Фармако-токсикологическая и терапевтическая оценка новых лекарственных форм анандина 16. 00. 04 Ветеринарная фармакология с токсикологией
| Вид материала | Автореферат |
- Токсикологическая оценка и экспериментальное обоснование применения полиферментных, 621.59kb.
- Программа-минимум кандидатского экзамена по специальности 16. 00. 04 «Ветеринарная, 204.06kb.
- Комплексный антибактериальный препарат на основе доксициклина и линкомицина для лечения, 374.02kb.
- "Ветеринарная и клиническая фармакология. Токсикология" Специальность: 111201 Ветеринария, 237.1kb.
- Примерная программа наименование дисциплины «Ветеринарная фармакология. Токсикология», 419.87kb.
- «Клиническая фармакология» Специальность: 111201 Ветеринария Пояснительная записка, 94.74kb.
- Клиническая эффективность и фармакоэпидемиология лекарственных средств у детей с аллергическим, 462.25kb.
- 1. Терапевтическая ценность и химический состав лекарственных растений, 308.39kb.
- Фундаментальные аспекты создания на основе минерала бишофит магний-содержащих лекарственных, 1046.55kb.
- Положение о лицензировании производства лекарственных средств проходит общественную, 36.89kb.
2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.2.1. Обоснование лекарственной формулы
глазных-интраназальных капель «Анандин»
Частые респираторные инфекции служат индикатором иммунодефицитных состояний и связанных с ними осложнений, например, рецидивирующий, хронический ринит. Актуальность создания эффективных противовирусных глазных и интраназальных лекарственных форм очевидна.
В этой связи было предложено в качестве базисного лекарственного вещества использовать анандин в виде 10%-ного стерильного раствора по ТУ 080-64-19-50 в количестве 20% от общего объема раствора. В качестве растворителя, для обеспечения изотоничности и стерильности, использовали воду для инъекций (ГФ Х, ст.74). Для пролонгирования действия и замедления всасывания, а также чтобы придать вязкость раствору в состав лекарственной формы вводили глицерин (ГОСТ 6259-75) в количестве 5% от общего объема. Воду для инъекций вводили в состав препарата в количестве необходимом для получения 100% объема лекарственного средства.
Высокая противовирусная активность анандина в отношении ДНК- и РНК-геномных вирусов, способность индуцировать синтез интерферона в больном организме: INF-α, активирующего естественные киллеры, ингибирующего репродукцию вирусов и пролиферацию клеток и INF-γ, проявляющего иммунорегуляторные и антипролиферативные свойства, а также усиливающего эффекторные функции макрофагов, их антимикробную активность; стимулирующего выработку туморнекротизирующего фактора-альфа; низкая токсичность и отсутствие аллергенных свойств явились основополагающими факторами создания новой лекарственной формы на его основе.
Схема 1
Рецепт глазных-интраназальных капель «Анандин»
Rp.: Sol. Anandini 10% pro injectionibus - 20 ml
Glycerini sterilisatae - 5 ml
Aquae pro injectionibus ad 100 ml
M. sterilis
D.S. Капли глазные-интраназальные
Разработанный препарат обладает стерильностью, удовлетворяя первое и основное требование, предъявляемое к глазным каплям. В связи с тем, что концентрация лекарственных веществ в глазных каплях не превышает 3% препарат отвечает требованию – изотоничности, так как это означает, что осмотическое давление полученного раствора приближается к осмотическому давлению слезной жидкости. Из чего следует, что болевой эффект при инстилляции его в глаза будет нивелирован. Использование глицерина в составе лекарственной формы обеспечивает ее вязкость, способствует пролонгированию терапевтического действия на месте приложения и стабильности препарата, что удовлетворяет третьему требованию. Отсутствие механических примесей заведомо обеспечило агрегатное состояние составляющих прописи, а также обязательное фильтрование в конце технологического цикла приготовления лекарственной формы.
Соответствие рецепта глазных-интраназальных капель «Анандин» основным положениям Государственной Фармакопеи Х (ст.319) позволило нам продолжить исследования, следующим этапом которых стало изучение безвредности и терапевтической активности нового препарата.
2.2.2. Изучение местного раздражающего действия
глазных-интраназальных капель «Анандин»
При изучении местного действия на конъюнктиву испытуемые капли инстиллировали однократно кроликам-альбиносам, с массой тела 2,0-2,5 кг и многократно (4 раза в день в течение недели) кошкам различных пород, с массой тела 2,5-5,5 кг. Контрольным животным инстиллировали по две капли изотонического раствора натрия хлорида для инъекций.
Установили, что капли глазные-интраназальные «Анандин» не обладают местным раздражающим действием на слизистую оболочку глаз кроликов и кошек. Признаки воспаления, отек, гиперемия, слезотечение, ожег и болевая реакция отсутствовали, состояние век было удовлетворительным.
2.2.3. Изучение аллергенных свойств
глазных-интраназальных капель «Анандин»
В опыте задействовали 10 кроликов-альбиносов, с массой тела 2,0-2,5 кг. Пять кроликов сенсибилизировали, пять – являлись контрольными. Для сенсибилизации использовали дозу, составляющую одну каплю тестируемого препарата. Препарат в указанной дозе инстиллировали в конъюнктивальный мешок каждого глаза кроликам из опытной группы, ежедневно в течение трех суток. Затем делали перерыв и на 8-й день вводили еще один раз в той же дозе. Спустя 14 дней с момента первой инстилляции препарата, его в той же дозе вносили в конъюнктивальный мешок обоих глаз как опытных, так и контрольных животных. Наблюдение вели в течение первого часа с момента введения разрешающей дозы. В результате опыта установили что новый препарат не вызывает воспаления в глазу, слезотечения и анафилактического шока у лабораторных животных. Следовательно, глазные-интраназальные капли «Анандин» не обладают аллергенными свойствами.
2.2.4. Клинические испытания
глазных-интраназальных капель «Анандин»
при остром конъюнктивите кошек
В клинических исследованиях были задействованы 60 кошек различных пород в возрасте от 2,5 до 5 лет, с массой тела от 2 до 5,5 кг с диагнозом острый конъюнктивит. Условно было сформировано 2 группы по 30 животных в каждой. Животным из 1-ой опытной группы в терапевтических целях назначали капли глазные-интраназальные «Анандин», а кошкам из 2-ой опытной группы – тетрациклиновую глазную мазь. Оба препарата назначали курсом: 4 раза в день, в течение 10 дней.
Об эффективность лечебного действия препаратов судили по срокам купирования патологического процесса, скорости исчезновения неблагоприятных клинических признаков, стабильности изменения симптомокомплекса под действием лекарств, отсутствию рецидивов болезни.
В результате проведенного терапевтического курса в 1-ой опытной группе, где применяли новые глазные-интраназальные капли «Анандин» выздоровели 24 кошки (80%), для 6-ти кошек с конъюнктивитом, вызванным хламидиями понадобилось дополнительное назначение этиотропного препарата. Во 2-ой опытной группе, где применяли тетрациклиновую глазную мазь, констатировали выздоровление всех кошек.
Таким образом, было показано, что в случае острого конъюнктивита, обусловленного разнообразными возбудителями, назначение только капель глазных-интраназальных «Анандин» может быть не достаточным для выздоровления 100% кошек.
2.2.5. Терапевтическая активность глазных-интраназальных капель «Анандин» при инфекционном ринотрахеите
Клинические испытания проводили на 75 кошках различных пород в возрасте от 1 до 3 лет, с массой тела от 2 до 6 кг, больных инфекционным ринотрахеитом. Поскольку животных подбирали для опыта по принципу аналогов, то у всех пациентов отмечали хорошо выраженный острый ринит и конъюнктивит. Диагноз на общее заболевание ставили комплексно с учетом анамнеза, клинических признаков, эпизоотической ситуации и данных лабораторного исследования. Было сформировано 3 группы по 25 особей в каждой. Кошкам из 1-ой опытной группы назначали: капли глазные-интраназальные «Анандин» 3 капли/глаз, 3-4 раза в день в течение 10 дней; ампициллин или окситетрациклин в терапевтических дозах в течение 5 дней, для контроля развития возможных осложнений, обусловленных секундарной бактериальной микрофлорой, а также витамины А, С и группы В курсом в терапевтических дозах. Животным из 2-ой опытной группы назначали аналогично, капли глазные-интраназальные «Анандин», но в течение недели, а также «Анандин для инъекций» из расчета 10 мг/кг массы тела подкожно или внутримышечно 1 раз в сутки, 3 дня подряд и витамины А, С и группы В курсом. Пациентам из 3-ей опытной группы назначали традиционное лечение, заключающееся в применении антибиотиков широкого спектра действия, с целью предупреждения развития вторичной бактериальной инфекции. А именно, парэнтерально назначали ампициллин или окситетрациклин в терапевтических дозах в течение недели, тетрациклиновую глазную мазь 3-4 раза в день и витамины, указанные выше, в лечебных дозах курсом.
На протяжении всего курса лечения осуществляли ежедневный мониторинг за состоянием здоровья пациентов, а на десятый день анализировали сравнительную эффективность лечения во всех группах.
Анализируя полученные результаты терапии в динамике необходимо подчеркнуть следующие моменты. Несмотря на то, что одинаково успешным было лечение животных в 1-ой и 2-ой опытных группах, скорость купирования неблагоприятных клинических признаков была быстрее, и выздоровление пациентов наступало раньше во 2-ой опытной группе. По нашему мнению, это было обусловлено, во-первых, местным применением препарата при вирусном конъюнктивите, во-вторых, за счет системного действия как противовирусного, так и иммуномодулирующего «Анандина для инъекций» и, в-третьих, за счет ограничения стрессового воздействия манипуляции инъецирования, благодаря короткому – 3-х-дневному курсу применения анандина. В итоге был получен быстрый и стойкий терапевтический эффект.
По результатам лечения животных из 3-ей опытной группы, следует отметить, что отсутствие этиотропного компонента терапии, безусловно, затягивает процесс выздоровления. В нашем случае, терапевтический курс (10 дней) оказался недостаточным для выздоровления семи пациентов из двадцати пяти. Таким образом, терапия кошек, страдающих герпесвирусной инфекцией, с включением препаратов анандина является эффективной и сокращает сроки выздоровления животных в среднем на 4 дня.
2.2.6. Обоснование рецепта ушных капель «Анандин»
Наружный отит – часто встречающийся диагноз у собак. В связи с этим, разработка и внедрение новых препаратов для лечения животных с отитами всегда будет актуальной, что обусловлено существованием многообразия возбудителей, разнообразием их сочетаний в процессе течения болезни, индивидуальными особенностями организма пациентов и скоростью их привыкания к тем или иным препаратам.
Примерно двадцать лет назад для лечения мелких домашних животных, страдающих отитами, специалисты использовали медицинские препараты, или антибиотикотерапию. В настоящее время появились и ветеринарные препараты. Однако по объективным причинам вопрос создания новых лекарственных форм в этой области остается открытым. В связи с этим нами был разработан рецепт новой лекарственной формы анандина – ушных капель.
Схема 2
Рецепт ушных капель «Анандин»
Rp.: Sol. Anandini 10% pro injectionibus - 1 ml
Olei Ricini - 0,2 ml
Sol. Gramycidini C spirituosae 2% - 0,0125 ml
Spiritus isopropilici 9,8% - 3,75 ml
Aquae destillatae ad 5 ml
M.D.S. Капли ушные
Согласно рецепту в состав новой лекарственной формы для наружного применения – ушных капель «Анандин» были включены следующие компоненты. Стерильный 10%-ный раствор анандина для обеспечения мобилизации местных защитных и противовоспалительных реакций, за счет: стимуляции выработки эндогенного интерферона, способного осуществлять антибактериальное, противовирусное и противогрибковое действие; повышения функциональной активности Т-лимфоцитов и макрофагов, обеспечивающих нейтрализацию патологических агентов; выброса интерлейкинов, оказывающих противовоспалительное действие. Масло как заживляющее и очищающее средство. Антибиотик Грамицидин С, используемый в форме 2%-ного спиртового раствора, – незаменимый антимикробный компонент широкого спектра действия, в отношении стафилококков, стрептококков, синегнойной палочки, протея. Изопропиловый спирт и дистиллированная вода, выполняя функцию растворителя, объединяют все перечисленные лекарственные вещества в единую лекарственную форму – ушные капли.
2.2.7. Изучение безвредности ушных капель «Анандин»
Установлено, что анандин относится к группе низкотоксичных препаратов и при парэнтеральном применении выводится из организма в неизмененном виде в течение 16-20 часов через почки. Что же касается других лекарственных веществ, входящих в состав капель, то они очень давно применяются в ветеринарии и медицине в составе препаратов для наружного применения и, в качестве ингредиентов ушных капель «Анандин» они содержатся в такой малой дозе, что говорить о резорбтивном токсическом действии их не приходится. При этом с точки зрения безвредности наибольший интерес представляло – обладают ли ушные капли «Анандин» местным раздражающим действием и аллергенным свойствами, то есть, не будет ли их применение оказывать дополнительное негативное действие на животное, страдающее отитом. Поэтому мы изучили характер местного действия и аллергенные свойства новой лекарственной формы – ушных капель «Анандин» на кожу наружного слухового прохода здоровых домашних животных: собак и кошек.
2.2.7.1. Изучение местного раздражающего действия
и аллергенных свойств препарата
в опытах на собаках
Местное раздражающее действие ушных капель «Анандин» изучали на собаках различных пород и возрастных групп. В 1-ю опытную группу объединяли 10 щенков в возрасте 2 месяцев, которым инстиллировали испытуемый препарат по 2 капли в наружный слуховой проход правого уха, в левое ухо препарат не вносили, оно служило контролем. Процедуру осуществляли трехкратно: в первый, третий и пятый дни, чтобы удостовериться в объективности результата. Во 2-ю опытную группу объединяли 10 собак в возрасте от 2 до 5 лет разных пород, которым в наружный слуховой проход правого уха инстиллировали ушные капли «Анандин» из расчета 2-3 капли 2 раза в день в течение 5 дней, в левое ухо препаратов не вносили – оно служило контролем.
В результате установили: новая лекарственная форма не вызывает гиперемии, отека, шелушения, зуда и ожога на месте приложения у животных, то есть ушные капли не обладают местным раздражающим действием.
Аллергенные свойства новой лекарственной формы анандина изучали на 20 собаках в возрасте от 1 до 2,5 лет, клинически здоровых, принадлежащих к следующим породам: французский бульдог, стафордширский терьер, немецкая овчарка, пекинес, ротвейлер. Собаки каждой породы принадлежали к одному помету, содержались в аналогичных условиях и получали примерно одинаковое питание. Условно было сформировано 2 группы: опытная и контрольная, по 10 собак в каждой, из них по две собаки каждой породы представляли ту и другую группы. Собакам малых пород из опытной группы препарат вносили в каждое ухо по 3 капли, собакам крупных пород – по 5 капель по схеме: 1 раз в день, в течение 3-х дней подряд, затем еще один раз вносили препарат на 8-й день. На 14-й день с момента первичного применения ушных капель «Анандин» препарат инстиллировали, в указанной дозе животным обеих групп. Наблюдение вели в течение первого часа с момента последнего применения лекарственного средства и спустя 1 сутки.
В результате установили: ушные капли «Анандин» не обладают аллергенными свойствами, поскольку на месте приложения препарата не наблюдали характерных для аллергии признаков (гиперемия, отек, сыпь, зуд).
2.2.7.2. Подтверждение безвредности
нового препарата в опытах на кошках
Эксперимент по изучению возможного местного раздражающего действия ушных капель «Анандин» проводили на кошках различных пород, двух возрастных групп. В 1-ю опытную группу объединяли 10 котят в возрасте 3 месяцев, которым вносили изучаемый препарат в дозе 1 капля в наружный слуховой проход правого уха, в левое ухо служило контролем. Процедуру осуществляли трехкратно: в первый, третий и пятый дни. Во 2-ю опытную группу объединяли 10 кошек в возрасте от 2 до 3,5 лет разных пород, которым в наружный слуховой проход правого уха вносили ушные капли «Анандин» из расчета 2 капли 2 раза в день в течение 5 дней, а левое ухо служило контролем.
В результате применения ушных капель «Анандин» котятам и кошкам разных пород не было установлено у препарата наличия местного раздражающего действия. Это выражалось в отсутствии клинических признаков: гиперемии, отека, шелушения кожи, зуда и следов ожога. Кроме того, состояние кожи, как правого, так и левого уха экспериментальных животных не имело визуальных отличий по перечисленным параметрам.
Аллергенные свойства ушных капель «Анандин» изучали на 20 кошках в возрасте от 2,5 до 5 лет, клинически здоровых, принадлежащих к следующим породам: сиамской, сибирской, персидской и беспородных животных. Было сформировано 2 группы: опытная и контрольная, по 10 кошек в каждой, из них по две кошки каждой породы и четыре беспородных представляли ту и другую группы. Всем кошкам из опытной группы препарат вносили в каждое ухо по 2 капли по схеме: 1 раз в день, в течение 3-х дней подряд, затем еще один раз вносили препарат на 8-й день. На 14-й день с момента первичного применения ушных капель «Анандин» препарат инстиллировали, в указанной дозе животным из обеих групп. Наблюдение вели в течение первого часа с момента последнего применения лекарственного средства и спустя 1 сутки.
В результате установили: ушные капли «Анандин» не обладают аллергенными свойствами, поскольку при применении их кошкам констатировали отсутствие характерных для аллергии признаков как через 1 час с момента последнего применения лекарственного средства, так и спустя 1 сутки.
2.2.8. Определение антимикробных свойств
ушных капель «Анандин» in vivo
В виду того, что возбудителями воспаления наружного слухового прохода у собак наиболее часто являются стафилококки, α- и β-гемолитические стрептококки и протей мы применили новую лекарственную форму – ушные капли «Анандин» при инфекциях наружного уха с учетом профилирующего патологического действия одного из трех перечисленных возбудителей (на основании бактериологического исследования). Сформировали 6 опытных групп по 10 собак в каждой. Животные относились к разным породам, возраст их колебался от 2,5 до 6 лет, масса тела – от 7 кг до 35 кг. Для лечения животных из трех опытных групп использовали ушные капли «Анандин», а для собак из трех контрольных групп – специально подтированные антибиотики для каждого животного индивидуально, в зависимости от чувствительности основного возбудителя спровоцировавшего болезнь.
Животным из трех опытных групп назначали курсом ушные капли «Анандин» по схеме 3-4 капли в каждое ухо два раза в день в течение двух недель (в особо трудных случаях предполагалось продление курса терапии еще на одну неделю). Каждой собаке из 4-й контрольной группы назначали на основании индивидуальной антибиотикограммы тот бактерицидный препарат, который показывал наилучший результат in vitro в отношении Staphylococcus intermedius. Каждому животному из 5-й контрольной группы назначали на основании индивидуальной антибиотикограммы тот бактерицидный препарат, который показывал наилучший результат in vitro в отношении Streptococcus spp. И, наконец, каждому пациенту из 6-й контрольной группы назначали на основании индивидуальной антибиотикограммы тот бактерицидный препарат, который показывал наилучший результат in vitro в отношении Proteus vulgaris. Среди препаратов можно назвать: амоксиклав, цефалексин, цефотаксим, цефазолин энрофлоксацин, линкомицин, клоксациллин, неомицин, гентамицин и некоторые другие. Антибиотики назначали по показаниям, соблюдая дозирование и кратность применения для каждого препарата в отдельности на основании инструкции по применению, сроком от 2 до 3-х недель. Перед первичным применением лекарственных средств каждому животному проводили предварительную санацию наружного слухового прохода, которая заключалась в удаление шерсти из слухового прохода и промывании его теплым стерильным изотоническим раствором натрия хлорида или официнальным раствором хлоргексидина. При осуществлении повторных лечебных манипуляций, по обстоятельствам производили освобождение наружного слухового прохода или сухим стерильным ватным тампоном, или смоченным обозначенными препаратами. Об эффективности проводимого лечения судили по срокам купирования патологических симптомов и скорости выздоровления больных собак.
Таблица 1
Сравнительный анализ эффективности ушных капель
«Анандин» при лечении собак с диагнозом наружный отит
| Группа | Количество больных животных | Количество здоровых животных, к | ||
| 7 дню | 14 дню | 21 дню | ||
| 1-я опытная | 10 | 2 | 8 | - |
| 2-я опытная | 10 | 1 | 9 | - |
| 3-я опытная | 10 | 0 | 10 | - |
| 4-я контрольная | 10 | 2 | 6 | 2 |
| 5-я контрольная | 10 | 2 | 5 | 3 |
| 6-я контрольная | 10 | 0 | 7 | 3 |
Полученные результаты свидетельствуют о том, что антимикробная терапия была подобрана граммотно на основании учета чувствительности микробов к препаратам, однако этого оказалось недостаточно для восстановления положительного status quo в течение 2 недель. В то же время, обеспеченное ушными каплями «Анандин» иммуномоду-лирующее, противовоспалительное и регенерирующее действие сыграло положительную роль в достижении более быстрого терапевтического эффекта и позволило справиться с болезнью всем животным в течение двух недель. Повторное бактериологическое исследование ушного секрета подтвердило эффективность всех используемых в эксперименте препаратов. Однако, новая лекарственная форма – ушные капли «Анандин» не только обладает эффективным противомикробным действием по отношению к таким возбудителям как Staphylococcus intermedius, Streptococcus spp. и Proteus vulgaris, но и сокращает сроки выздоровления животных в среднем на 1 неделю.