Влияние стронгилоидозной инвазии на морфологические, биохимические и иммунобиологические показатели крови и разработка методов их коррекции при терапии лошадей 03. 00. 19 паразитология
| Вид материала | Автореферат |
- Рабочая учебная программа по дисциплине Гематология Для специальности, 174.73kb.
- Ветеринарно-санитарная и технологическая оценка молока и морфо-биохимические показатели, 552.11kb.
- Влияние стрессовых ситуаций на организм спортивных лошадей и разработка методов, 404.72kb.
- Влияние цитратов металлов на биохимические показатели тканей и органов цыплят-бройлеров, 485.86kb.
- Иммуногематологическая оценка методов гемокомпонентной терапии у онкологических больных, 340.82kb.
- Семёнова евгения ивановна морфологические показатели периферической крови высококвалифицированных, 566.21kb.
- Воздействие соединений марганца на иммунобиологические и биохимические процессы в организме, 283.5kb.
- 4. медицинская паразитология, 400.43kb.
- Комитета Государственной Думы по здравоохранению Академик рамн колесников С. И. 10., 163.49kb.
- Глобулинового комплекс, который содержит 8 атомов меди и обладает оксидазной активностью,, 49.76kb.
На правах рукописи
ТКАЧЕНКО АНДРЕЙ ВЛАДИМИРОВИЧ
влияние стронгилоидозной инвазии на морфологические, биохимические и иммунобиологические показатели крови
и разработКА методОВ их коррекции
при терапии лошадей
03.00.19 – паразитология
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени
кандидата биологических наук
Тюмень – 2009
Работа выполнена в ФГОУ ВПО «Уральская государственная академия ветеринарной медицины», ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной энтомологии и арахнологии» Сибирского отделения Россельхозакадемии.
Научный руководитель: доктор биологических наук, доцент
Дерхо Марина Аркадьевна
(ФГОУ ВПО УГАВМ)
Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор
Степанова Татьяна Федоровна
(ФГУН тНИИКИП Роспотребнадзора)
кандидат биологических наук
Белецкая Наталья Ивановна
(ГНУ ВНИИВЭА СО РАСХН)
Ведущая организация – ГНУ «Уральский научно-исследовательский ветеринарный институт»
Защита диссертации состоится «7» июля 2009 г. в «1000» часов на заседании диссертационного совета ДМ.006.009.01 при Всероссийском научно-исследовательском институте ветеринарной энтомологии и арахнологии, по адресу: 625041, г.Тюмень, ул.Институтская, 2, ВНИИВЭА, телефон: (3452) 625703.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Всероссийского научно-исследовательского института ветеринарной энтомологии и арахнологии СО Россельхозакадемии и на сайте www.vniivea.ru.
Автореферат разослан «_____»______________2009 г.
Ученый секретарь
диссертационного совета,
кандидат биологических наук В.Ю.Неверов
-
Общая характеристика работы
АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ. Гельминтозы являются настоящей проблемой не только в силу их чрезвычайной распространенности, но также из-за потенциальной угрозы здоровью человека, которую несут эти заболевания. Паразитирование гельминтов в организме хозяина вызывает ухудшение общего состояния, нарушение работы многих систем и органов [Л.А. Бундина, 2005; М.А. Гузенок, 1983; В.А. Давидянц, 1984; Р.С. Кармолиев, 2007; Н.М. Колобкова, 2002; А.И. Саитбалова, 2000; В.А. Шабаев, 2000; М.В. Якубовский, 2005].
По данным ВИГИС и ВНИИВЭА в Якутии, Алтайском крае, Тюменской области у лошадей почти полностью восстановились гельминто- и эктофауна паразитов до уровня 20-х годов ХХ века. Инвазированность лошадей стронгилоидами и стронгилятами составляет 90-98%.
К настоящему времени достаточно полно изучены вопросы эпизоотологии гельминтозов, определен большой ряд факторов, способствующих развитию инвазии, освещены особенности морфологии и биологии паразитов. Исследования учёных доказывают, что появились устойчивые ассоциации гельминтов, которые вызывают заболевания с атипичным течением, невыраженными клиническими признаками и даже гибелью животных животных [М.А. Гузенок, 1983; Э.Х. Даугалиева с соавт., 1991; Н.В. Демидов, 1982]. Однако большинство аспектов патогенеза гельминтозов, особенно в районах Крайнего Севера остаются до сих пор во многом не ясными.
Поэтому, несмотря на большой арсенал антигельминтных препаратов, применяемых для лечения и профилактики гельминтозов, они не позволяют обеспечить эффективной терапии, без реинвазий, а, кроме того, в большинстве своём сами являются высоко токсичными для организма хозяина соединениями, обладают выраженной супрессивной активностью в отношении его организма. В связи с этим при их применении не всегда удается достичь нужного лечебного эффекта [А.Н. Герке, 2005; Э.Х. Даугалиева с соавт., 1991; С.В. Енгашев, 2003; Р.С. Кармолиев с соавт., 2007; Г.И. Колев с соавт., 2003; М.В. Якубовский с соавт., 1998].
Отсюда изучение роли некоторых морфологических, иммунобиологических и биохимических факторов крови в патогенезе стронгилоидоза лошадей, является не только актуальной проблемой, но и практически необходимой.
ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЙ. Цель исследований - изучить влияние стронгилоидозной инвазии на морфологические, биохимические и иммунобиологические показатели крови и разработать методы их коррекции при терапии лошадей.
Для реализации данной цели были поставлены следующие задачи:
1. Изучить гельминтофауну лошадей Ханты-Мансийского автономного округа;
2. Изучить сезонную динамику морфологических, иммунобиологических и биохимических параметров крови кобыл и установить роль морфологических, иммунобиологических и биохимических показателей крови в патогенезе стронгилоидоза жеребят;
3. Определить терапевтическую эффективность фенбендазола в виде 22%-го гранулята и пасты «Эквисект» при лечении инвазии;
4. Исследовать особенности фармакологического действия пасты «Эквисект» на уровень морфологических, иммунобиологических и биохимических показателей крови у интактных животных;
5. Дать оценку влияния пасты «Эквисект» на динамику изучаемых показателей крови после проведения лечебной дегельминтизации жеребят при стронгилоидозе;
6. Изучить терапевтическую эффективность и влияние на динамику морфологических, иммунобиологических и биохимических показателей крови жеребят комплексной схемы дегельминтизации, включающей антгельминтный препарат и Лигфол.
НАУЧНАЯ НОВИЗНА. Дана комплексная оценка роли морфологических, иммунобиологических и биохимических параметров крови в патогенезе стронгилоидоза жеребят в условиях Крайнего Севера. Установлено, что инвазия вызывает в организме животных анемию на фоне нейтрофильного лейкоцитоза со сдвигом ядра влево, угнетение факторов неспецифической резистентности и метаболической активности клеток печени.
Впервые использован в комплексной схеме лечения стронгилоидоза препарат лигфол, обладающий иммунно – антиоксидантной и гепатопротекторной активностью. По результатам исследований получен патента № 2337671 «Метод лечения стронгилоидоза лошадей», а также сведения, характеризующие перспективу и потенциальные возможности использования лигфола для повышения уровня неспецифической резистентности животных и терапевтической эффективности дегельминтизации.
ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ ИССЛЕДОВАНИЙ. Материалы исследований значительно расширяют представление о патогенезе стронгилоидоза лошадей, дают теоретическое обоснование для разработки комплексных схем лечения инвазий, обосновывают рациональный подход при выборе и назначении антигельминтных препаратов с точки зрения обеспечения эффективной и максимально безвредной для организма терапии.
Материалы и результаты исследований используются в учебных целях при изучении и ветеринарной паразитологии, патфизиологии, клинической биохимии на факультете ветеринарной медицины ФГОУ ВПО «УГАВМ», ФГОУ ВПО «МГАВМиБ им. К.И.Скрябина», а также внедрены в практику работы по профилактике и лечению стронгилоидоза лошадей в Ханты-Мансийском АО в КФХ «Веретельникова», «Богдашка».
ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:
1. гельминтофауна лошадей Ханты-Мансийского автономного округа;
2. Особенности белкового обмена, морфологических и иммунобиологических показателей крови в организме кобыл в зависимости от сезона года.
3. Влияние стронгилоидозной инвазии на состояние белкового метаболизма, уровень морфологических и иммунобиологических показателей крови жеребят.
4. Оценка терапевтической эффективности и влияния на уровень морфологических, иммунобиологических и биохимических показателей крови жеребят различных схем лечения стронгилоидоза лошадей.
АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ
Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены:
на семинаре «Перспективы применения лигфола в животноводстве», Москва, 2005, 2006 гг.
- на научно-производственной конференции молодых учёных, г. Троицк, 2006 г.
- на совещании ветспециалистов бюджетного учреждения Ханты-Мансийского автономного округа – Югры, г. Ханты-Мансийск, 2007 г.
- на совещании ветспециалистов Ханты-Мансийского района, 2007 г.
- на XVI Московском международном ветеринарном конгрессе, г. Москва, 2008 г.
ПУБЛИКАЦИИ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ. По теме диссертации опубликовано 9 научных статей, в том числе две статьи в изданиях, рекомендованных ВАК России, получен патент на изобретение.
ОБЪЁМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ. Диссертация изложена на 146 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, 3-х глав результатов собственных исследований, обсуждения, выводов и практических предложений, списка используемой литературы. Работа проиллюстрирована 31 таблицей и 9 рисунками. Список литературы включает 247 источников, в том числе 75 зарубежных авторов.
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материалы и методы исследований
Экспериментальная часть работа выполнена в 2005-2007 г.г. на базе КФХ «Веретельникова», «Богдашка», конноспортивной школы «Эскадрон» Ханты-Мансийского АО, Ханты-Мансийской Окружной ветеринарной лаборатории и на кафедре органической, биологической и физколлоидной химии ФГОУ ВПО «Уральская государственная академия ветеринарной медицины», лабораториях ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной энтомологии и арахнологии».
Для подтверждения диагноза использовали гельминтоовоскопические и гельминтолярвоскопические методы исследований фекалий [Демидов,1987].
Для проведения копрологических исследований пробы фекалий отбирали из прямой кишки или только что выделившиеся при испражнении, снимая верхнюю часть, не соприкасавшуюся с полом или почвой [Котельников, 1984]; микроскопировали соскобы с прианальных складок, исследовали также содержимое желудка и отделов кишечника при убое лошадей. Экстенсивность и интенсивность заражения животных гельминтами и эффективность препаратов при гельминтозах определяли копрологически с использованием методов флотации по Фюллеборну, личинок исследовали по методу Бермана в модификациях Орлова, Шильникова и Щербовича [Котельников, 1984].
Всего было обследовано 287 животных и проведено 1014 исследований.
Для изучения особенностей патогенеза стронгилоидоза лошадей и его лечения выполнено 4 серии экспериментов, в которых использованы 3-х летние кобылы и 1- 6 месячные жеребята породы обская местная. Опытные животные находились в одинаковых условиях содержания и кормления. Диагноз на стронгилоидоз ставили комплексно: на основании эпизоотологических данных, клинических признаков и результатов копрологических исследований фекалий. Всего в эксперименте использовано 60 лошадей породы «обская местная».
В I серии эксперимента изучали сезонную динамику морфологических, иммунобиологических показателей и уровень белкового обмена у кобыл.
Во II серии – особенности патогенеза стронгилоидоза лошадей. С этой целью было сформировано две группы жеребят (n=5). Первая группа контрольная, состояла из агельминтных животных; вторая опытная - из инвазированных. В крови лошадей определяли уровень морфологических, иммунобиологических и биохимических показателей.
В III серии – оценивали терапевтическую эффективность антигельминтных препаратов: фенбендазола в виде тимбендазола 22%-ного гранулята (в дозе 45 мг/кг) и пасты «Эквисект» (в дозе 2 г пасты на 100 кг массы тела) по результатам клинических признаков и копрологических исследований фекалий.
В IV серии - изучали влияние схем дегельминтизации на уровень морфологических, иммунобиологических показателей и белковых метаболитов в крови жеребят.
С этой целью было сформировано четыре опытные группы (n=5). Первая группа – агельминтные (интактные) животные, служили фоном влияния пасты «Эквисект» на организм жеребят. Вторая группа – спонтанно инвазированные животные, для дегельминтизации которых использовали пасту «Эквисект». Третья группа - для дегельминтизации животных совместно с пастой «Эквисект» применяли внутримышечно лигфол в дозе 0,025 мл/кг за три дня до дегельминтизации, в день дегельминтизации, на 5, 15 и 45-ый после неё. Четвёртая группа - инвазированные жеребята, служили фоном протекающей инвазии.
Терапевтическую эффективность схем дегельминтизации оценивали по клиническим признакам, результатам копрологических исследований фекалий, динамике морфологических, иммунобиологических и биохимических показателей крови.
Материалом для морфологических, иммунобиологических и биохимических исследований служила кровь, а для копрологических исследований фекалии опытных животных. Лабораторные исследования выполнены на базе Ханты-Мансийской Окружной ветеринарной лаборатории и на кафедре органической, биологической и физколлоидной химии ФГОУ ВПО «УГАВМ».
При исследовании фекалий использовали гельминтоовоскопический флотационный метод Ф. Фюллеборна и гельминтолярвоскопический метод Бермана-Орлова.
В сыворотке крови бактерицидную активность (БАСК) определяли фотоколориметрическим методом, используя в качестве тест-микроба суточный штамм Е. coli (500 млн. м. т./мл). При определении её лизоцимной активности (ЛАСК) индикатором служила сухая лиофилизированная форма Micrococus lisodecticus. Концентрацию циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) - методом селективной преципитации комплексов в 3,75%-ном растворе полиэтиленгликоля, с последующим фотоэлектроколориметрическим определением плотности преципитата. О фагоцитарной способности лейкоцитов судили по уровню фагоцитарной активности, числу и индексу. При определении фагоцитарной способности использовали суточную культуры E. co1i, убитую при температуре 70ºC нагреванием 30'. Фагоцитарный индекс рассчитывали путём деления общего количества фагоцитированных микробов на количество активных лейкоцитов. Фагоцитарное число - по отношению общего количества фагоцитированных микробов к количеству учтенных лейкоцитов. Подсчёт количества лейкоцитов и эритроцитов производили в счётной камере Горяева. Уровень гемоглобина определяли гемоглобин-цианидным методом; общего белка и альбуминов сыворотки крови биуретовой реакцией с использованием тест-наборов «Общий белок», «Альбумин»; активность аспартатаминотрансферазы (АсАТ) и аланинаминотрансферазы (АлАТ) в сыворотке крови колориметрическим методом с помощью тест-систем «АлАТ» и «АсАТ». Полученные данные статистически обработаны на персональном компьютере в программе «Microsoft Excel – 2003». Оценка достоверности различий между показателями производилась с использованием параметрического критерия Стьюдента и Фишера [Г.Ф. Лакин, 1980].
2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.2.1. анализ паразитологической ситуации в коневодстве
Ханты-мансийского автономного округа
Анализируя ветеринарную отчетность по округу за 1980-2005 годы, следует считать, что у лошадей из паразитарных болезней зарегистрированы только стронгилоидоз и параскаридоз.
Как показали результаты наших исследований официальная статистика, учитывающая лишь неблагополучные пункты по двум вышеназванным инвазиям, не отвечает истинной ситуации по гельминтозам лошадей в регионе.
Исследования лошадей на пораженность гельминтозами были проведены в хозяйствах и у частных коневладельцев округа. Массовому обследованию были подвергнуты лошади породы «обская местная», также исследовались фекалии беспородных лошадей и лошади различных пород, содержащиеся в конноспортивной школе «Эскадрон» Ханты-Мансийского АО. В результате выполненных нами паразитологических исследований в округе у лошадей было выявлено 7 нематодозов - стронгилоидоз (ЭИ=89,0%), оксиуроз (ЭИ=11,0%), параскаридоз (ЭИ=9,5%), стронгилятозы (ЭИ=38,0%), сетариоз (ЭИ=3,7%), драшейоз (ЭИ=2,5%) и габронематоз (ЭИ=1,5%) и 2 цестодоза: параноплоцефалидоз (ЭИ=2,1%) и аноплоцефалидоз (ЭИ=2,1%).
Наиболее значимой и причиняющей наибольший экономический ущерб коневодству округа инвазией лошадей является стронгилоидоз. Заражение жеребят стронгилоидозом происходит в первые дни жизни. Так, нами в пробах фекалий яйца стронгилоид были обнаружены в мае, при экстенсивности инвазии 12,2%. В последующие месяцы экстенсивность инвазии увеличивается и достигает максимума (100%) в январе-феврале. С возрастом инвазированность лошадей стронгилоидами снижается.
2.2.2. Сезонные изменения морфологических, иммунобиологических и биохимических показателей крови у кобыл
Сезонные изменения климата влияют на функциональную активность организма животных. Наиболее сильно это выражено на территориях, характеризующихся резкими погодными контрастами в различные периоды года. К такой географической зоне можно отнести и регионы Ханты – Мансийского АО.
Мы установили, что в крови кобыл максимальная концентрация эритроцитов и гемоглобина отмечается зимой, в декабре месяце (соответственно 8,62 ± 0,08 1012/л; 141,1 ± 2,00 г/л), а наименьшая летом, в июне (7,08 ± 0,09 1012/л; 117,4 ± 2,48 г/л). Считаем, что основной причиной является снижение величины парциального давления кислорода в воздухе зимой, влияющего на содержание оксигемоглобина.
Наибольший уровень лейкоцитов в крови соответствует осенним (9,48 ± 0,17 109/л) и зимним (9,92 ± 0,53 109/л) месяцам года, весной их концентрация снижается на 17,6%, что указывает на понижение уровня защитных сил организма лошадей. При этом в лейкограмме изменяется соотношение гранулоцитов и агранулоцитов, в основном за счёт падения процентного содержания нейтрофилов и увеличения лимфоцитов. На фоне весеннего снижения уровня лейкоцитов отмечается уменьшение БАСК на 16,5%, ЛАСК на 8,1% и уровня ЦИК на 30,5%. Аналогично изменяется и фагоцитарная способность лейкоцитов. При этом уменьшается как число клеток, участвующих в фагоцитозе, так и их функциональная активность до 15,62 ± 0,83%. Интенсивность фагоцитоза, оцениваемая по фагоцитарному индексу, составляет 0,77 ± 0,04 м.т., а фагоцитарное число 4,14 ± 0,17 м.т.
Одним из общих показателей жизнедеятельности организма служит уровень белкового обмена, являющийся обязательной составной частью «основного обмена». В сыворотке крови лошадей максимальная концентрация общего белка (81,28 ± 0,68 г/л), альбуминов (37,82 ± 0,51 г/л), глобулинов (43,38 ± 0,44 г/л), активность АсАТ и АлАТ (817,2 ± 17,05 и 134,9 ± 1,56 нкат/л) отмечена в зимний период года, а минимальная - летом. Весенний периода года характеризуется самой низкой концентрацией глобулинов 37,10 ± 0,45 г/л, за счёт чего повышается значение A1b / G1 коэффициента до 0,97 ± 0,01 (р ≤ 0,05).
Таким образом, весной происходит снижение уровня иммунобиологической реактивности организма кобыл, что, вероятно, повышает предрасположенность их организма к инвазированию гельминтами и их последующему развитию.
2.2.2. Особенности патогенеза стронгилоидоза жеребят
Ответ на внедрение и развитие гельминтов в организме животного – сложный многокомпонентный процесс, включающий цепь молекулярных и клеточных событий, которые развиваются в определенной последовательности [Я.Е. Коляков, 1986; И. Лафковитс, 1983; Р.В. Петров, 1982].
Стронгилоидоз жеребят сопровождается снижением уровня эритроцитов и гемоглобина в крови (табл. 1). Это обусловлено угнетением эритропоэза на фоне нарушения мукозного обмена в кишечнике [Е. Кунгурова, 2003] и гемолизом эритроцитов за счёт миграции паразитов по кровеносным сосудам в ходе биологического цикла развития [А.А. Стекольников с соавт., 2007].
Инвазия характеризуется лейкоцитозом, обусловленным возрастанием уровня EOS в 2,68 раза, общего количества нейтрофилов в 1,2 раза, MONO в 2 раза на фоне падения концентрации LYM в 2,5 раза.
Таблица 1 – Морфологические и биохимические показатели крови, n=5 (Х±Sx)
| Показатель | Группы животных | |
| Контрольная (агельминтные) | Опытная (инвазированные) | |
| Эритроциты, 1012/л | 8,08±0,15 | 4,06±0,13* |
| Гемоглобин, г/л | 135,8±2,43 | 80,60±1,76* |
| Лейкоциты, 109/л | 7,52±0,14 | 14,38±0,31* |
| Базофилы (BAS), % | - | 0,20±0,09 |
| Эозинофилы (EOS), % | 3,20±0,18 | 8,60±0,48* |
| Палочкоядерные Н, % | 4,00±0,21 | 7,80±0,43* |
| Сегментоядерные Н, % | 54,60±0,67 | 62,80±0,66* |
| Лимфоциты (LYM), % | 38,8±0,88 | 15,80±0,40* |
| Моноциты (MONO), % | 2,40±0,24 | 4,80±0,18* |
| Общий белок, г/л | 72,74±0,63 | 89,24±0,52* |
| A1b, г/л | 36,68±0,15 | 33,32±1,14* |
| G1, г/л | 36,06±0,52 | 56,16±1,13* |
| A1b/ G1 | 1,02±0,01 | 0,60±0,03* |
| АсАТ, нкат/л | 695,42±12,67 | 957,28±16,71* |
| АлАТ, нкат/л | 111,14±2,98 | 179,28±3,59* |
| АсАТ/АлАТ | 6,29±0,08 | 5,34±0,07* |
Примечание * - р ≤ 0,05-0,001 достоверно относительно контроля
При стронгилоидозе увеличивается концентрация ЦИК на 59,0% и составляет 34,6 ± 0,65% (р ≤ 0,001), что, во-первых, обусловлено недостаточной скоростью их утилизации на фоне повышенной антигенной нагрузки, а, во-вторых, свидетельствует об ингибировании функциональной активности иммунокомпетентных клеток по принципу обратной связи [С.Г. Осипов с соавт., 1984].
ЛАСК повышается до 28,98 + 0,61%, что выше уровня агельминтных животных на 30,6%, и обусловлено ростом в общем пуле лейкоцитов MONO и палочкоядерных нейтрофилов. БАСК возрастает на 45,6% по сравнению с контролем и составляет 75,32 ± 0,85%. Несмотря, на увеличение при стронгилоидозе общего количества нейтрофилов и БАСК, уровень фагоцитарной реакции у животных снижается. Прослеживается чёткая тенденция уменьшения как числа клеток, участвующих в фагоцитозе (фагоцитарная активность) на 25,2%, так и их функциональной активности. Интенсивность фагоцитоза (фагоцитарный индекс) падала на 32,2%, а фагоцитарное число на 37,4%.
Стронгилоидоз сопровождается повышением содержания общего белка в сыворотке крови на 22,7% (табл. 1), что, вероятно, обусловлено паразитарной диареей. Количество альбуминов снижается на 10%, а глобулинов повышается на 55,7%. За счёт этого значение Alb/Gl коэффициента уменьшается до 0,60 0,03. Каталитическая активность АсАТ увеличивается на 37,7%, АлАТ на 61,3% и изменяется их соотношение, оцениваемое по коэффициенту де Ритиса (АсАТ/АлАТ) на 17,8%. Причина - токсическое раздражение гепатоцитов продуктами жизнедеятельности паразитов, циркулирующих в крови, а также токсинобразующей микрофлоры кишечника.
Таким образом, стронгилоидоз жеребят сопровождается угнетением эритропоэза, нейтрофильным лейкоцитозом со сдвигом влево, эозинофилией, моноцитозом и лимфоцитопенией. Снижается фагоцитарная активность нейтрофилов, хотя возрастает концентрация ЦИК, БАСК и ЛАСК. Угнетается биосинтетическая активность гепатоцитов, усиливается «цитолиз» со стороны клеток печени.
2.2.3. Результаты лечения стронгилоидоза жеребят
В коневодстве используется большое количество антигельминтных препаратов, из которых мы использовали для дегельминтизации:
1) Фенбендазол в форме тимбендазола 22%-ного гранулята в дозе 45 мг/кг;
2) Ивермектин в виде пасты «Эквисект» в дозе 2 г на 100 кг живой массы.
Противопаразитарную эффективность оценивали по результатам клинического наблюдения и гельминтоовоскопических исследований фекалий.
Состояние жеребят после дегельминтизации было удовлетворительным, они охотно поедали корма, наблюдалось улучшение клинического состояния. При оценке терапевтической эффективности препаратов по данным копрологических исследований фекалий мы установили, что:
1) Фенбендазол имеет экстенсэффективность (ЭЭ) 90-100% вплоть до 30 суток после дегельминтизации; на 45-е сутки - 60 %, 90-е - 0%.
2) Паста «Эквисект» ЭЭ 90-100% обеспечивает в течение 15 суток после дегельминтизации, на 30-е сутки – 80, 45-е – 60 и 90-е - 50%.
Таким образом, паста «Эквисект» при лечении стронгилоидоза обладает более длительным терапевтическим эффектом. Поэтому именно он в дальнейшем нами был использован в схемах дегельминтизации.
2.2.4. Влияние пасты «Эквисект» на морфологические, иммунобиологические и биохимические показатели крови интактных жеребят
Антигельминтные средства, применяемые для лечения гельминтозов животных, являются небезразличными для организма хозяина [Н.Н. Озерецковская, 1975, 1987].
С этой целью мы выясняли характер влияния пасты «Эквисект» на динамику морфологических, иммунобиологических и биохимических показателей в организме интактных животных.
На фоне фармакологического действия нематоцида в крови интактных жеребят достоверно не изменялось количество эритроцитов и гемоглобина. Следовательно, препарат не влияет на дыхательную функцию крови. Уровень лейкоцитов снижался к 15-м суткам после введения препарата с 7,6 ± 0,10 до 6,6 ± 0,12 109/л (р ≤ 0,001). Это было обусловлено падением концентрации эозинофилов на 22-32% (р ≤ 0,01), палочкоядерных на 20-26% и сегментоядерных нейтрофилов на 6,9% (р ≤ 0,05), хотя содержание лимфоцитов и моноцитов повышалось, соответственно на 8,2-9,2 и 55,5-66,7% (р ≤ 0,05). Данные колебания не выходили за границы физиологической нормы и наиболее ярко были выражены на 5-е сутки после введения препарата животным.
Введение пасты «Эквисект» интактным животным вызывало увеличение уровня ЦИК на 5-е сутки исследований на 14,5%, на 15-е на 11,0% и составило, соответственно 25,98±0,55 и 25,18±0,78% (р ≤ 0,05), что указывает на возрастание антигенной нагрузки на организм жеребят. При этом нематоцид угнетал БАСК и ЛАСК. Наиболее сильно данные изменения были выражены на 15-е сутки после введения в организм животных препарата. Их уровень падал, соответственно на 20,5 и 18,1%, что составило 41,28 ± 0,93% (р ≤ 0,001) и 17,86 ± 0,70 % (р ≤ 0,05). Фармакологическое действие пасты «Эквисект» вызывало снижение фагоцитарной активности нейтрофильных лейкоцитов в течение 15 суток после введения, что, вероятно, обусловлено снижением общего количества нейтрофилов.
В сыворотке крови животных в первые 15 суток после введения препарата снижается содержание общего белка с 72,2 0,79 до 67,1 0,4 г/л (р ≤ 0,001), что обусловлено уменьшением концентрации альбуминов с 35,4 0,44 до 29,7 0,4 г/л (р ≤ 0,001) и ведет к падению значения Alb/Gl коэффициента на 16,7%. На фоне фармакологического действия нематоцида пасты «Эквисект» в организме жеребят возрастает каталитическая активность АлАТ на 11,8-23,9% (р ≤ 0,001), АсАТ на 7,5-9,5%. За счёт этого значение коэффициента де Ритиса уменьшается на 5,2-12,7% (р ≤ 0,05). Наиболее ярко эти изменения проявляются в течение 15 суток после введения препарата.
Оценивая влияние пасты «Эквисект» на организм интактных животных можно отметить, что он не обладает ярко выраженным токсическим действием на изучаемые нами показатели, хотя и вызывает некоторое изменение уровня иммунобиологической реактивности организма животных и функциональной активности гепатоцитов.
2.2.5. Влияние пасты «Эквисект» на морфологические, иммунобиологические и биохимические показатели крови жеребят после дегельминтизации
Препараты на основе ивермектина обладают широким спектром действия [W.C. Campell, 1989; I. Merck, 1996], влияя в организме хозяина на передачу нервных импульсов между нервными клетками или от нервной клетки к клетке мышечной ткани посредством γ-аминомасляной кислоты [A.W. Stretton, 1987].
Таблица 2 – Динамика морфологических показателей крови после дегельминтизации животных, n=10 (Х±Sx)
| Показатель | До лечения | Дни исследований после дегельминтизации | |||
| 5 | 15 | 30 | 45 | ||
| Гемоглобин, г/л | 81,4±1,2 | 89,1±0,7* | 104,8±0,8* | 106±2,3* | 104±3,2* |
| Эритроциты, 1012/л | 3,96±0,1 | 4,9±0,09* | 5,8±0,11* | 6,1±0,36* | 5,9±0,46* |
| Лейкоциты, 109/л | 15,0±0,3 | 13,6±0,2* | 11,8±0,28* | 11,2±0,4* | 11,7±0,6* |
| Базофилы, % | 0,2±0,09 | - | - | - | - |
| Эозинофилы, % | 9,8±0,31 | 5,0±0,33* | 4,0±0,39* | 4,2±0,48* | 5,4±0,72 |
| Палочкоядер. Н, % | 7,2±0,41 | 5,8±0,27* | 4,8±0,41* | 4,6±0,46* | 5,6±0,61* |
| Сегментоядер. Н, % | 64,2±1,1 | 63,2±0,62 | 58,6±0,68* | 57,4±1,9* | 60,0±2,06 |
| Лимфоциты, % | 13,8±0,7 | 20,0±0,6* | 26,2±0,52* | 28,2±1,7* | 24,0±1,9* |
| Моноциты, % | 5,0±0,33 | 6,0±0,33 | 6,4±0,28* | 5,6±0,19 | 5,0±0,49 |
| Общий белок, г/л | 88,620,9 | 79,10,9* | 71,10,56* | 66,90,47 | 65,80,47 |
| A1b, г/л | 33,40,8 | 24,90,8* | 22,00,8* | 20,50,6* | 21,40,5* |
| G1, г/л | 55,21,1 | 54,10,34 | 49,20,4* | 46,40,2* | 44,40,3* |
| Alb/Gl | 0,610,02 | 0,460,02* | 0,450,02* | 0,440,01* | 0,480,01* |
| АсАТ, нкат/л | 929,40 16,82 | 1181,2 27,57* | 1168,0 22,97* | 1066,0 25,41* | 991,20 23,03 |
| АлАТ, нкат/л | 168,42,2 | 242,83,6* | 240,85,2* | 215,43,8* | 198,04,1* |
| АсАТ/АлАТ | 5,50,04 | 4,90,1* | 4,90,08* | 4,90,01* | 5,00,03* |
Примечание * - р≤ 0,05-0,001 по отношению к показателям до лечения
При дегельминтизации спонтанно инвазированных жеребят пастой «Эквисект» уровень морфологических показателей крови практически сразу начинает нормализоваться (табл. 2) и к 15-м суткам после неё они достигают нижней границы физиологической нормы. Во-первых, восстанавливается дыхательная функция крови. Во-вторых, снижается интенсивность лейкоцитоза за счёт падения уровня EOS на 48,9-59,2%, общего числа нейтрофилов, как за счёт палочкоядерных (на 19,5-51,5%), так и сегментоядерных клеток (на 1,3-8,7%), повышения LYM на 44,9-89,9% и MONO на 20-28%. Однако к 45-м суткам исследований динамика морфологических показателей меняет свою направленность в сторону уровня «до лечения», что свидетельствует о повторном инвазировании гельминтами опытных животных. Это подтверждается и ЭЭ препарата (60%).
После дегельминтизации в крови лошадей возрастает уровень ЦИК на 23,0-28,9% (р ≤ 0,05). Вероятно, это обусловлено действием нематоцида и влиянием антигенов, выделяющихся при гибели паразитов. Несмотря на возрастание в крови ЦИК, значение БАСК и ЛАСК планомерно снижается и к концу периода исследований их величина, соответственно, была на 14,6 и 13,7% меньше, чем у здоровых животных. При этом состояние фагоцитарной защиты в течение всего периода исследований достоверно не отличалось от значений «до лечения». Следовательно, антигельминтный препарат не только угнетает биосинтез и созревание нейтрофилов, но также влияет на активность и интенсивность фагоцитоза.
Уровень общего белка планомерно снижался в течение всего периода исследований и на 45-е сутки после дегельминтизации был меньше на 9,7%, чем у животных контрольной группы. При этом, если у инвазированных жеребят доля альбуминов от общего белка крови составляла 37,7%, то после дегельминтизации уменьшалась до 30,0-32,0%, что свидетельствует об угнетении биосинтетической активности гепатоцитов.
Период после дегельминтизации сопровождался повышением цитолитической реакции со стороны клеточных мембран гепатоцитов. При этом активность АлАТ возрастала в начальный период после дегельминтизации на 42,09-44,2%, а АсАТ на 25,7 - 27,0%, сохраняясь на достаточно высоком уровне и к концу периода исследований, указывая на токсическое раздражение клеток печени.
Таким образом, лечебная дегельминтизация с помощью пасты «Эквисект» сопровождается: угнетением биосинтеза EOS, нейтрофилов и их фагоцитарной активности; снижением БАСК И ЛАСК на фоне возрастания уровня ЦИК; биосинтетической активности гепатоцитов и возрастанием цитолиза их клеточных мембран.
2.2.6. Оценка терапевтической эффективности комплексной схемы лечебной дегельминтизации
Для дегельминтизации жеребят нами использовалась комплексная схема химиотерапии, которая включала использование пасты «Эквисект» в дозе 2 г пасты на 100 кг массы тела и лигфол в дозе 0,025 мл/кг за три дня до дегельминтизации, в день дегельминтизации, на 5, 15 и 45-ый после неё.
Мы установили, что она обеспечивает в течение 90 суток после дегельминтизации ЭЭ на уровне 90-100%. Это сопровождается постепенной нормализацией уровня эритроцитов и гемоглобина, концентрации лейкоцитов в периферической крови (табл. 3). Лигфол корректирует фармакологическое действие пасты «Эквисект». Во-первых, уровень EOS постепенно снижается в пределах, адекватных снижению антигенной нагрузки на организм животных и уменьшения степени инвазии, что позволяет поддерживать их концентрацию в объёме достаточном для выполнения своих биологических функций. Во-вторых, активируется как биосинтез, так и созревание нейтрофилов. В-третьих, планомерно повышается содержание лимфоцитов и снижается моноцитов.
Таблица 3 – Динамика морфологических и биохимических показателей крови после дегельминтизации комплексной схемой, n=10 (Х±Sx)
| Показатель | До лечения | Дни исследований после дегельминтизации | |||
| 5 | 15 | 30 | 45 | ||
| Гемоглобин, г/л | 82,6±1,2 | 96,4±2,1* | 104,6±2,3* | 112,7±2,6* | 121,5±3,3 |
| Эритроциты, 1012/л | 3,5±0,18 | 4,1±0,20* | 5,9±0,19* | 7,29±0,25 | 7,53±0,25 |
| Лейкоциты, 109/л | 14,6±0,4 | 12,8±0,4* | 10,9±,51* | 9,6±0,47* | 8,63±0,38 |
| Эозинофилы, % | 9,2±0,53 | 7,5±0,52* | 6,0±0,49* | 5,6±0,56 | 5,4±0,43 |
| Палочкояд. Н, % | 7,0±0,54 | 7,3±0,67* | 6,4±0,94* | 3,80±0,59 | 3,20±0,47 |
| Сегментояд. Н, % | 64,0±1,2 | 63,6±1,2* | 62,6±1,0* | 54,9±1,37 | 53,2±1,51 |
| Лимфоциты, % | 14,8±1,1 | 18,1±0,9* | 21,9±1,2* | 33,1±1,5* | 35,5±1,75 |
| Моноциты, % | 5,0±0,5 | 3,5±0,58 | 3,1±0,53 | 2,6±0,45 | 2,7±0,52 |
| Общий белок, г/л | 88,71,4 | 90,01,03* | 82,11,50* | 74,61,15 | 74,00,93 |
| Alb, г/л | 29,30,52 | 35,20,43 | 32,50,82 | 31,751,1 | 32,20,66 |
| Gl, г/л | 59,41,0 | 54,80,3* | 49,60,8* | 42,90,7* | 41,90,8* |
| Alb/Gl | 0,490,005 | 0,640,008* | 0,660,01* | 0,740,03* | 0,770,03* |
| АсАТ, нкат/л | 923,6 20,51 | 1025,8 26,4* | 1013,0 26,5* | 768,4 30,03 | 743,3 26,36 |
| АлАТ, нкат/л | 171,92,76 | 210,96,11* | 204,26,61* | 122,83,01 | 114,64,22 |
| Коэф. де Ритиса | 5,380,13 | 4,890,14* | 5,000,19 | 6,260,29* | 6,480,21* |
Примечание * - р≤0,05-0,001, по отношению к показателям до лечения
После дегельминтизации в течение первых 15-ти суток возрастает количество ЦИК на 20,0-26,0%, затем нормализуется и к концу периода исследований достоверно не отличается от значений агельминтных животных. Уровень БАСК и ЛАСК, в первые, 15 суток после химиотерапии тоже был достоверно выше значений инвазированных животных, а затем постепенно снижался до физиологической нормы.
Мы считаем, что лигфол влияет на функциональную активность кроветворных органов, обеспечивая возрастание в крови количества нейтрофилов и их фагоцитарную способность, регулирует активность ферментов, обеспечивающих неспецифический иммунный ответ.
Комплексная схема лечения стронгилоидоза лошадей стимулирует белоксинтезирующую функцию гепатоцитов, за счёт чего возрастает доля альбуминов с 33% до 39,0-43,0% и увеличивается значение Alb/Gl коэффициента. При этом постепенно нормализуется каталитическая активность ферментов переаминирования, после предшествующего этому повышения в течение 15 суток от начала дегельминтизации АлАТ на 84,0-90,0%, АсАТ на 46,0-48,0. Вероятно, это обусловлено интенсификацией метаболических процессов в клетках печени.
Таким образом, комплексная схема лечебной дегельминтизации способствует коррекции фармакологического действия пасты «Эквисект», повышая её терапевтическую эффективность.
Выводы
1. На территории Ханты-Мансийского автономного округа у лошадей зарегистрировано 7 видов нематод: Strongyloides westeri, Oxyuris equi, Parascaris equorum, Strongylus equinus, Setaria eguina, Drascheia megastoma и Habronema muscae и 2 вида цестод: Anoplocephala magna и Paranoplocephala mamillana. Средняя многолетняя экстенсивность инвазии составляет: при стронгилоидозе 89,0%, оксиурозе 11,0%, параскаридозе 9,5%, стронгилятозах 38,0%, сетариозе 3,7%, драшейозе 2,5%, габронематозе 1,5%, параноплоцефалидозе и аноплоцефалидозе 2,1%.
2. Динамика морфологических, иммунобиологических и биохимических показателей в крови кобыл имеет сезонную зависимость. Максимальное значение уровня лейкоцитов соответствует осенним и зимним месяцам года и их концентрация колеблется 9,5-9,9 10\9 л, к весне происходит уменьшение на 17,6%.На фоне снижения уровня лейкоцитов отмечается уменьшение БАСК на 16,5 %, ЛАСК на 8,1 %, а ткже уровня ЦИК на 30,5%. Аналогично изменяется и фагоцитарная способность нейтрофилов. При этом уменьшается как число клеток, участвующих в фагоцитозе, так и их функциональная активность до 15,6%. Также весной, в организме кобыл снижается уровень иммунобиологической реактивности, что способствует развитию стронгилоид и последующему инвазированию жеребят.
3. Стронгилоидоз лошадей представляет собой сложный симптомокомплекс, развивающийся на фоне поражения организма хозяина паразитическими формами гельминтов, и патогенез которого сопровождается следующими изменениями крови:
а) уменьшением уровня эритроцитов и гемоглобина; лейкоцитозом, обусловленным повышенным содержанием в его общем пуле эозинофилов в 2,7 раза, нейтрофилов в 1,2 раза, моноцитов в 2 раза и резким падением концентрации лимфоцитов в 2,3 раза;
б) повышением количества циркулирующих иммунных комплексов на 59 %, бактерицидной на 45,6 % и лизоцимной активности сыворотки крови на 30,6%, но снижением фагоцитарной способности лейкоцитов на 25,2 %;
в) гиперпротеинемией на фоне гипоальбунемии, за счёт которой снижается значение Alb/Gl коэффициента; усилением «цитолитической» реакции гепатоцитов, сопровождающейся уменьшением значения коэффициента де Ритиса. Каталитическая активность АсАТ увеличивается на 37,7%, АлАТ на 61,3 %.
4. Терапевтическая эффективность антигельминтного препарата «Паста Эквисект» по экстенспоказателю при химиотерапии стронгилоидоза лошадей составила на 5-е сутки после дегельминтизации 100%, на 15-е – 90, 30-е – 80, 45-е – 60 и 90-е – 50%; фенбендазола в форме тимбендазола 22%-го гранулята, соответственно, 100, 90, 90, 60 и 0%.
5. Антигельминтный препарат «Паста Эквисект» в крови интактных животных в течение 15-ти суток после введения вызывает:
а) снижение уровня лейкоцитов, в лейкограмме которых уменьшается процентное содержания эозинофилов, но возрастание лимфоцитов и моноцитов;
б) повышение количества ЦИК, но снижение бактерицидной, лизоцимной активности сыворотки крови и фагоцитарной активности лейкоцитов;
в) уменьшение концентрации общего белка за счёт фракции альбуминов, но усиление синдрома «цитолиза» гепатоцитов и уменьшение значения коэффициента де Ритиса.
6. Антигельминтный препарат «Паста Эквисект» при дегельминтизации инвазированных жеребят вызывает следующие изменения в крови:
а) повышение уровня гемоглобина и эритроцитов, уменьшение активности лейкоцитоза за счёт снижения процентного содержания эозинофилов на 48-59 %, палочкоядерных нейтрофилов на 19-52 %, сегментоядерных на 2-9 % и увеличения моноцитов на 20-28 % и лимфоцитов на 45-90 %;
б) увеличивает количество ЦИК на 23-29 %, фагоцитарную активность лейкоцитов, но угнетает бактерицидную, лизоцимную активность сыворотки крови на 14-15 %;
в) снижение общего количества белка сыворотки крови на фоне гипоальбунемии, что сопровождается снижением значения Alb/Gl коэффициента, усиление синдрома «цитолиза» со стороны гепатоцитов и падение значения коэффициента де Ритиса
7. Комплексная схема дегельминтизации (антигельминтный препарат паста «Эквисект» + Лигфол) повышает ЭЭ антигельминтного препарата «Паста Эквисект» до 100-90% в течение 90-ти суток после дегельминтизации за счёт:
а) нормализации уровня гемоглобина, эритроцитов и клеток лейкоцитарного профиля;
б) восстановления уровня ЦИК, бактерицидной, лизоцимной активности сыворотки крови, фагоцитарной активности лейкоцитов;
в) влияния на содержание общего белка в сыворотке крови, белоксинтезирующей функции гепатоцитов и активность ферментов переаминирования.
2.4. Практические предложения
1) Для дегельминтизации жеребят при стронгилоидозе рекомендуем использовать комплексную схему, включающую пероральноее введение пасты «Эквисект» в дозе 2 г пасты на 100 кг массы тела и внутримышечно лигфол из расчёта 0,025 мл/кг за три дня до дегельминтизации, в день дегельминтизации, на 5, 15 и 45-ый после неё.
2) Научные результаты рекомендуется использовать при разработке методов лечения и профилактики гельминтозов сельскохозяйственных животных.
3) Основные положения диссертации могут быть использованы в учебном процессе при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий по клинической биохимии, патофизиологии и паразитологии сельскохозяйственных животных со студентами факультета ветеринарной медицины.
Список работ, опубликованных по теме диссертации
- Ткаченко, А.В. Влияние лигфола на дыхательную функцию крови лошадей в условиях Крайнего Севера / М.А. Дерхо, А.В. Ткаченко, С.Ю. Концевая // Ветеринарная клиника. – 2005. - № 1. – С. 20-23.
- Ткаченко, А.В. Влияние лигфола на иммунный статус лошадей в ходе химиотерапии стронгилоидоза / М.А. Дерхо, А.В. Ткаченко, Н.В. Нурмухаметов // Сб. тр. межд. совещания. – Москва, 2006. – С. 19-25.
- Ткаченко, А.В. Из опыта лечения стронгилоидоза лошадей в условиях Крайнего севера / А.В. Ткаченко // Мат-лы межд. науч.-практ. конф. молодых учёных. – Троицк, 2006. – С. 35-37.
- Ткаченко, А.В. Биохимическая оценка функций печени лошадей при стронгилоидозе / М.А. Дерхо, А.В. Ткаченко, Н.В. Нурмухаметов // Успехи современного естествознания. – 2007. - № 5. – С. 85-87.
- Tkachenko, А.V. Immune status of horses at strongyloidosis / M.A. Dercho, A.V. Tkachenko, N.V. Nurmuhametov // European journal of natural history. – 2007. - №4. – S. 54-58.
- Ткаченко, А.В. Оценка противопаразитарной активности пероральных препаратов при лечении стронгилоидоза лошадей / М.А. Дерхо, А.В. Ткаченко // Коневодство и конный спорт. – 2007. – № 2. – С. 18-20.
- Ткаченко, А.В. Морфологические, иммунобиологические и биохимические особенности патогенеза стронгилоидоза лошадей / А.В. Ткаченко, М.А. Дерхо, С.Ю. Концевая // Мат-лы XVI Московского межд. конгресса по болезням мелких домашних животных. – Москва, 2008. – С. 135-137.
8. Ткаченко, А.В. Использование лигфола для коррекции белкового метаболизма у лошадей / А.В. Ткаченко, Л.Р. Мансурова, М.А. Дерхо // Сибирский вестник сельскохозяйственной науки. – 2008. - № 7. – С. 25-26.
9. Влияние стронгилоидоза лошадей на уровень морфологических показателей крови / А.В. Ткаченко, М.А. Дерхо // Мат-лы межд. науч.-практ. конф. – Троицк, 2008. – С. 163-165.
10. Патент № 2237671 Российская Федерация МПК А 61 К 31/00. Способ лечения стронгилоидоза лошадей / Дерхо М.А., Концевая С.Ю., Ткаченко А.В. Нурмухаметов Н.М., (РФ). - № 2007103670/13; заявл. 30.01.07; опубл. 10.11.2008. Бюл. № 31.
На правах рукописи
Ткаченко Андрей Владимирович
ВЛИЯНИЕ СРОНГИЛОИДОЗНОЙ ИНВАЗИИ НА
МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ, БИОХИМИЧЕСКИЕ И ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ КРОВИ И РАЗРАБОТКА МЕТОДОВ ИХ КОРРЕКЦИИ ПРИ ТЕРАПИИ ЛОШАДЕЙ
03.00.19 – паразитология
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени
кандидата биологических наук
Тюмень – 2009
____________________________________________________________________
Подписано к печати «____» _______ 2009 г.
Формат 60х84/16 Объём 1 п.л. Тираж 100 экз. Заказ № 127
Гарнитура «Times New Roman»
____________________________________________________________________
Отпечатано в типографии ООО