Методика изучения ишемического-реперфузионного повреждения миокарда у крыс на аппарате "изолированное сердце"
Дипломная работа - Медицина, физкультура, здравоохранение
Другие дипломы по предмету Медицина, физкультура, здравоохранение
?ия реакции отторжения, а прогресс в области иммунотолерантности. Уже есть несколько подходов, с помощью которых можно попытаться обмануть организм. Например, вместе с сердцем пересаживают костный мозг - источник иммунных клеток - от того же донора. Развившиеся из него иммунные клетки "работают" против тканей хозяина и тем самым как бы уравновешивают клетки хозяйские. В других опытах, проведенных пока на животных, эмбриону, у которого еще не сформировался иммунитет, вводят взвесь клеток от множества особей - будущий организм до конца жизни будет воспринимать ткани этих доноров как собственные. Конечно, трудно надеяться, что кто-то из хозяев введенных клеток окажется потенциальным донором, если у получателя такой "прививки" через несколько десятилетий возникнут проблемы с сердцем. Но рано или поздно иммунологический барьер будет преодолен".
Другая трудность: в странах, где кардиотрансплантация поставлена на поток, число нуждающихся в ней больных почти вдесятеро превышает количество донорских сердец.
Система выявления и сохранения последних постоянно совершенствуется, но дать сердец вдесятеро больше, чем сейчас, она не сможет никогда. Кроме того, кто вправе разрешить изъятие сердца у только что умершего человека?
Выхода два. Во-первых, ксенотрансплантация - пересадка органов от животных. Конечно, трудности с иммунитетом там будут на порядок выше, возникнут и чисто анатомические проблемы. Но существуют специально выведенные линии животных, набор антигенов у которых приближен к человеческому, так что это вполне перспективный путь. А второй подход - протезирование.
Искусственное сердце уже сейчас широко применяется как "мост" - его вживляют пациентам, которые могут не дождаться подходящего донора.
Бывает, на нем живут по два года и больше, но качество такой жизни совсем иное, чем с пересаженным сердцем, - грубо говоря, такой пациент еще более "привязан к розетке". Кроме того, искусственное сердце порождает ряд дополнительных проблем: материалы, совместимые с живой тканью, источник питания, регуляция. По всем этим направлениям ведутся работы.
Сердечные клапаны - простые, чисто механические устройства. Работы по их протезированию идут уже полвека, но и до сих пор искусственные клапаны заметно уступают донорским, даже свиным. Так что хотя теоретически протезирование - самое перспективное направление, на практике оно, вероятно, еще долго останется в тени трансплантации. [5]
Глава 2. Материалы и методы
Исследование выполнено на 20 крысах массой 200-300г., разделенных на группы по 10 животных (рис. 1).
У крыс, находящихся под эфирным наркозом, вскрывали грудную клетку, извлекали сердце. В отверстие аорты вставляли канюлю от аппарата "изолированное сердце" (рис. 2) и начинали пропускать через нее подогретый до 37-39оС аэрированный раствор Кребса-Хензелейта. Данный раствор по физико-химическим характеристикам близок к составу крови. Ток перфузируемой жидкости захлопывает полулунные клапаны, и питающий раствор устремляется по коронарным сосудам. Сердце начинает сокращаться. Сокращающееся сердце фиксировали к канюле. Перфузионную жидкость, прошедшую через сердце, собирали в эппиндорфы для дальнейших биохимических исследований (определение маркеров ишемического повреждения - КФС-МВ, тропонин М и I).
Первая опытная группа включала животных, которых подвергли ишемии путем прекращения поступления питающего раствора на 40 минут. Так моделировалась ишемия. Вторая группа служила контролем.
После проведенных экспериментов наблюдали за сокращением изолированного сердца в течение 2 часов. По истечении данного времени получали 4 поперечных среза от каждого сердца и помещали в емкости с буферным раствором ( ph=7,4) и раствором трифенил тетразолия хлорида (ТТХ). Данные емкости помещали в термостат на 15 минут до образования красного формазана. Раствор ТТХ окрашивает живую ткань с сохраненной лактатдегидрогеназной активностью, а ишемизированную ткань с утраченной ферментной активностью не окрашивает. Окрашенные срезы фотографировали, затем обрабатывали с помощью программы Adobe Photoshop для более точной оценки площади ишемизированной ткани. [7, 9, 10]
Глава 3. Полученные результаты
При оценке результатов было выявлено, что в опытной группе срезы миокарда обладают бледной окраской (рис. 3а), тогда как в контрольной группе срезы имеют интенсивное окрашивание (рис. 4а).
После обработки фотографий со срезами сердца крыс в программе Adobe Photoshop удалось оценить площадь ишемизированного миокарда:
в опытной группе, площадь повреждения составила 40% (рис. 3б)
в контрольной группе, зона повреждения - 16% (рис. 4б)
Изменения в миокарде Группы животныхОкрашивание миокардаПлощадь ишемизированного миокардаОпытная группаБледно-розовое40%Контрольная группаИнтенсивное 16%
Заключение
Таким образом, результаты нашего исследования показали, что применение методики ишемического - реперфузионного повреждения миокарда у крыс на аппарате "изолированное сердце" высокоэффективно в экспериментальных исследованиях.
Освоенная методика показывает достоверную разницу в площади зоны повреждения миокарда крыс в контрольной и опытной группах.
В контрольной группе площадь зоны повреждения - 16%, в опытной группе - 40%.
Список литературы
1.Багрий А.Э., Дядык А.И. "Ишемическая болезнь сердца. Современные подходы к лечению". Донецк, 2006 г.- 211с.