратов из разных химических групп. Однако наиболее перспективными лечебными средствами при отодектозе плотоядных считают пиретроиды в виду их высокой акарицидной способности и сравнительно низкой токсической активности.
Нами был модифицирован рецепт ушных капель «Анандин» включением синтетических пиретроидов: перметрина или циперметрина, тем самым, обеспечив препарату бактерицидные, регенерирующие и акарицидные свойства.
Схема 3
Рецепт ушных капель «Анандин плюс» (1)
Rp.: Sol. Anandini 10% pro injectionibus - 1 ml
Olei Ricini - 0,2 ml
Sol. Gramycidini C spirituosae 2% - 0,0125 ml
Spiritus isopropilici 9,8% - 3,75 ml
*Permetrini - 0,0025
Aquae destillatae ad 5 ml
M. D. S. Капли ушные.
Схема 4
Рецепт ушных капель «Анандин плюс» (2)
Rp.: Sol. Anandini 10% pro injectionibus - 1 ml
Olei Ricini - 0,2 ml
Sol. Gramycidini C spirituosae 2% - 0,0125 ml
Spiritus isopropilici 9,8% - 3,75 ml
* Cipermetrini - 0,0015
Aquae destillatae ad 5 ml
M. D. S. Капли ушные.
Циперметрин обладает более сильными акарицидными свойствами (примерно в 2 раза) по сравнению с перметрином, поэтому его количество в рецепте уменьшено на 0,001 г, что составляет около 40%.
2.2.11. Клинические испытания ушных капель
«Анандин плюс» при отодектозе кошек
Терапевтическую эффективность капель «Анандин плюс» изучали в сравнении с двумя препаратами, наиболее часто используемыми в практике ветеринарного врача: мазью «Акаробор» и «Неостомозаном».
Клинические испытания ушных капель «Анандин плюс» проводили на 120 кошках, различных пород, с массой тела 2,5-5,5 кг. Перед началом испытаний проводили клинический осмотр животных и по принципу аналогов формировали опытные группы по 20 кошек в каждой. Методом микроскопии у животных был подтвержден диагноз отодектоз. Каждый препарат применяли в 2-х группах: в одной – кошки, страдающие отодектозом, в другой – животные с симптомокомплексом отита и отодектоза. Всего было 6 групп.
Животным из 1-й группы назначали ушные капли «Анандин плюс» на 1-й, 2-й дни, а затем двукратно 1 раз в 5 дней, в дозе 3 капли в каждое ухо. Предварительно проводили тщательную обработку ушей. Кошкам из 4-й группы с симптомокомплексом отита и отодектоза тоже назначали «Анандин плюс» по аналогичной схеме. Во 2-й и 5-й группах опытным животным назначали мазь «Акаробор» по схеме: тонким слоем на 1-й, 2-й, 7-й, 12-й день, после обработки ушной раковины и слухового прохода. Кошкам из 3-й и 6-й групп назначали 0,1%-ный раствор «Неостомозана» в дозе 3 капли в каждое ухо по схеме аналогичной в 1-4-й группах. За животными вели наблюдение на протяжении двух недель. Учитывали характер изменения симптомов болезни, общее состояние кошек, скорость купирования патологического процесса. На 15-й день с момента начала лечения проводили повторную микроскопию материала, взятого с внутренней поверхности наружного уха и слухового прохода, на предмет обнаружения возбудителей Otodectes cynotis.
Из таблицы 2 видно, что ушные капли «Анандин плюс» являются эффективным акарицидным средством, по своей терапевтической активности не уступают эталону – мази «Акаробор» и могут быть рекомендованы для широкого применения в ветеринарии при отодектозе кошек. В тех случаях, когда течение отодектоза осложнял отит, выздоровление животных было медленнее. Особое внимание обращали на возможности препаратов оказывать не только этиотропное, но и патогенетическое и симптоматическое действие.
Применение политропных лекарственных средств при микст-болезнях, бесспорно является более эффективным, чем применение этиотропных препаратов, поскольку они, обладают сразу несколькими лечебными свойствами. Они удобны с практической и экономической точек зрения, а также доставляют меньше беспокойства больному животному.
Ушные капли «Анандин плюс» являются эффективным средством для лечения отодектоза и при его осложнении. При этом он не уступает по лечебному эффекту мази «Акаробор» и превосходит «Неостомозан» (на 5-20%%).
Таблица 2
Терапевтическая эффективность ушных капель
«Анандин плюс», «Акаробор» и «Неостомозан»
| Группа | Препарат | Диагноз | Количество здоровых кошек на 15-й день, % |
| 1 | «Анандин плюс» | Отодектоз | 95 |
| 4 | «Анандин плюс» | Отодектоз + отит | 1  0090 |
| 2 | «Акаробор» | Отодектоз | 95 |
| 5 | «Акаробор» | Отодектоз + отит | 100 90 |
| 3 | «Неостомозан» | Отодектоз | 90 |
| 6 | «Неостомозан» | Отодектоз + отит отит | 80 50 |
2.2.12. Клинические испытания ушных капель
«Анандин плюс» при отодектозе собак
Клинические испытания проводили на 60 собаках, различных пород, с массой тела 10,0-52,5 кг. На основании клинических признаков, с учетом эпизоотической ситуации и лабораторного подтверждения животным был поставлен диагноз отодектоз, в отдельных случаях осложненный отитом. Для лечения животных использовали три лекарственных препарата: ушные капли «Анандин плюс», мазь «Акаробор» и ушные капли «Отоферонол плюс». Условно формировали 6 групп по 10 голов в каждой.
Собакам из 1-й опытной группы с диагнозом отодектоз, назначали ушные капли «Анандин плюс» в дозе 4-5 капель в каждое ухо 1 раз в 5 дней, трехкратно. Животным из 2-й опытной группы, с диагнозом отодектоз осложненный отитом, также назначали капли «Анандин плюс» по ананлогичной схеме. Собакам из 3-й опытной группы, с диагнозом отодектоз и из 4-й опытной группы с диагнозом отодектоз осложненный отитом, назначали тонким слоем в каждое ухо мазь «Акаробор» 1 раз в 5 дней, трехкратно. Животным из 5-й опытной группы, с диагнозом отодектоз и из 6-й опытной группы с диагнозом отодектоз осложненный отитом, назначали ушные капли «Отоферонол плюс» из расчета 4-5 капель в каждое ухо, 1 раз в 5 дней, трехкратно. На протяжении двух недель за животными вели наблюдение, учитывали время исчезновения симптомов болезни. На 14-й день с момента начала эксперимента проводили повторное обследование методом микроскопии на предмет обнаружения возбудителей Otodectes cynotis в биоптате, взятом от каждой больной собаки.
В результате, проведенного лечения, в 1-й опытной группе выздоровели 9 собак из 10, во 2-й группе – 8; в 3-й группе – 9; в 4 и 5-й – по 8; в 6-й – 7 собак. Таким образом, ушные капли «Анандин плюс» являются эффективным терапевтическим средством при отодектозе (в том числе, осложненном отитом), не уступающим по своей акарицидной активности мази «Акаробор» и превосходящей ушные капли «Отоферонол плюс» на 10%.
2.2.13. Обоснование рецепта мази «Анандин»
Лекарственную композицию подбирали, руководствуясь следующими мотивами. Базисное лекарственное вещество анандин (глюкаминопропилакридон) – стимулирует выработку эндогенного интерферона в больном организме, повышает функциональную активность Т-лимфоцитов и макрофагов, что является важным для формирования антибактериального и противогрибкового иммунитета. Вспомогательные лекарственные вещества: калия салицилат и масло касторовое обеспечивают противовоспалительное и регенерирующее действие. Лекарственная форма длительное время хорошо удерживается на поверхности кожи благодаря основе – вазелину. Растворитель – дистиллированная вода.
Схема 5
Рецепт мази «Анандин»
Rp.: Glucaminopropilacridoni - 20,0
Kalii salicylatis - 1,0
Olei Ricini - 50,0
Vaselini - 800,0
Aquae destillatae ad 1000,0
M.f.unguentum
D.S. Наружное
2.2.14. Изучение местного
раздражающего действия 2%-ной мази «Анандин»
Широкий спектр мазей и часто встречающиеся случаи медикаментозных дерматитов предопределяют необходимость установления не только высоких терапевтических свойств нового лекарственного средства в сравнении с аналогами, но и тщательного изучения его безвредности.
Местное действие мази изучали на морских свинках с массой тела 250-300 г, и кроликах-альбиносах с массой тела 2,0-2,5 кг. Для каждого вида животных формировали опытную и контрольную группы: по 10 морских свинок и по 5 кроликов, в каждой группе. Степень токсического действия мази определяли методом многократных эпикутанных аппликаций. Животным из опытных групп на неповрежденную кожу с шерстным покровом в межлопаточной области наносили мазь «Анандин» (тонким слоем) 2 раза в день, в течение 2 недель. Для животных из контрольных групп использовали вазелин медицинский очищенный, аналогично. На протяжении всего опыта за животными вели клиническое наблюдение.
Согласно, полученным данным констатировали отсутствие воспалительной реакции на месте аппликации мази, зуда (расчесов), изъязвлений, пигментации, аллопеций, толщина кожной складки не изменялась. Следовательно, 2%-ная мазь «Анандин» не обладает местным токсическим и раздражающим действием.
2.2.15. Определение аллергенных свойств
анандиновой мази
Аллергеность анандиновой мази изучали в трех концентрациях (0,5%; 2% и 5%) методом эпикутанных аппликаций. Опыты проводили на морских свинках с массой тела 260-300 г и кроликах-альбиносах с массой тела 2-3 кг.
2.2.15.1. Опыт на морских свинках
Для проведения эксперимента было сформировано 4 группы по 10 лабораторных животных в каждой. Всем морским свинкам предварительно выстригали волосы на участке в области спины размером 2×3 см. Аппликации мази делали в направлении от задней трети спины к голове. Животных сенсибализировали путем многократных аппликаций мази на один и тот же участок кожи. Количество аппликаций составляло тридцать (2 раза в день, в течение 15-ти дней). Мази наносили в количестве 0,1-0,3 г, выдерживали 4 часа и удаляли стерильным ватным тампоном. Животным из 1-й опытной группы применяли 0,5%-ную анандиновую мазь; из 2-й группы – 2%-ную мазь; из 3-й группы – 5%-ную мазь. Морские свинки из 4-й группы служили контролем, им апплицировали вазелин медицинский очищенный.
Через 14 дней с момента последней аппликации на кожу свеже выстриженного участка спины наносили разрешающую дозу мази, соответствующей концентрации для каждой группы животных, через 24 часа анализировали место аппликации мази у лабораторных животных и учитывали наличие или отсутствие аллергической реакции. В результате проведенных манипуляций на месте приложения мази не было обнаружено инфильтрации, эритемы, изъязвления и некроза тканей. Таким образом, на морских свинках было показано, что анандиновая мазь, индифферентно концентраций: 0,5%, 2% или 5%, не обладает аллергенными свойствами.
2.2.15.2. Опыт на кроликах-альбиносах
Было сформировано 4 группы по 10 кроликов в каждой. Животных сенсибилизировали аппликациями мазей по следующей схеме: 2 раза в день, 10 суток подряд. Лабораторных животных из 1-ой опытной группы обрабатывали 0,5%-ной анандиновой мазью, из 2-й опытной группы – 2%-ной анандиновой мазью, из 3-й опытной группы – 5%-ной анандиновой мазью, из 4-й контрольной группы – вазелином медицинским очищенным. Мази наносили в количестве 0,3-0,5 г на предварительно выстриженный участок кожи спины в межлопаточной области размером 4×4 см. Аппликации делали в направлении от шеи к хвосту, мазь выдерживали 4 часа и удаляли стерильным ватным тампоном. Через 14 дней спустя с момента последней аппликации вновь эпилировали кожу на участке сенсибилизации и наносили разрешающую дозу изучаемого препарата, соответствующей концентрации. Через 24 часа учитывали клинико-морфологические изменения.
Согласно полученным данным, можно говорить о том, что мази на основе анандина не обладают выраженными аллергенными свойствами, но возможна индивидуальная повышенная к ней чувствительность. Так, у одного кролика из 1-й опытной (0,5% мазь) и у одного кролика из 3-й (5% мазь) опытной группы была эритема на месте приложения мази. При этом признаков инфильтрации, изъязвления и некроза тканей не было обнаружено ни у этих двух особей, ни у остальных животных. В виду того, что аллергическая реакция наблюдалась у лабораторных животных-альбиносов из групп, где применяли анандиновую мазь с минимальной и максимальной концентрацией базисного лекарственного вещества, можно предположить, что аллергическая реакция была обусловлена не самим анандином, а другими ингредиентами.
2.2.16. Изучение антимикотической активности «Анандина
для инъекций» на модели генерализованного кандидоза
у белых мышей
Всего в опыте использовали 60 лабораторных животных с массой тела 18-20 г. Для получения модели генерализованного кандидоза животным внутривенно инъецировали взвесь Candida albicаns в дозе 15 млн. клеток гриба на мышь, что в 5 раз превышает минимальную смертельную дозу для этого вида животных при данном способе введения препарата. Для выявления антикандидозной активности препарата мышам из опытных групп 10%-ный раствор «Анандина для инъекций» вводили внутримышечно в дозах 10 мг/кг и 100 мг/кг массы тела животных в течение 5 дней после заражения. Ввиду того, что критериями эффективности антимикотической терапии могут быть количество погибших животных и сроки их гибели, то результаты опыта оценивали по средней продолжительности жизни экспериментальных животных и выживаемости мышей.
Наиболее эффективной при лечении генерализованного кандидоза явилась доза «Анандина для инъекций» – 10 мг/кг массы тела. Так, в ходе опыта отметили гибель 45% лабораторных животных в 1-й опытной группе и 80% – во 2-й группе, тогда как в контрольной группе наблюдали 100%-ный летальный исход белых мышей. Благодаря иммуномодулирующим эффектам «Анандина для инъекций», в 1-й группе выжило 55% экспериментальных животных, а во 2-й группе – лишь 20%, то есть разница составила 35%. Продолжительность жизни белых мышей в контрольной группе была 4,85 суток. В группе, где терапевтическая доза «Анандина для инъекций» была увеличена в 10 раз, продолжительность жизни белых мышей составила 8,71 суток. У лабораторных животных получавших внутримышечно «Анандин для инъекций» в дозе 10 мг/кг массы тела – 11,28 суток, т.е. в первом случае, в 1,7 раза, а во втором – 2,3 раза больше, чем в контроле.
Результаты эксперимента подтвердили, что 10%-ный раствор «Анандина для инъекций» обладает антимикотической активностью в отношении Candida albicans. Наибольший эффект отметили при применении препарата в терапевтической дозе 10 мг/кг массы тела мыши.
2.2.17. Изучение антифунгального действия
2%-ной мази «Анандин» на экспериментальной модели
поверхностного кандидоза у лабораторных животных
Для изучения химиотерапевтической эффективности противогрибковых препаратов в эксперименте на модельных инфекциях необходимо для каждого конкретного случая подбирать восприимчивых животных. Руководствуясь этим правилом для получения локального инфекционного процесса на коже, спровоцированного Candida albicans в эксперименте были задействованы белые крысы и кролики-альбиносы.
2.2.17.1. Эксперимент на крысах
Опыт проводили на 20 клинически здоровых белых крысах, с массой тела 200-250 г. В опытной и контрольной группах было по 10 крыс. За 24 часа до заражения животным внутримышечно вводили 0,3 мл/гол. официнальной суспензии кортизона ацетата. Перед заражением выстригали шерсть на коже спины, размером 1,5х2 см и обрабатывали бесшерстный участок 70º этиловым спиртом. Затем эпилированную кожу осторожно скарифицировали. Заражение проводили эпикутанным способом взвесью двухсуточной культуры гриба Candida albicans (концентрация 500 млн.кл./мл), предварительно растертой в ступке с кусочками агара Сабуро. В течение семи дней вели наблюдение за экспериментальными животными. Уже через сутки с момента заражения на контактной поверхности отмечали гиперемию, позднее образовывались корочки с эрозивной поверхностью под ними. По периферии поражения на 5-6-й дни возникали мелкие пузырьки. При посеве патологического материала, взятого на границе участка поражения от каждого животного, на агаре Сабуро наблюдали активный рост колоний гриба Candida albicans.
С 7-го дня белым крысам из опытной группы назначали 2%-ную мазь «Анандин». Курс лечения был следующим: ежедневно в течение пяти суток, 2 раза в день на пораженный участок наносили испытуемую мазь. Лабораторных животных из контрольной группы лечению не подвергали. На 14-й день с момента начала эксперимента констатировали полное клиническое выздоровление белых крыс в опытной группе. Микроскопия биоптата на границе локуса заражения подтвердила достоверность сделанных выводов. При этом в изолированных соскобах наблюдали единичные скопления дрожжеподобных клеток, но мицелиальные нити отсутствовали (сапрофитная форма гриба).
Одновременно у животных в контрольной группе процесса заживления и регенерации тканей на участке заражения не было. К 21-му дню регистрировали спонтанное выздоровление восьми из десяти белых крыс. У 2-х крыс по-прежнему отмечали образование мелких пузырьков, десквамацию эпителия и зуд в области места заражения. Микроскопия эпидермиса с границы зоны поражения показала скопление дрожжеподобных клеток и единичных мицелиальных нитей, что свидетельствовало о развитии патологического процесса в коже, спровоцированного грибом Candida albicans.
На основании полученных данных можно сделать вывод о том, что применение 2%-ной мази «Анандин» для лечения крыс с кандидозным поражением кожи было эффективным и позволило купировать сроки выздоровления животных в среднем на 10-12 дней, по сравнению с контрольными, а так же способствовало активной регенерации пораженной ткани.