Исследования иммунобиохимической лаборатории ГНУ СИБНИИЖ
Отчет по практике - Сельское хозяйство
Другие отчеты по практике по предмету Сельское хозяйство
?ественно одну из цепей исходной ДНК. Используется в некоторых методиках секвенирования и гибридизационного анализа. ПЦР проводится как обычно, за исключением того, что один из праймеров берется в большом избытке.
Количественная ПЦР (Quantitative PCR, Q-PCR (англ.)) - используется для быстрого измерения количества определенной ДНК, кДНК или РНК в пробе.
Количественная ПЦР в реальном времени (Quantitative real-time PCR) - в этом методе используют флуоресцентно меченые реагенты для точного измерения количества продукта реакции по мере его накопления.
Touchdown (Step-down) ПЦР (Touchdown PCR (англ.)) - с помощью этого метода уменьшают влияние неспецифического связывания праймеров на образование продукта. Первые циклы проводят при температуре выше температуры отжига, затем каждые несколько циклов температуру снижают. При определённой температуре система пройдёт через полосу оптимальной специфичности праймеров к ДНК.
Метод молекулярных колоний (ПЦР в геле, англ. Colony - PCR Colony) - акриламидный гель полимеризуют со всеми компонентами ПЦР на поверхности и проводят ПЦР. В точках, содержащих анализируемую ДНК, происходит амплификация с образованием молекулярных колоний.
ПЦР с быстрой амплификацией концов кДНК (англ. Rapid amplification of cDNA ends, RACE-PCR)
ПЦР длинных фрагментов (англ. Long-range PCR) - модификация ПЦР для амплификации протяженных участков ДНК (10 тысяч оснований и больше). Используют две полимеразы, одна из которых - Taq-полимераза с высокой процессивностью (то есть, способная за один проход синтезировать длинную цепь ДНК), а вторая - ДНК полимераза с 3'-5' экзонуклеазной активностью. Вторая полимераза необходима для того, чтобы корректировать ошибки, внесённые первой.
RAPD PCR (англ. Random Amplification of Polymorphic DNA PCR, ПЦР со случайной амплификацией полиморфной ДНК - используется тогда, когда нужно различить близкие по генетической последовательности организмы, например, разные сорта культурных растений, породы собак или близкородственные микроорганизмы. В этом методе обычно используют один праймер небольшого размера (около 10 п.н.). Этот праймер будет частично комплементарен случайным участкам ДНК исследуемых организмов. Подбирая условия (длину праймера, его состав, температуру и пр.), удаётся добиться удовлетворительного отличия картины ПЦР для двух организмов.
PCR с использованием горячего старта (англ. Hot-start PCR - модификация ПЦР с использованием парафина для разделения верхней (содержащей буферный раствор, полимеразу, матрицу и, если необходимо, деионизованную воду) и нижней (содержащей деионизованную воду, праймеры и дезоксирибонуклеотиды) смесей с целью недопущения раннего смешивания компонентов реакции. До начала реакции амплификатор необходимо прогреть до температуры плавления парафина (60-80C).
Если нуклеотидная последовательность матрицы известна частично или неизвестна вовсе, можно использовать вырожденные праймеры, последовательность которых содержит вырожденные позиции, в которых могут располагаться любые основания. Например, последовательность праймера может быть такой: …ATH…, где Н - А, Т или С.
ПЦР используется во многих областях для проведения анализов и в научных экспериментах [7].
Выводы
1.ГНУ СИБНИИЖ является одним из крупнейших научно-исследовательских центров в области сельского хозяйства на территории России.
2.Разработки ГНУ СИБНИИЖ в области кормления, разведения и содержания сельскохозяйственных животных вносят большой вклад в развитие животноводства.
.Исследования сотрудников иммунобиохимической лаборатории вносят огромный вклад в изучение генотипов животным по ряду локусов, а так же в представление научной общественности об антигенах крови.
.В ходе прохождения производственной практике мной был получен бесценный опыт в области выделения ДНК, ПЦР-реакций и серологических реакций на антигены крови.
Список используемой литературы
1.Глик Б., Пастернак Дж. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение. / Пер. с англ. ISBN 5-03-003328-9. - М.: Мир, 2002. - 589 с., ил.
2.Ларионова П.В. Разработка и эксперементальная апробация систем анализа полиморфизма генов-кандидатов липидного обмена у крупного рогатого скота. / Дисс. на соиск. уч. степени к.б.н. - Дубровицы, 2006. - 127 с.
.Патрушев Л.И. Искусственные генетические системы. / В 2 т. - ISBN 5-02-033278-X. - М.: Наука, 2005.
.Щелкунов С. Н. Генетическая инженерия. / ISBN 5-94087-098-8. - Новосибирск: Сиб. унив. изд-во, 2004. - 496 с.; ил.
.
.
.