Термооптика композитных наночастиц в биомедицинских применениях
| Вид материала | Документы |
- Термодиэлектрические свойства композитных материалов на основе наночастиц оксидов переходных, 239.71kb.
- Статья Сфера действия настоящего Закона Настоящий Закон распространяется на граждан, 186.41kb.
- Синтез и свойства композиционных материалов на основе матриц полиметилметакрилата, 303.47kb.
- Организация производства композитных структурообразователей для пищевой промышленности, 26.09kb.
- Численное моделирование нелинейно-наследственного поведения пространственно-армированных, 22.15kb.
- Лекция 2 Композитные документы. Технология подготовки композитных документов в среде, 207.35kb.
- Гетероструктуры на основе органических полупроводников и пленок наночастиц, 32.23kb.
- Савельев А. М., Корюкин С. И., Синицын, 113.84kb.
- Нир, планируемой к финансированию в рамках программы, 1479.66kb.
- А. М. Иванов, Н. А. Мыслицкая,, 94.49kb.
Материалы и методы. Наночастицы железа, 30 самцов белых беспородных крыс, перевиваемый рак почки и печени крыс, морфологические методы, морфометрические методы.
Результаты и выводы. При проведении стандартного морфологического исследования с окраской гистологических срезов гематоксилином и эозином существенных различий в опухоли до и после введения наночастиц железа обнаружено не было. При применении морфометрических методик были установлены изменения размера и площади, а также ядерно-цитоплазматического коэффициента в клетках опухоли и количества сосудов, что позволило оценить структурные изменения опухоли. Применение гистохимических методов исследования позволяет выявить нарушения обменных процессов в клетках опухоли, степень выраженности склероза и т.д. Идеальным вариантом дополнительных методов исследования является применение иммуногистохимии, позволяющей судить о пролиферативной активности клеток и степени выраженности апоптоза. Таким образом, для получения полной информации о биологической активности опухоли, степени ее патоморфоза и возможного определения прогноза заболевания необходимо использовать весь комплекс морфологических методов исследования от стандартных окрасок до иммуногистохимических исследований.
О.В. Минаева, Н.Н. Зырняева, Г.С. Столяров, А.А. Фирсов, О.Е. Лунина, Н.А. Плотникова
Исследование острой токсичности магнитной жидкости на основе магнетита Fe3O4, стабилизированного олеиновой кислотой
ГОУ ВПО Мордовский государственный университет им. Н. П. Огарева, Саранск
Магнитные жидкости (МЖ) могут быть использованы в системах направленной доставки лекарственных препаратов, индукционной гипертермии и различных диагностических методах. Для биомедицинского применения МЖ необходимы данные о ее токсичности.
Цель работы. Исследовать острую токсичностьмагнитной жидкости на основе магнетита Fe3O4 при ее внутривенном введении и определить причину гибели животных.
Материал и методы. В данной работе была использована магнитная жидкостьна основе магнетита Fe3O4, стабилизированного олеиновой кислотой. Частицы магнетита в коллоидном растворе имеют преимущественно сферическую форму и размеры 5–15 нм, что подтверждено данными инфракрасной дифрактометрии и электронной микроскопии. Концентрация Fe3O4 в коллоиде была равна 25 мг/мл. Исследование проводилось на 50 нелинейных половозрелых лабораторных крысах массой 220–280 г. Животные были разделены на 5 групп по 10 особей в каждой. В контрольной группе животным внутривенно вводили 1 мл изотонического раствора натрия хлорида. В 1-й – 4-й опытных группах внутривенно вводили магнитную жидкость в объемах, обеспечивающих попадание в кровоток 75, 150, 300 и 450 мг/кг Fe3O4. Павших крыс вскрывали, оценивали макро- и микроскопическую картину внутренних органов. Определяли значение максимально переносимой дозы (МПД), абсолютно смертельной дозы (LD100) и среднесмертельной дозы (LD50). Данные показатели определяли в пересчете на Fe3O4.
Результаты. Максимально переносимая доза МПД магнитной жидкости составляла 150 мг Fe3O4 на 1 кг массы тела животного. Абсолютно смертельная доза составляла 450 мг Fe3O4 на 1 кг массы тела животного, рассчитанное значение среднесмертельной дозы LD50 составило 378 мг Fe3O4 на 1 кг массы тела. При введении абсолютно смертельной дозы МЖ смерть животного наступала в течение 1–30 минут после инъекции. Причиной смерти была микроэмболия легочных сосудов, что подтверждалось на вскрытии: находили увеличенные в размерах, полнокровные легкие, расширенные правые камеры сердца и полые вены. При микроскопическом исследовании легких отмечалось полнокровие сосудов, в ряде случаев – лейкоцитарная инфильтрация межальвеолярных перегородок, ателектазы. В других органах значимых макро- и микроскопических изменений не определялось.
Выводы. Магнитная жидкостьна основе магнетита Fe3O4, стабилизированного олеиновой кислотой, является малотоксичным соединением и может быть использована для биомедицинских целей. Однако при ее применении необходимо учитывать возможность отдаленного токсического действия.
Работа выполнена при поддержке гранта Президента молодым кандидатам наук МК-5268.2011.7.
Н.А. Наволокин, А.Б. Бучарская, С.М. Кун, Г.Н. Маслякова, Г.С. Терентюк, Б.Н. Хлебцов, Н.Г. Хлебцов
Динамика морфологических изменений в органах лабораторных животных при внутривенном введении нанооболочек золота
ГОУ ВПО Саратовский ГМУ им. В.И. Разумовского Минздравсоцразвития, Саратов
Институт биохимии и физиологии растений и микроорганизмов РАН, Саратов
В мире отмечается неуклонный рост смертности от злокачественных новообразований. Традиционные методы лечения имеют ряд побочных действий и часто малоэффективны, возрастает необходимость разработки новых методов лечения с использованием высоких технологий, в частности золотых наночастиц (ЗНЧ), которые могут применяться для диагностики и лечения опухолей. Известно, что золото проявляет высокую химическую активность, обусловленную его физико-химическими свойствами, в связи с чем возникает необходимость в изучении токсичности ЗНЧ.
Цель исследования. Изучить динамику морфологических изменений во внутренних органах лабораторных животных при введении ЗНЧ.
Материалы и методы. Золотые нанооболочки диаметром 160 нм (концентрация золота 153 мкг/мл), белые беспородные крысы – самцы, морфологические методы. Белым беспородным крысам внутривенно вводили в хвостовую вену 1 мл золотых нанооболочек. В динамике через определенные промежутки времени забирались органы для гистологического исследования.
Результаты. В печени через 30 мин наблюдалось незначительное полнокровие и зернистость, вакуолизация цитоплазмы. Через 1,5 ч – умеренное полнокровие внутрипеченочных сосудов и сепарация крови, увеличение клеток Купфера, фрагментация цитоплазмы гепатоцитов. Через 8 ч – умеренное полнокровие и белковая дистрофия гепатоцитов. В селезенке через 30 мин нет четкого деления на красную и белую пульпу, полнокровие. Через 1,5 ч – умеренное полнокровие, появляется четкая граница. Через 4 ч – выраженное полнокровие и большое количество скопления черных гранул. В почках через 30 мин – неравномерное полнокровие клубочков, дистрофия эпителия извитых и прямых канальцев и отек мозгового вещества. Умеренное полнокровие сосудов и сепарация крови. Через 1,5 ч клубочки малокровные, капсула свободная, эпителий прямых и извитых канальцев дистрофичен. Через 8 ч клубочки обычных размеров, просвет капсулы свободный. Умеренная дистрофия извитых канальцев и полнокровие коры.
Выводы.Морфологические изменения во внутренних органах при внутривенном введении золотых наночастиц зависят от времени и носят обратимый характер.
Н.А. Наволокин, Г.Н. Маслякова, X.M. Kong, О.В. Матвеева, А.Б. Бучарская
Морфологические изменения во внутренних органах лабораторных животных при однократном пероральном введении магнитоуправляемых наночастиц
ГОУ ВПО Саратовский ГМУ им. В.И. Разумовского Минздравсоцразвития, Саратов
Развитие нанобиотехнологий привело к возникновению новой области медицины – наноонкологии. В настоящее время наиболее перспективными считаются использование наночастиц (НЧ) для диагностики в качестве контрастного вещества для магнитно-резонансной томографии. Однако остаются малоизученными факторы потенциальной токсичности НЧ, связанные с высокой реакционной способностью НЧ, поэтому необходимо изучение влияния НЧ железа на живые организмы для выявления наиболее безопасного и эффективного вида частиц для последующего применения их в медицине.
Цель исследования. В экспериментах изучить морфологические изменения в органах лабораторных животных при однократном пероральном введении наночастиц Fe.
Материалы и методы. Наночастицы Fe 70 нм. ± 10нм., 12 самцов белых беспородных мышей и 12 самцов белых беспородных крыс, морфологические методы. Было выделено 2 группы животных – 6 самцов мышей и 6 крыс, получавших перорально однократно раствор наночастиц Fe (5 мг/кг), 2 контрольные группы (по 6 самцов белых мышей и крыс) получали однократно 1 мл 0,9 % раствора NaCl перорально. Все животные выводились из эксперимента путем декапитации через 2 ч.
Результаты. В толстом и тонком кишечнике как у крыс, так и мышей крипты имели нормальное строение, но в подслизистой тонкого кишечника обнаруживались лимфатические фолликулы без светлого герментативного центра, а также скопления лимфоидных инфильтратов в слизистой оболочке. В печени определялась нормальная архитектоника, отмечалось умеренное полнокровие сосудов и скопление гранул гемосидерина вокруг портальных трактов. В почках при однократном пероральном введении наночастиц клубочки и канальцы не были изменены, отмечалось умеренное полнокровие сосудов мозгового слоя. В селезенке наблюдалось преобладание красной пульпы над белой, в лимфатических фолликулах определялись активные центры и большое скопление гранул гемосидерина.
Выводы. При гистологическом изучении изменения во внутренних органах при введении наночастиц проявлялись в виде нарушения кровонаполнения, повреждения клеток были выражены минимально.
В.Ю. Науменко, А.Г. Акопджанов, Н.Л. Шимановский
Возможности использование наноразмерных и наноструктурированных материалов в качестве субстанции рентгеноконтрастного средства, предназначенного для диагностики опухолей.
Российский государственный медицинский университет им. Н.И. Пирогова, Москва
Задачи исследования. Методика визуализации внутренних органов с применением рентгеноконтрастных средств (РКС) является актуальной и применимой в современной онкологии. У применяемых йодированных препаратов высокая эффективность контрастирования требует применения большой дозы вводимого средства, которая оказывает тиреостатический эффект и может быть причиной нефропатии. Для создания РКС без атомов йода предлагается использовать биосовместимые наночастицы оксида железа. Задача исследования – сопоставить размеры частиц и длинны волны рентгеновских квантов или медленных нейтронов для оценки дополнительного рассеивания и, следовательно, увеличения эффективного пути кванта в материале.
Материалы и методы. Приведено теоретическое обоснование увеличения поглощающей способности дополнительным рассеянием на наночастицах. Рассмотрены механизмы рассеяния: рассеяние на границе раздела фаз и когерентного рассеяние рентгеновского излучения.
Результаты. Механизм рассеяния на границе раздела фаз основан на том, что наночастица обладает сильно развитой внутренней поверхностью. При скользящих углах падения кванты испытывают внешнее отражение от поверхности частиц в области малоуглового рассеяния. В случае малого размера и большой концентрации рассеивающих центров вклад такого рассеяния достаточно заметен. Изучен характер зависимости среднего угла рассеяния на единицу длину пути , который свидетельствует о том, что величина среднего угла рассеяния обратно пропорциональна размеру наночастиц. Когерентное рассеяние обусловлено соизмеримостью размера наночастиц с длиной волны рентгеновского излучения, что приводит к распределению интенсивности излучения по конусу с углом раствора ~λ/а, где λ – длина волны излучения, а – размер частицы. Оценен средний квадрат угла рассеяния фотона на единицу длины пути . Решение уравнения (2) переноса (1), с учетом и дало коэффициент b (3), определяющий во сколько раз увеличивается ослабления пучка рентгеновского излучения в случае наноматериала по сравнению с массивным образцом. При размере частиц 5–9 нм, он оказался равным b»1,32¸1,52.
(1)
(2),
где – коэффициент фотоэлектрического поглощения рентгеновского излучения в материале, – решение для массивного образца, z – зарядовое число.
Кривые спада интенсивности показали, что при толщине 360 мкм кратность ослабления увеличилась в 1,39¸1,43 раза по сравнению с массивным образцом.
Выводы. Проведенные исследования позволяют предложить сложный оксид железа для создания нового рентгеноконтрастного средства, альтернативного существующим РКС.
В.Ю. Науменко, А.Г. Акопджанов, И.В. Быков, Н.Л. Шимановский
Возможности применения наноразмерных частиц оксида железа для гипертермической терапии опухолей
Российский государственный медицинский университет им. Н.И. Пирогова, Москва
В последние годы для профилактики и лечения онкологических заболеваний активно развиваются различные варианты локальной магнитной гипертермии, в которой вводимый в пораженный участок магнитный материал нагревается извне с помощью электромагнитного излучения диапазона 100–800 кГц, которое практически не поглощается тканями организма, но интенсивно взаимодействует с наночастицами ферромагнетиков. В качестве медиаторов наиболее приемлемыми являются наночастицы сложного оксида железа – магнетита, с размером частиц от 30 до 50 нм, характеризующихся температурой Кюри около 42–44 °С, что соответствует температуре гибели онкологических клеток. При достижении данной температуры вследствие магнитного фазового перехода процесс поглощения энергии внешнего излучения частицей прекращается и дальнейшего нагревания не происходит.
Движением таких наночастиц можно управлять посредством наложения внешнего магнитного поля и локализовать их в необходимой области или органе.
Проведенные исследования на различных культурах клеток как здоровых, так и патологических показали, что при специальной модификации поверхности наночастицы сложного оксида железа данного размера безопасны для живой ткани и не оказывают существенного влияния на процессы, происходящие в клетке. Исследования проводились с помощью МТТ-теста при различных временах инкубирования. Исследование процесса внешнего нагрева клеточных структур при введении в них наночастиц также не выявило отклонений от нормы. Данный результат позволяет исключить все внешние воздействия, за исключением действия электромагнитного излучения.
Имеются данные о лечении опухолевого образования у лабораторных крыс с глиомой T-9 и применением магнитной жидкости на основе сложного оксида железа. Препарат вводится непосредственно в опухоль под наркозом, затем опухоль подвергается воздействию внешнего магнитного поля, в результате чего наночастицы железа нагреваются до температуры 45 °С. Опухоли исчезали после трехкратной гипертермии по 30 мин в течение 30 дней (118кВатт, 30,7 кA/м) и в течение 3 мес. не рецидивировали.
Таким образом, нанотехнологии с использованием железа позволяют получать эффективные препараты для магнитной гипертермической терапии различных опухолей.
Д.В. Новиков, Т.В. Белова, Е.С. Плеханова, А.В. Калугин, А.В. Алясова, Е.Ю. Конторщикова, В.В. Новиков
Исследование экспрессии раково-тестикулярных генов с помощью ДНК-чипа
Нижегородский государственный университет им. Н.И. Лобачевского, Нижний Новгород
Задачи исследования. Расширение возможностей клинико-лабораторной диагностики и мониторинга онкологических заболеваний в последнее время связывают с созданием нового поколения средств многопараметрической диагностики – биочипов, позволяющих одновременно определять широкий спектр онкологических маркеров разной природы. К таким маркерам относят продукты экспрессии раково-тестикулярных (РТ) генов (от англ. cancer/testis). Одновременное выявление комбинации из нескольких мРНК РТ генов с использованием ДНК-чипа может служить способом обнаружения циркулирующих в периферической крови опухолевых клеток. Задачей настоящего исследования явился анализ частоты обнаружения мРНК РТ генов в периферической крови больных различными онкологическими заболеваниями.
Материалы и методы. В работе использовали образцы периферической крови больных раком эндометрия (РЭ), желудка (РЖ), молочной железы (РМЖ), легкого (РЛ), почки (РП), меланомой и колоректальным раком (КР). Для обнаружения мРНК РТ генов использовали «гнездовой» вариант ОТ-ПЦР. Результаты реакции оценивали методами электрофореза нуклеиновых кислот или гибридизацией на ДНК-чипе.
Результаты и выводы. Периферическую кровь онкологических больных тестировали на присутствие мРНК шести генов MAGEA, девяти генов GAGE, трех генов SSX, генов NY-ESO-I, XAGE1, MAGEC1, BAGE и TRAG. Установлено, что частота обнаружения мРНК исследуемых генов варьировала в зависимости от заболевания и его стадии. Суммарная частота обнаружения мРНК РТ генов в периферической крови больных РЛ составила 90 %, КР – 80 %, РМЖ – 75 %, РП – 70 %, РЖ – 75 %, РЭ – 45 % и меланомой – 55 %. Таким образом, тест на присутствие мРНК РТ генов применим для обнаружения циркулирующих в периферической крови опухолевых клеток у больных различными формами рака.
Работа выполнена при поддержке ФЦП «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009–2013 годы и ФЦП «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технологического комплекса России на 2007–2012 годы».
С.В. Новикова, Н.А. Сахарнов, Д.В. Новиков, А.Д. Перенков, А.В. Алясова
Анализ статуса метилирования промоторной области гена альфа-цепи рецептора интерлейкина-2 при раке толстого кишечника
Нижегородский государственный университет им. Н.И. Лобачевского, Нижний Новгород
Задачи исследования. Экспрессия альфа цепи рецептора интерлейкина-2 (IL2RA) обнаружена во многих типах опухолевых клеток. Установлено, что экспрессия IL2RA сопровождается повышением уровня пролиферации опухолевых клеток, увеличением уровня экспрессии антиапоптотических белков и повышением устойчивости к лекарствам, что может быть использовано при мониторинге онкологических заболеваний с использованием биочипов. В настоящее время много внимания уделяется связи метилирования с опухолеобразованием, для ряда генов определен статус метилирования в различных типах опухолей, что используется в качестве диагностического и прогностического маркера при онкологических заболеваниях. Целью настоящей работы явился анализ статуса метилирования промоторного региона гена IL2RA в клетках опухолевых очагов, полученных от больных раком толстого кишечника.
Материалы и методы. Исследовали 8 образцов опухолевых очагов больных раком толстого кишечника. Характер экспрессии гена IL2RA определяли методом ОТ-ПЦР с использованием разработанных авторами праймеров. Анализ статуса метилирования промоторной области гена IL2RA проводили с использованием рестриктаз HpaII, HhaI, AciI, чувствительных к метилированию CpG-динуклеотидов, и последующей ПЦР. Для оценки полноты гидролиза ДНК использовали плазмиду, содержащую последовательность гена альбумина человека.
Результаты и выводы. Во всех исследованных образцах клеток опухолевых очагов больных раком толстого кишечника обнаружена мРНК гена IL2RA. Анализ промоторной области гена IL2RA с использованием рестриктаз показал метилирование цитозинов в позициях -313, -74, +100, +105, +128, +131, +185, +198, +307 относительно сайта инициации транскрипции во всех исследованных образцах. Высокочувствительный метод анализа метилирования с помощью рестриктаз позволяет выявить метилирование цитозинов в единичных молекулах ДНК. С другой стороны, обнаружение мРНК гена IL2RA в образцах опухолевых очагов говорит об активности гена, а значит о предполагаемом отсутствии метилирования его промоторной области. Полученные результаты могут свидетельствовать о неоднородности паттерна метилирования гена IL2RA в клетках одного опухолевого очага.
Работа выполнена при финансовой поддержке ФЦП «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технологического комплекса России на 2007–2012 годы».
И.Н. Павлова, О.М. Канапацкова, Т.А. Федорова
Отдаленные результаты применения наноразмерных олигонуклеотидов нуклеината натрия у больных местнораспространенным раком молочной железы
НУЗ ДКД на ст. Саратов-I, СГМУ, Саратов
Одним из важных показателей эффективности любого метода лечения является как одногодичная летальность, так и продолжительность жизни больных. В условиях данной работы судьба пациенток прослежена на протяжении пяти лет. Приведенные данные свидетельствуют об уменьшении процента потерь больных в тех подгруппах, где в состав противоопухолевой терапии включался нуклеинат натрия (НН), разработанный ЗАО «Биоамид» (г. Саратов) на основе микробной биотехнологии и выпускаемый ОАО «Биосинтез» (г. Пенза) в форме наноразмерных олигонуклеотидов.
Материалы и методы. Была отслежена судьба 240 женщин с диагнозом рак молочной железы IIB–IIIA стадии. Группа I– 64 больных, в комплексное лечение которых входил НН; группа II – 176 больных, в комплексное лечение был включен НН. Обследование больных осуществлялось после окончания каждого этапа лечения, а также в течение 5 лет последующего наблюдения. Обязательно учитывались возникающие в процессе лечения осложнения. Основными критериями эффекта введения НН в комплекс мероприятий являлись изменения параметров иммунитета, пятилетняя выживаемость пациенток и качество жизни больных после лечения.
Результаты и выводы. При анализе показателей клеточного звена иммунитета (СD3+-,СD4+-, СD8+-клетки) через пять лет после лечения в I группе констатировано приближение к исходным величинам уровней СD3+-,СD4+-,СD8+-клеткок, то есть компонентов клеточного звена. Вo II группе отмечается лишь тенденция к нарастанию соответствующих показателей. В отношении гуморального звена иммунитета в I группe все показатели значительно отставали от исходного уровня. В отличие от I группы во II группe через пять лет показатели как клеточного, так и гуморального звеньев иммунитета не только восстановились до исходных уровней, но и в некоторых случаях превысили их (СD3+-, СD4+-, СD8+-клетки, IgA, IgG). Все приведенное дает реальные основания для положительного применения препарата НН в процессе комплексного лечения больных раком молочной железы.
Л.А. Пашева1,3, Н.Б. Преснякова2, О.Н. Горшененко3,Г.Л. Туманина3, В.В. Новиков 1,2