Лабораторная работа 1 Тема. Определение групп крови системы аво. Определение резус-принадлежности
| Вид материала | Лабораторная работа |
- Определение отцовства по группе крови, 20.6kb.
- Определение группы крови и резус фактора, 54.77kb.
- Лабораторная работа определение влажности воздуха психрометром ассмана. Принадлежности:, 39.85kb.
- Направление № для исследования крови на резус-принадлежность и резус-антитела (нужное, 31.33kb.
- Тема отчётность, 87.45kb.
- Лабораторная работа №1 по дисциплине: Эксплуатационные материалы. Тема: определение, 400.84kb.
- Содержание лабораторная работа №1 Испытание портландцемента, 261.74kb.
- Наследование резус- фактора, 44.5kb.
- Определение системы. Сложные системы. Системный подход, 23.24kb.
- Лабораторная работа №29, 38.23kb.
Лабораторная работа 1
Тема. Определение групп крови системы АВО. Определение резус-принадлежности.
Работа 1. Определение групп крови. Под группами крови АВО понимают различные сочетания антигенов (агглютиногенов), находящихся в эритроцитах, и антител по отношению к ним (агглютининов), находящихся в плазме крови.
Существуют два групповых агглютиногена – А и В и два агглютинина – ά и β. Разные сочетания данных антигенов и антител образуют четыре группы крови: Оάβ (I), Аβ (II), Вά (III), АВо (IV).
Для установления группы крови используют стандартные сыворотки, содержащие определенный титр агглютининов или цоликлоны.
Использование стандартных сывороток. Для работы необходимы: стандартные сыворотки крови групп О (I), А (II) и В (III), двух различных серий для каждой группы; изотонический раствор натрия хлорида; белая пластина со смачиваемой поверхностью; пипетки; стеклянные палочки.
Ход работы. На левой стороне пластины напишите «О», в середине – «А», справа «В», на верхнем крае – фамилию и инициалы лица, у которого определяете группу крови. Под соответствующим обозначением группы крови на пластину нанесите по одной капле стандартной сыворотки групп О,А,В. Стандартные сыворотки берут двух различных серий для каждой группы, поэтому всего получится шесть капель, которые образуют два ряда. Рядом с каждой каплей сыворотки нанесите по капле крови. Затем перемешайте сухой стеклянной палочкой сыворотку и кровь. Причем для каждой пары (капля сыворотки и капля крови) необходимо использовать свою палочку. После перемешивания пластину необходимо покачать и оставить на 1-2 минуты в покое. В течение 3-5 минут наблюдайте за ходом реакции изогемагглютинации. После полного наступления агглютинации добавьте к смеси эритроцитов с сывороткой по капле изотонического раствора и перемешайте. Реакция изогемагглютинации может быть положительной или отрицательной. Результаты реакций в каплях с сыворотками одной и той же группы, но разных серий должны совпадать. При наличии агглютинации с сыворотками всех трех групп проведите дополнительное исследование с сывороткой группы АВ для исключения агглютинации, вызванной антиэритроцитарными аутоантителами. Результат должен быть отрицательный!
Результаты реакций с сыворотками трех групп О (I), А (II), В (III) могут давать четыре различные комбинации положительных и отрицательных реакций (см.табл.1).
Таблица 1
Интерпритация результатов определения группы крови системы АВО с использованием стандартных сывороток
| Результат реакции с сывороткой группы | Исследуемая кровь принадлежит группе | |||
| О | А | В | АВ | |
| - | - | - | Не требуется | О (I) |
| + | - | + | А (II) | |
| + | + | - | В (III) | |
| + | + | + | - | АВ (IV) |
Использование цоликлонов. Цоликлоны анти-А и анти-В предназначены для определения группы крови системы АВО человека вместо стандартных гемагглютинирующих сывороток. Определение группы крови при помощи цоликлонов анти-А и анти-В позволяет выявить наличие антигенов (агглютиногенов) А и В. Наличие антител (агглютининов) ά и β определяется в плазме исследуемой крови стандартными эритроцитами.
Цоликлоны анти-А анти-В являются продуктом гибридомных клеточных линий, полученных в результате слияния мышиных антителообразующих В-лимфоцитов с клетками мышиной миеломы. Цоликлоны не содержат антител иной специфичности и поэтому не вызывают неспецифической полиагглютинации эритроцитов. Время наступления реакции агглютинации и ее выраженность у цоликлонов выше, чем у гемагглютинирущих АВО-сывороток.
Для работы необходимы: цоликлоны анти-А, анти-В и анти-АВ; белая пластина (планшет) со смачиваемой поверхностью; пипетки; стеклянные палочки.
Ход работы. Нанесите на планшет индивидуальными пипетками цоликлоны анти-А, анти-В, анти-АВ по одной капле под соответствующими надписями. Рядом с каплями антител нанесите капли исследуемой крови. Смешайте кровь с реагентом. При легком покачивании наблюдайте за реакцией гемагглютинации в течение 3 минут. Результат реакции может быть положительным (эритроциты склеились) и отрицательным. Интерпритация результатов реакции агглютинации исследуемой крови с цоликлонами представлена в таблице 2.
При положительном результате реакции агглютинации со всеми тремя цоликлонами необходимо исключить спонтанную неспецифическую агглютинацию исследуемых эритроцитов. Для этого смешайте каплю исследуемой крови (эритроцитов) с каплей изотонического раствора хлорида натрия. Кровь можно отнести к группе АВ (IV) только при отсутствии агглютинации эритроцитов в изотоническом растворе.
Таблица 2
Интерпритация результатов определения группы крови системы АВО с использованием цоликлонов
| Результат реакции с цоликлоном | Группа исследуемой крови | ||
| Анти-А | Анти-В | Анти-АВ | |
| - | - | - | О (I) |
| + | - | + | А (II) |
| - | + | + | В (III) |
| + | + | + | АВ (IV) |
Рекомендации по оформлению протокола работы №1. Полученные результаты определения группы крови опишите в тетради. Сделайте рисунок, демонстрирующий агглютинацию эритроцитов в разных каплях сыворотки или цоликлона.
Работа 2. Определение резус-принадлежности (экспресс-метод).
Определение резус-принадлежности заключается в выявлении в эритроцитах крови человека наличия или отсутствия особого белка (антигена), названного резус-фактором. Выделяют три разновидности резус-антигена: D, C, E. Наибольшей активностью обладает антиген D, поэтому именно его определение имеет важное значение. Группы крови, в которых содержится антиген Rh (D), условно принято считать резус-положительными (Rh+), а группы крови, не содержащие антигена Rh(D), - резус-отрицательными (Rh-). Для определения резус-фактора в настоящее время используют стандартную сыворотку, содержащую определенный титр агглютининов или цоликлон анти-D.
Использование стандартных сывороток. Для работы необходимы: стандартная сыворотка анти-резус двух разных серий; белая планшета со смачиваемой поверхностью; пипетка; стеклянная палочка; изотонический раствор хлорида натрия.
Ход работы. На белую планшетку нанесите по капле стандартной сыворотки двух разных серий и по капле крови. Смешайте. Планшетку покачивайте в течение 3минут. Затем добавьте одну каплю изотонического раствора и через 2-3 минуты оцените реакцию. Она может быть положительной: появиление агглютинатов говорит о том, что кровь содержит резус-фактор. В этом случае кровь называют резус-положительной. Если же агглютинаты отсутствуют, то кровь называют резус-отрицательной, так как в ней не содержится резус-фактор.
Использование цоликлонов. Действующим началом цоликлона анти-D являются антитела, принадлежащие к классу иммуноглобулинов М. Они вызывают прямую агглютинацию эритроцитов, содержащих резус-фактор.
Для работы необходимы: цоликлон анти-D; белая пластинка со смачиваемой поверхностью; пипетка; стеклянные палочки.
Ход работы. На пластину нанесите большую каплю реагента, рядом поместите маленькую каплю исследуемой крови и смешайте. Агглютинация начинается через 10-15 секунд и заканчивается через 1- 3 минуты. Оценка реакции производится аналогично оценки реакции со стандартными сыворотками.
Рекомендации по оформлению протокола работы. Полученные результаты определения резус-фактора опишите в тетради. Сделайте рисунок, демонстрирующий агглютинацию эритроцитов в стандартной сыворотке или цоликлоне.