Формирование сахалинской популяции голштинской породы скота и пути ее дальнейшего совершенствования

Вид материалаАвтореферат

Содержание


Научный консультант
Гну вниигрж расхн)
Фгоу впо вгмха)
Г.Н. Сердюк
Цель и задачи исследования
Научная новизна исследований.
Личный вклад соискателя
Практическая значимость и реализация результатов исследований
Положения, выносимые на защиту.
Апробация работы
Публикация материалов диссертации
Объем и структура работы
2. Материал и методика исследований
Rg – повторяемость оценки; h
STA – значение племенной ценности быка по одному из признаков типа, балл; PD
3. Результаты исследований
3.2.Генеалогическая структура стада
Линия Инка Суприм Рефлекшн 121004
Силинг Трайджун Рокит
Родственная группа Вис Айдиал 933122
...
Полное содержание
Подобный материал:
  1   2   3   4   5   6   7   8




На правах рукописи


КУЗНЕЦОВ Виктор Макарович


Формирование сахалинской популяции

голштинской породы скота и пути ее дальнейшего

совершенствования


Специальность 06.02.01. – Разведение, селекция, генетика

и воспроизводство сельскохозяйственных животных


Автореферат


диссертации на соискание ученой степени доктора

сельскохозяйственных наук


Санкт-Петербург - 2007


Работа выполнена в Государственном научном учреждении Сахалинский научно-исследовательский институт сельского хозяйства


Научный консультант – доктор сельскохозяйственных наук,

профессор, академик РАСХН П.Н.Прохоренко


Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор,

И.А.Паронян (ГНУ ВНИИГРЖ РАСХН)


доктор сельскохозяйственных наук, профессор

А.А. Немцов (ГНУ Башкирский НИИСХ)


доктор сельскохозяйственных наук, профессор,

заслуженный деятель науки РФ А.А. Прозоров

(ФГОУ ВПО ВГМХА)


Ведущее учреждение – ФГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт племенного дела Министерства сельского хозяйства РФ


Защита состоится «___»__________________ 2007 года

В часов на заседании диссертационного совета Д006.012.01 в Государственном научном учреждении научно-исследовательский институт генетики и разведения сельскохозяйственных животных (ГНУ ВНИИГРЖ Россельхозакадемии) по адресу: 196601, Россия, Санкт- Петербург - Пушкин, Московское шоссе, 55-а.

Тел./факс(8-812)465-99-89; e-mail: spb@vniigenmail.ru


С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ ВНИИГРЖ РАСХН.

Автореферат разослан «___» ____________________ 2007 г.


Ученый секретарь диссертационного совета,

Доктор биологических наук Г.Н. Сердюк


  1. Общая характеристика работы


Актуальность темы. Главной задачей агропромышленного комплекса страны является обеспечение населения продуктами питания. Решение этой задачи возможно за счет достижения устойчивого роста сельскохозяйственного производства и выпуска конкурентоспособной продукции животноводства.

В связи с этим необходимо создание животных, обладающих высокой продуктивностью и приспособленных к разнообразным климатическим условиям разведения и технологиям производства молока. При этом разработка и применение современных программ селекции молочного скота в специфических по природно-климатическим условиям регионах страны имеет большое народнохозяйственное значение. Для этой цели широко применяются методы создания стад и выведения новых типов молочного скота с использованием голштинской породы - одной из лучших в мире по молочной продуктивности. При этом недостаточно изученной остается проблема использования голштинской породы при чистопородном разведении в открытых популяциях.

Современная теория селекции животных основывается на детальном изучении генетических аспектов улучшения породных и продуктивных качеств молочных пород крупного рогатого скота. В настоящее время накоплено достаточно сведений, позволяющих контролировать процесс совершенствования существующих и выведения новых пород животных.

Вместе с тем методическая основа для разработки современных методов выведения популяций молочного скота, приспособленного к климатическим особенностям и обладающего высокой продуктивностью, нуждается в дополнительных исследованиях. На территории Сахалинской области это связано с биогеохимическими характеристиками почв, растений, генетической характеристики маточного поголовья, рынком сбыта продукции, условиями кормления и содержания животных.

На острове из-за значительной удаленности и специфики природно-климатических условий молоко является социально значимым продуктом. Однако объем производства этого вида продукции молочного скотоводства не обеспечивает необходимую потребность населения острова. К 2010 году необходимо увеличить производство молока на 30-35%, а среднюю продуктивность коров в сельскохозяйственных предприятиях повысить до 5000 кг молока.

Диссертационная работа посвящена решению проблемы использования голштинской породы скота при внутрипородной селекции, выполненной автором с 1978 по 2005 годы в соответствии с тематическим планом Сахалинского научно-исследовательского института сельского хозяйства и «Программой фундаментальных и приоритетных прикладных исследований Российской академии сельскохозяйственных наук по научному обеспечению развития агропромышленного комплекса Российской Федерации на 2001 –2005 гг.» (Задание 01.01 зоотехния).

Цель и задачи исследования. Целью работы являлась разработка методов совершенствования сахалинской популяции голштинской породы с использованием породных и адаптивных факторов. Для достижения цели исследований были поставлены следующие задачи:

- анализ происхождения и формирование сахалинской популяции голштинской породы крупного рогатого скота;

- изучение состояния генетических ресурсов популяции;

- разработка направления селекционной работы и методов разведения;

- повышение потенциала молочной продуктивности;

- оценка воспроизводительной способности коров;

- изучение взаимосвязи адаптации и селекции голштинской породы при чистопородном разведении в условиях муссонного климата Сахалинской области

-изучение влияния средовых и генетических факторов при оценке ответа на отбор по основным признакам продуктивности;

-выявление генетической обусловленности разных вариантов подбора при характеристике родственных групп и линий;

- определение критериев для отбора при внутрипородной селекции сахалинской популяции голштинской породы.

- оценка эффективности совершенствования сахалинской популяции.

Научная новизна исследований. Автором комплексно изучены селекционные процессы и динамика основных признаков продуктивности и экстерьера в первой адаптированной голштинской популяции в стране на протяжении ряда поколений, сформулированы научные положения, позволяющие повысить эффективность селекционно-племенной работы в специфических природно-климатических условиях Дальнего Востока. На основе длительного чистопородного разведения сахалинской популяции изучена эффективность селекционного процесса в направлении приспособленности, молочной продуктивности и экстерьера, определены направления дальнейшего совершенствования молочного скота в регионе.

Проведены исследования по уточнению и разработке методов создания высокопродуктивных стад, усовершенствованы методы проверки быков-производителей и их рационального использования, разработана программа разведения молочного скота для хозяйств Сахалинской области. В диссертационной работе впервые сформулировано теоретическое обоснование создания новых генотипов молочного скота, отличающихся высокой продуктивностью в экстремальных природных условиях с использованием разных популяций голштинской породы.

Выявлены относительные преимущества индивидуальных форм отбора при внутригрупповом и линейном разведении. Усовершенствована методика оценки экстерьерного типа у коров сахалинской популяции. Новым научным решением является оценка генетических резервов роста молочной продуктивности при сохранении воспроизводительной способности животных в пределах зоотехнической нормы.

Личный вклад соискателя. Экспериментальный материал выполнен лично автором или с участием соисполнителей, что в каждом случае указано в списке совместных публикаций. Диссертанту принадлежит как постановка проблемы, так и ее решение путем разработки методических положений, анализа и обобщения результатов и их внедрения в практику племенного дела.

Практическая значимость и реализация результатов исследований.

При непосредственном участии и научно-методическом руководстве соискателя в Дальневосточном федеральном округе создано лучшее по продуктивным качествам чистопородное стадо голштинского скота в ГОНО «ОПХ Тимирязевское»

Результаты исследований использованы при разработке:
  1. Плана селекционно-племенной работы с крупным рогатым скотом в хозяйствах Сахалинской области на период 1991-2000 годы.
  2. Программе селекционно-племенной работы в животноводстве и птицеводстве на период 2001-2005 годы.
  3. Плана селекционно-племенной работы с крупным рогатым скотом в репродукторе голштинской породы ОПХ «Тимирязевское» на период 2001-2005 годы.
  4. Плана селекционно-племенной работы с крупным рогатым скотом в репродукторе голштинской породы «ЗАО совхоз Заречный».
  5. Программе селекционно-племенной работы в животноводстве и птицеводстве на период 2007-2011 годы.

Все документы утверждены решением коллегии Управления сельского хозяйства и внедряются в производство.

Положения, выносимые на защиту.

- усовершенствованные методы селекции сахалинской популяции голштинской породы;

- продуктивные, экстерьерные и воспроизводительные способности скота голштинской породы при чистопородном разведении;

- эффективность отбора и подбора разных линий и родственных групп голштинской породы при чистопородном разведении;

- характеристика основных селекционных признаков в сахалинской популяции при адаптации;

- эффективность селекции голштинской породы крупного рогатого скота в условиях Сахалинской области.

Апробация работы. Результаты исследований доложены на координационных совещаниях Дальневосточного научно-методического центра (Хабаровск, 1990-1995, Петропавловск-Камчатский,1992, Магадан,1989, Южно-Сахалинск 2005), на научно-практических семинарах (Южно-Сахалинск 2001-2006), на международных симпозиумах ассоциации животноводов Азии (Саппоро-Хоккайдо, 2003), на межрегиональной научно-практической конференции в Ю-Сахалинске 2006, Ученом Совете Сахалинского Научно-исследовательского института сельского хозяйства (1985-2006 гг.).

Публикация материалов диссертации. По материалам диссертации опубликовано 33 научные работы, в том числе 10 в центральных республиканских журналах, 2 в зарубежных, монографии. По итогам конкурса 2002 года, получена почетная грамота РСХН за лучшую завершенную научную работу.

Объем и структура работы. Диссертационная работа изложена на 318 страницах текста компьютерного набора с 109 таблицами, 58 рисунками и 16 приложениями и включает введение, обзор литературы, материал и методы исследований, результаты собственных исследований, выводы и практические предложения. Список литературы содержит 313 источников, в том числе 57 на иностранных языках.


2. Материал и методика исследований


Исследования проведены с 1978 по 2005 гг. на Сахалинской государственной комплексной сельскохозяйственной опытной станции (в настоящее время ГНУ Сахалинский научно-исследовательский институт сельского хозяйства и ГОНО ОПХ«Тимирязевское» Российской академии сельскохозяйственных наук). Молочное стадо коров и молодняк этого хозяйства представляют селекционное ядро сахалинской популяции голштинской породы, выведенной путем чистопородного разведения с использованием быков-производителей американской, канадской и японской селекции.

Дополнительные исследования проведены в ФГУП «Сахалинское» по племенной работе, а также во всех хозяйствах, занимающихся разведением молочного скота. Общая схема исследований представлена на рис. 1.

На одну условную голову скота в среднем по области ежегодно заготавливается кормов по общей питательности 23 - 25 цн. кормовых единиц, в том числе на период зимовки – 17 - 19 ц. кормовых единиц. Среднегодовой удой коров в ОПХ «Тимирязевское» в 2005 г. составил 6109 кг молока с содержанием жира 3,8%. На одну корову в год скормлено по 6203 энергетических корм. ед. В зимний период рационы коров и молодняка состояли из разнотравного силоса, сена, корнеплодов и концентратов, в летний – зеленой массы с окультуренных пастбищ и зеленой подкормки. Доение коров – трехкратное, содержание животных – стойлово-пастбищное.

При разведении сахалинской популяции необходимо было решить две задачи: первая - создание животных, отличающихся селекционными признаками с высокой продуктивностью, однородностью и стабильностью с уровнем гомозиготности не вызывающей инбредной депрессии снижения жизнеспособности и приспособленности. Вторая задача требует высокого уровня гетерозиготности, сохранение в популяции генетической изменчивости необходимой для ее пластичности, адаптации и дальнейшего совершенствования.

.



Рис. 1. Общая схема исследований

Для этого необходим некоторый уровень дифференциации всей популяции на микропопуляции. Благодаря дифференцированной селекции в популяции формируются родственные группы, обладающие отличительными признаками. Степень дифференциации определяет межлинейные и межстадные различия в популяции.

Современные методы разведения предполагают внутрилинейный и межлинейный подборы.

При характеристике селекции оценивали эффективность подбора в соответствии с методами Д.С. Фолконера. Ожидаемый ответ на отбор рассчитывали с учетом интенсивности отбора (i) и стандартного отклонения (σp), то есть S = iσp

Ответ на отбор для признаков, характеризующих адаптацию, рассчитан по селекционному дифференциалу R= h2S, здесь селекционный дифференциал S, является взвешенным средним преимущества матерей перед дочерьми, которое соответствует относительному генетическому влиянию на потомство или ответу на отбор.

Kоррелированный ответ по адаптивности (CR)оценивали с учетом наследуемости коррелированного признака (hy), стандартного отклонения адаптивного признака (w), наследуемости адаптивного признака (hW), и стандартного отклонения коррелированного признака(y) CRy = rahYhwYW

Точность оценки племенных качеств оценивали с учетом наследуемости признака (h2) и влияния внешней среды (средовая корреляция между полусестрами с2).

При оценке генотипа быка по первой лактации дочерей, величину повторяемости определяли, исходя из выражения:

где: Rg – повторяемость оценки; h2 – коэффициент наследуемости, n – число дочерей, с2 – средовая корреляция между полусестрами.

Повторяемость оценки в данном случае зависит от числа дочерей, величины коэффициента наследуемости признака и средовой корреляции между полусестрами..

Величину коэффициента наследуемости определяли на основе расчета варианс по формуле:

где: 2s – варианса отцов; 2d – варианса дочерей; 2т – случайная варианса.

Для определения наследуемости между линиям, внутри линий и родственных групп разделяли аддитивные компоненты фенотипических дисперсий. В результате межлинейная наследуемость определи из следующего выражения:, а наследуемость внутри линий :

где: h2f - коэффициент межлинейной наследуемости,

h2w - коэффициент внутрилинейной наследуемости, t – коэффициент внутригрупповой корреляции, n – число коров в линии, N – число быков в линии, r – коэффициент родства.

Оценка межлинейной генетической изменчивости важна при выборе линий для дальнейшего разведения Внутрилинейная генетическая дисперсия до начала инбридинга подразделяется на дисперсию внутри линии (δ2S) и между линиями (δ2d). При слабом инбридинге и внутрилинейном подборе наследуемость равна:



где h2t – наследуемость в пределах линии;

Ft – коэффициент инбридинга в пределах линии;

h20 – первоначальная наследуемость исходной популяции. Племенная ценность проверяемых быков установлена независимо от уровня кормления животных, за исключением неблагоприятных условий. Для стад, в которых продуктивность дочерей данного быка сравнима с продуктивностью сверстниц, вычисляли их среднюю продуктивность. Эти стада использовали для определения разницы между средней продуктивностью дочерей и средней продуктивностью сверстниц в данном стаде (-). При сравнении продуктивности дочерей быка со сверстницами в обработку не включаются удои дочерей, лактация которых составляет менее 180 дней, а также те дочери, у которых нет соответствующих сверстниц. К сверстницам отнесены те коровы, которые родились в один и тот же год и отделились в то же время, но от других быков.

Суммарные результаты оценки быков по продуктивности дочерей получены с использованием весовых коэффициентов Робертсона:



где: (х - у) – разность дочери сверстницы.

Разницу между дочерями и сверстницами по продуктивности с учетом генетических различий между стадами (тип подбора, сочетаемость линий, влияние матерей и др.) определяли с учетом коэффициента регрессии:

где: h2 - коэффициент наследуемости; m - весовой коэффициент; b - коэффициент регрессии.

При оценке h2 , так же как и при регрессии потомков на родителей учитывали различие в дисперсиях матерей отцов и дочерей. Это связано с тем, что при формировании сахалинской популяции использовались преимущественно импортные быки-производители. В связи с этим в регрессию дочь – отец и корреляцию между полусестрами необходимо внести поправку на различие в величине дисперсии.

Так, если b – регрессия дочь – отец, то скорректированная будет b = b ♀/ ♂ (Фолконер, 1985).

При характеристике типа телосложения взяты четыре главные оценки: за общий вид животному может быть определено не более 30 баллов; за строение тела – 20; выраженность молочного типа – 20 и строение вымени – 30 баллов.

По набранной сумме баллов при оценке по экстерьеру голштинские коровы получают одну из пяти категорий, которая записывается в индивидуальную карточку животного:

В методике предусматривается использование основных показателей, характеризующих тип коровы для племенных стад сахалинской популяции голштинской породы. Каждый показатель представляет собой развитие признака у коровы на 2-4-ом месяце после первого отела. Степень соответствия этих показателей у отдельных животных с модельными измеряется баллами.

Модельные показатели признаков типа представляют желательные признаки, которые могут быть достигнуты в результате целенаправленной селекции у коров сахалинской популяции.

Путем сопоставления отдельных статей тела животных в одном и том же возрасте коров с модельными показателями типа представляется возможным уловить особенности экстерьера и дать ему объективную оценку. Для этого стати животных оценивают соответственно: до 1 балла от 2 до 3 баллов от 3 до 5 баллов

При этом признаки типа объединены в семь основных разделов. Максимальная оценка по типу может иметь не более 100 баллов. Классификацию клинически здоровых коров проводили на 2-4-м месяце после первого отела за 0,5-1 часа до доения. Осмотр одного и того же животного проводился одним бонитером три раза или тремя бонитерами одновременно. При каждом осмотре сравнивали отдельные стати тела животного с модельными признаками, имеющимися на специальной карточке.

Степень соответствия модельных признаков статей тела оцениваемой коровы измеряли в баллах.

Окончательный результат из трех последовательных оценок. На основе полученных данных вычисляли среднее по стаду:

где: х1 хn хi - оценка отдельных признаков, балл; n – число признаков.

Для определения стандартизированной передающей способности быка применялась шкала, описывающая графически развитие у дочерей каждого признака в отдельности и величину отклонения от среднего показателя.

Стандартизация по общей шкале позволяет определить, по какому показателю животное имеет отклонение от средней величины признака в

популяции. В конечном счете – это оценка быка с потенциальной разницей по стандартизированной шкале в пределах доверительного интервала. Для оценки STA применена формула: где: STA – значение племенной ценности быка по одному из признаков типа, балл; PDT –средний показатель по стаду; PDX – средний показатель по одному из признаков дочерей типа, балл;х – стандартное отклонение всех оценок для соответствующих признаков типа.

Племенная ценность быка по типу определяли, исходя из разницы между показателями каждого из признаков типа у дочерей и сверстниц.

Характеристику прижизненных качеств кожи у полновозрастных животных (коровы третьего отела) определяли по методике Е.А. Арзуманяна: толщину кожной складки на середине последнего ребра, на локтевом бугре, шее и правой передней четверти вымени. Запас кожи оценивали измерением металлической линейкой оттянутой складки кожи на соответствующих участках. Эластичность кожи определяли по продолжительности времени, за которое оттянутая перпендикулярно к туловищу кожная складка возвращалась в свое исходное состояние.

При изучении качества волосяного покрова, выстригали шерсть на правой стороне туловища в середине последнего ребра на площади четырех квадратных сантиметров с помощью специального приспособления. Перед исследованием волосы промывали в эфире и высушивали в алюминиевых бюксах при комнатной температуре.

Для оценки густоты волосяного покрова из каждого образца брали 2,5% количества волос, затем полученное число умножали на 10, в результате получали массу волос на одном квадратном сантиметре. Среднюю длину волос определяли путем измерения 20 волосков, взятых из средней пробы. Отбор пробы производили произвольно, а длину волосков измеряли линейкой с точностью до одного миллиметра. Толщину волоса измеряли под микроскопом с помощью окуляр-микрометра при увеличении 40х12. Для этого отобранную среднюю пробу измельчали и тщательно перемешивали. Диаметр волосков измеряли в 30 пробах, взятых пропорционально массе волос с четырех квадратных сантиметров.

Морфологическую оценку вымени коров проводили по методике Латвийской сельскохозяйственной академии и главного управления животноводства МСХ СССР (1970). Для этого за один час до доения измеряли длину, ширину, горизонтальный обхват, глубину четвертей, высоту вымени над землей, размеры сосков и расстояние между ними.

Функциональные свойства вымени у коров определяли с помощью доильного аппарата для раздельного доения долей вымени. Аппарат изготовлен из деталей серийного доильного аппарата путем реконструкции доильного ведра и коллектора со стабилизацией вакуума в подсосковом канале доильных стаканов.

Для выявления и описания дефектов экстерьера сравнивали имеющиеся аномалии с аналогичными описаниями, содержащиеся каталогах быков-производителей и других источниках. Полученные данные включали в оценку экстерьера для определения степени их генетической обусловленности. Недостатки и дефекты экстерьера определяли путем сравнения отдельных статей экстерьера, имеющих отклонения от стандарта. Для контроля наследственных аномалий, проведено описание аномалий и условий, связанных с рождением приплода. С целью ограничения воздействия условий кормления и содержания животных, сравнение статей экстерьера проводили в одинаковом возрасте. Оценка недостатков экстерьера проведена в возрасте 1; 3; 6; 12; 18 месяцев, а идентификация на 2-3 месяце после первого отела коров.

Для характеристики селекционно-генетических параметров популяции проведена оценка коров разного возраста и происхождения по следующим основным показателям: продуктивность за полную, укороченную и 305-дневную лактации: удой (по результатам контрольных доек один раз в месяц), содержание жира и белка в молоке (один раз в месяц в суточной пробе методом Гербера и на приборах Лактан 1-4).

Оценка экстерьера – в соответствии со стандартной шкалой линейной характеристики типа для голштинской породы.


3. Результаты исследований

3.1. Эволюция сахалинской популяции голштинской породы

В период освоения Сахалина русские военные посты начали завозить и крупный рогатый скот в 1873 году. Животных завозили в основном из Забайкалья, но они были мелкие и малопродуктивные. На юг острова с 1906 года японская акционерная кампания «Карафуто Кайся» впервые привезла животных голштинской и айрширской пород для экспериментальных целей, которое было размещено на центральной опытной станции при японском губернаторстве. Через несколько лет интенсивность завоза животных этой породы резко возросла, и в 1913 году на юге Сахалина уже насчитывалось 1492 головы этой породы, а в 1942 году его количество возросло до 7591 голов.

В послевоенное время голштинскую породу начали интенсивно разводить по всей территории Сахалинской области. Быстрому распространению животных этой породы способствовала деятельность сельскохозяйственной опытной станции. На сельскохозяйственной опытной станции сохранились лучшие высокопродуктивные животные, от которых получали племенной молодняк и продавали в разные районы области (рис.2, 3).






Рост породности скота сопровождался повышением его продуктивности при одинаковых затратах на кормление и выращивание молодняка. Наибольшее увеличение молочной продуктивности произошло в хозяйствах, в которых быстрее шло увеличение числа чистопородных голштинских коров.

Решающее значение в формировании сахалинской популяции голштинской породы принадлежит работе сахалинской сельскохозяйственной опытной станции. Здесь выращивали и продавали племенной молодняк во все хозяйства области (рис. 4).




Одновременно с ростом поголовья скота улучшился и его породный состав. С 1965 года по 1990 год количество животных в общественном секторе увеличилось более чем в три раза, а количество чистопородных животных возросло с 3,5% до 99,5%.

3.2.Генеалогическая структура стада

Генеалогическая структура голштинских стад в хозяйствах Сахалинской области сформирована в результате использования быков-производителей различного происхождения (табл. 1).

Таблица 1 – Генеалогическая структура стада сахалинской популяции



Линия,

родственная группа

1970

1980

1990

2005

гол.

%

гол.

%

гол.

%

гол.

%

Вис Бек Айдиал 1013415

-

-







15382

23,7

601

13,9

Инка Суприм Рефлекшн 121004

2148

7,7

5021

8,8

645

1,0

-

-

Карнейшн Медкеп Баттер Бой 1152252

1272

4,6

4098

7,2

236

0,4

1

-

Монтвик Чифтейн 95679

-

-

21

0,04

17836

27,5

1408

32,6

Рефлекшн Соверинг 198998

1935

7,0

1080

1,9

23016

35,5

978

22,6

Розейф Ситейшн 267150

-

-

4498

7,9

2076

3,2

34

0,8

Силинг Трайджун Рокит 252803

1383

5,0

5009

8,8

1816

2,8

431

9,9

Агро Акрес Панси Эйсс

-

-

-

-

1753

2,7

-

-

Родственная группа Жасмина 841

-

-

4603

8,1

673

1,0

-

-

Анна’С Адема 30587


15763

57,0

12849

22,6

277

0,4

-

-

Родственная группа

Би-Би-Хопа 11713

-

-

281

0,5

29




-

-

Пабст Гувернера 882233

-

-

1521

2,7

716

1,1

-

-

Прочие

5171

18,7

8150

14,3

370

0,6

870

20,2