Ветеринарно санитарная экспертиза экспортного мяса монголии и установление его видовой принадлежности на основе ДНК диагностики 06.
| Вид материала | Автореферат |
- Ветеринарно-санитарная экспертиза мяса птицы и профилактика пищевых сальмонеллезов, 463.35kb.
- Программа вступительных испытаний в магистратуру по направлению 111900 «Ветеринарно-санитарная, 300.73kb.
- Темы рефератов для поступления в аспирантуру по научной специальности 06. 02. 05 ветеринарная, 7.32kb.
- Приказ № Факультет биотехнологии и ветеринарной медицины Закрепить дисциплины ооп подготовки, 149.71kb.
- Ветеринарно-санитарная экспертиза и оценка продуктов убоя якутских лошадей при афлатоксикозе, 350.28kb.
- Правила ветеринарного осмотра убойных животных, 918.04kb.
- Декан факультета доцент, 1509.81kb.
- Учебное пособие москва 2002, 2601.58kb.
- Программа вступительных испытаний в магистратуру по направлению 110500 «Ветеринарно-санитарная, 328.03kb.
- Волков Александр Трифонович Ветеринарно-санитарная экспертиза продуктов убоя свиней, 421.78kb.
На правах рукописи
ЦЭРЭНДОРЖ АМАРСАЙХАН
ВЕТЕРИНАРНО - САНИТАРНАЯ ЭКСПЕРТИЗА ЭКСПОРТНОГО МЯСА МОНГОЛИИ И УСТАНОВЛЕНИЕ ЕГО ВИДОВОЙ ПРИНАДЛЕЖНОСТИ НА ОСНОВЕ ДНК ДИАГНОСТИКИ
06.02.05 - ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и
ветеринарно-санитарная экспертиза
03.01.06 - биотехнология (в том числе бионанотехнология)
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени
кандидата биологических наук
М
осква- 2011
Работа выполнена в лаборатории ветеринарной санитарии и гигиены Монгольского института ветеринарной медицины и в ветеринарно-молекулярно-генетической лаборатории Кагошимского университета (Япония).
Научные руководители: доктор биологических наук,
член-корр. РАСХН, профессор
Девришов Давудай Абдулсемедович
кандидат ветеринарных наук, профессор
Боровков Михаил Федорович
Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук
Кальницкая Оксана Ивановна
(Московский государственный университет
прикладной биотехнологии)
доктор биологических наук, профессор
Тихонов Игорь Владимирович
(МГАВМиБ им.К.И.Скрябина)
Ведущая организация: ФГУ<<Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов >> (ФГУ ВГНКИ).
Зашита состоится << >> 2011 г. в час. на заседании диссертационного совета Д 220.042.05 при ФГОУ ВПО <<Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И.Скрябина >> ( 109472, Москва, ул, Академика Скрябина, 23, тел. 377-93-83).
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО <<Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина >>.
Автореферат разослан << >> 2011г. и размещен на сайте ссылка скрыта.
Ученый секретарь
диссертационного совета Л.А. Волчкова
1. ОБЩая харектеристика РАБОТЫ
Актуальность темы. Увеличение экспорта мяса было основным источником улучшения экономики Монголии и уровня жизни скотоводов. В Монголии почти 8 млн. голов скота животных различных видов. Около 300 тыс. тонн мяса ежегодно употребляется в пищу. В настоящее время работают 35 мясоперерабатывающих предприятий. В последние 4 года Монголия экспортирует говядину, баранину и конину в такие страны как Россия, Япония,Южная Корея, Казахстан, Объединенные Арабские Эмираты, Саудовская Аравия и Иран. Хотя число стран, импортирующих мясо из нашей страны растет, его общая сумма составляет менее одной трети мяса, которое Монголия экспортировала в бывший Советский Союз в 1990 г., что составляет 20% экспортного резерва.
Это было связано с увеличением возникновения инфекционных болезней животных, отсутствием сертификации здоровья продовольственных животных и системы санитарно-гигиенического контроля мясокомбинатов.
С другой стороны, развитие ветеринарной науки на новый уровень является единственным путем внедрения передовых технологий и инноваций. Основной тенденцией социального и экономического развития во всем мире является внедрение экономики, основанной на специальных знаниях, независимо от уровня развития любой страны. Это видно на примерах быстрого развития биотехнологии в слаборазвитых странах.
В настоящее время остро требуется внедрение прогрессивной технологии в практику животноводства, разработка новых методов исследования мяса монгольских пастбищных животных и использование этих данных в ветеринарно-санитарной экспертизе. В связи с повышением потребностей в мясе и мясных продуктах в Монголии распространены такие негативние явления как воровство домашных животных, различные формы фальсификации при продаже мяса, смешивание мяса различных видов животных в виде фарша, замена мяса одного вида животных мясом другого вида, продажа испорченного мяса и др.
В связи с указанными негативными явлениями остро требуется разработка чувствительного метода определения видовой принадлежности мяса. Для установления видовой принадлежности мяса в настоещее время применяются методы сравнительной анатомии костей животных (Андрей.С,1996), измерение концентрации гликогена в мышцах (Дашдэлгэр Р, 1991), ДНК-гибридизация (Горожинина Е, 2007), электрофорез (Osman, M. A., Asoor, S. H., Marsh, P. C. 1987), хроматография, изоэлектрическая фокусировка, энзимологические и иммунологические методы (Төмөртогтох .Э,Бэх-Очир. А,2003).
Но эти методы по чувстительности и специфичности не полностью отвечают требованиям ветеринарно- санитарной экспертизы и судебной ветеринарии при контроле качества мяса. С учетом вышеизложенного, возникает потребность в разработке высоко чувствительных и точных методов, независимых от тепловой, холодильной обработки мяса или от способа его консервирования. Установление последовательности характерного гена, который имеет диагностическое значение для монгольского скота, получение праймера для определения видовой принадлежности мяса и оптимальных параметров таких методов, как ПЦР, ПЦР-ПДРФ и мультиплекс-ПЦР, а также приобретение методологии играют большую роль при сертификации качества и безопасности мяса. Они могут быть использованы в судебно-ветеринарной медицине для отслеживания и идентификации животных с помошью ДНК - диагностики.
Учитывая вышеперечисленные вопросы, наши исследования были направлены на изучение качественных характеристик экспортного мяса Монголии и разработку метода ДНК - диагностики происхождения мяса, на изучение важнейших требований при увеличении экспорта мяса, на сертификацию продуктов животного происхождения и на вопросы ветеринарно-санитарной экспертизы.
Цель и задачи исследований. Цель данной работы – изучение ветеринарно-санитарной характеристики экспортного мяса Монголии и установление его видовой принадлежности на основе ДНК-диагностики.
Для реализации данной цели перед нами были поставлены следующие задачи:
1. Изучить производство мяса, его потребности для населения Монголии и возможности экспорта.
2. Изучить производственные мощности предприятий по убою скота и обработке мяса.
3. Изучить химический состав, органолептические, физико-химические и микробиологические показатели экспортного мяса (говядина и баранина) Монголии.
4. Установить возможность внедрения и практического применения системы контроля риска на критических точках (HACCP) на боенских и мясоперерабатывающих предприятиях Монголии.
5. Определить последовательность генов у продуктивных и диких животных для идентификации и видовой принадлежности мяса (по 9 видам животных).
6. Установить оптимальные параметры ПЦР-ПДРФ для гена диагностики и видовой принадлежности мяса (лошадь, крупный рогатый скот, овца, коза, верблюд, свинья, курица, собака и волк).
7. Изучить совпадаемость последовательности нуклеиновых кислот, кодирующих ген MC1R меланоцит рецептора крупного рогатого скота, лошадей, верблюдов и овец монгольской породы с данными банка генов DDB/EMBL/GenBank.
Научная новизна. Впервые изучен комплекс органолептических, физико-химических и микробиологических показателей экспортного мяса (говядина, баранина, конина) Монголии.
Впервые в Монголии изучена возможность внедрения и практического использования системы контроля риска на критических точках (система НАССР).
Впервые определена последовательность нуклеиновых кислот, кодирующая ген MC1R-меланоцит рецептор лошадей, верблюдов и овец монгольской породы.
Практическая значимость. Изучение возможностей внедрения и практического применения системы НАССР на боенских и мясоперерабатывающих предприятиях Монголии, а также её внедрение послужило основой улучшения их ветеринарно-санитарного состояния и выпуска продукции высокого качества.
Разработан Национальный стандарт Монголии - MNS 5998:2009 ‘’Убойное предприятие. Анализ опасности и системная модель контроля риска”, Улан-Батор, 2009 г.
Разработан Национальный стандарт Монголии - MNS 6035-2009 “Набор теста для инспекции мяса и мясных продуктов”, Улан-Батор, 2009 г.
Разработаны технические условия ”Модель технологических и гигиенических условий в мясной промышленности” (утв. Учёным советом Института вет. медицины, протокол №09/07/02 от 16 июня 2009 г.).
Основные положения, выносимые на защиту:
1.Химический состав,органолептические, физико-химические и микробиологические показатели экспортного мяса Монголии.
2. Результаты внедрения и практического использования системы контроля риска на критических точках (система НАССР) боенских и мясоперерабатывающих предприятий Монголии.
3. Использование ПЦР для установления видовой принадлежности мяса (по 9 видам животных).
Апробация работы. Результаты диссертационной работы доложены на:
- Научной конференции по отбору лучших докладов магистрантов и докторантов МГСХУ, Улан-батор, 2008 г.
- Международной конференции “Становление и развитие аграрной науки в Сибирском регионе”,Новосибирск,2008 г.
- Международной конференции “ Устойчивое развитие сельского хозяйства на основе научных исследований“, Улан-Батор, 2009 г.
- Международной конференции “ Роль научных исследований в расширении и устойчивом развитии сельского хояйства”, Улан-Батор, 2009 г .
Публикации. По теме диссертации опубликовано 10 работ. Две статьи опубликованы в рецензируемом и рекомендуемом ВАК журнале<<Ветеринарная медицина>>. В этих статьях изложены основные результаты экспериментальных исследований.
Объём и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на ......страницах компьютерного текста, иллюстрирована 32 рисунками, 9 фото, 12 микрофотоснимками, 12 графиками, 2 схемами и 34 таблицами. Состоит из глав: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы, рекомендации по использованию научных выводов, сведе-ния о практическом использовании научных результатов и приложение. Список использованной литературы включает 109 источников, из них .....иностранных.
2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
Работа проводилась в период с 2007-2010 гг. в лаборатории ветеринарной санитарии и гигиены Монгольского института ветеринарной медицины и в ветеринарно-молекулярной биологической лаборатории Когашимского университета (Япония).
Нами исследованы потребность населения Монголии в мясе и мясных продуктах, поголовье скота и производство мяса, а также его экспорт и перспективы на будущее.
Проведен анализ и определена мощность 35 мясокомбинатов и их техническая оснащенность, 17 из которых имеют лицензию на экспорт мяса. Эти данные проанализованы и сопоставлены по промышленным объектам в целом.
Исследования по состоянию экспорта мяса и его ресурсов основаны на данных оборота стада и на учете нагрузки пастбищ. Они проведены методом имитации и эконометрической модели.
Производственная мощность мясной промышленности, гигиена производства, безопасность менежемента 5 ведущих мясокомбинатов Монголии изучены нами путем SWOT анализа.
Для определения химического состава мяса было отобрано 10 проб длиннейшей мышцы спины. Определяли с помощью прибора FOSS (Дании).
Для органолептического исследования было отобрано 108 туш говядины и 100 туш баранины.
Дпя физико-химических исследований было отобрано созревшее мясо (спустя 48 часов после убоя) - 60 туш.
Для микробиологического исследования отобрано 56 туш в охлажденном и замороженном состоянии.
Органолептические показатели: Органолептическую оценку проводили в соответствии с ГОСТ 7269-79 <<Методы отбора образцов для органолептического исследования мяса>> и <<Инструкции по организации проведения органолептического анализа мясных продуктов на предприятиях мясной промышленности>>(1981 г.)
Проводили внешний осмотр. Устанавливали влажность мышц (прикладывали фильтровальную бумагу к мышечному разрезу на две секунды), консистенцию (слегка надавливали на поверхность в области грудных и тазобедренных мышц и следили за временем выравнивания поверхности). Определяли цвет и запах мышц.
Запах жира: 20 г внутренней жировой ткани измельчали ножницами, вытапливали на водяной бане и охлаждали 20 минут до температуры 20-25 С).
Определяли прозрачность и аромата бульона (проба варкой):вырезали около 70 г мышц, измельчали. Навеску 20 г помещали в коническую колбу вместимостью 100 мл, заливали 60 мл дистиллированной воды, закрывали стеклом и ставили на 10 мин. в водяную баню. Аромат мясного бульона определяли в процессе нагревания до температуры 80-85С.
Физико-химические показатели: Определяли рН потенциометрическим методом: готовили вытяжку 1:10. Вытяжку фильтровали через три слоя марли, а затем через бумажный фильтр. Мясо здоровых животных имеет рН = 5.8-6.2, больных - рН = 6,3 и выше.
Определение количество аммиака. Метод основан на способности аммиака образовывать с реактивом Несслера (двойная соль йодистой ртути и йодистого калия, растворенная в гидрате окиси калия) йодид меркураммония – вещество, окрашенное в желто-бурый цвет.
Устанавливали активность пероксидазы - в свежем мясе содержится фермент пероксидаза, который, взаимодействуя с перекисью водорода, образует комплекс «пероксидаза-Н2О2». В этом комплексе перекись водорода,распадаясь под влиянием пероксидазы окисляет бензидин с образованием продуктов, окрашенных вначале в голубовато-зеленоватый цвет, переходящий в коричневый. В пробах несвежего мяса активность фермента пероксидазы меньше и вышеуказанный комплекс не образуется, что определяет отрицательную оценку реакции.
Микробиологические исследования: Бактериальную обсеменёность мышц, печени и лимфатических узлов проводили по ГОСТу 21237-75 <<Мясо.Методы бактериологического анализа>>
ДНК-диагностика. Для проведения ДНК-анализа мяса пробы брали из мышечной ткани без жира у следующих 9 видов животных (табл 1).
Таблица 1
Видовые принадлежности и происхождение мяса,
образцы которых отобраны для анализа
| Животные | Вид | Место для отбора образцов |
| Лошадь | Equus caballus | Борнур, Центральный аймак |
| Крупный рогатый скот | Bos taurus | Зунбурен, Селенгинский аймак |
| Овца | Ovis aries | Тариат, Ара-Хангайский аймак |
| Коза | Capra hircus | Баянчандмань, Центральный аймак |
| Верблюд | Camelus bactrianus | Булган, Южно-Гобийский аймак |
| Собака | Canis lupus familiaris | Баянзурх район, Улан-батор. |
| Волк | Canis lupus | Халх гол, Восточный аймак |
| Свинья | Suis scofa | Мах маркет, мясокомбинат Улан-батор. |
| Курица | Gallus gallus | Рынок “Меркури”, Улан-батор |
Праймеры. Для ампликации общих фрагментов 12s гена у обследованных животных использовали генную информацию, зарегистрированную в генном банке (Genbank) Тм у лошадей регистрационный номер - EF597514 в банке, у крупного рогатого скота - VO0654, у овец - AFO34253, у коз - M-55541, у верблюдов - NCOO9628, у волков и собак - АМ791902, у свиней - AF034253, у кур - АМ711902 и праймеры для полимеразной цепной реакции. (табл 2).
Таблица 2
Последовательность праймеров
| Ген | Последовательность праймеров | Pазмеры | Авторы |
| MC1R | 5’-AGTGCCTGGAGGTGTCATCC-3’ 5’-GAAGTTCTTGAAGATGCAGCC-3’ | 700 bp | Kungland и другие,1995г. |
| Mt12S | 5’-AACGAGCCTGGTGATA-3’ 5’-CTCCGGTCTGAACTCAGATCACGTA-3’ | 1100 bp | Данное исследование |
| TYRP1 | 5’-TTTCCTCTACGTGCTTCAGTCTC-3’ 5’-GGGCGGCAGGTTCCACAG-3’ | 380 bp | Schmutz, Moker 2002 |