Использование дифракционных методов для анализа структуры, фракционного состава и равновесных взаимодействий биологических макромолекул
Курсовой проект - Биология
Другие курсовые по предмету Биология
?рованы у пациентов с нормолипемией. Связано это, по-видимому, с тем, что в данной работе использовали объединенную сыворотку, в которой образовалось много дополнительных комплексов ЦИК ЛП - антитело, которые также преципитировали с ПЭГ и привели к завышенным значениям степени модификации.
Из полученных в работе результатов видно, что, как и отмечалось в работах [1, 2] при различных концентрациях ПЭГ происходит образование различающихся по молекулярной массе и размерам иммунных комплексов. Так, например, низкие концентрации ПЭГ ( 20 мг/мл) вызывают, по-видимому, преципитацию более низкомолекулярных белковых фракций.
Следует подчеркнуть, что методика детального анализа фракционно-компонентного состава сывороточных ЛП на основе метода МУРР появилась совсем недавно [19, 20]. Поэтому проведение данного исследования является важным этапом дальнейшего развития новых высокоинформативных методов анализа сывороточных ЛП крови, в частности, модифицированных ЛП, для научной и практической медицины.
Выводы
1.Успешное изучение основ теории и практики использования двух физических (дифракционных) методов анализа (МУРР и СР) позволило применить эти методы для анализа структуры и фракционного состава биологических макромолекул (суммарных сывороточных белков крови, общих и модифицированных ЛП), а также их комплексов.
2.В результате исследования эффектов равновесных молекулярных взаимодействий суммарных белков, содержащихся в сыворотках крови, с различными полиэтиленгликолями (ПЭГ-1000, ПЭГ-4000, ПЭГ-6000, ПЭГ-8000, ПЭГ-20000) в допреципитационном диапазоне концентраций полиэтиленгликолей (0 1,5%) установлено, что механизмы равновесного комплексообразования ПЭГ-4000, ПЭГ-6000 и ПЭГ-8000 с сывороточными белками очень близки и не зависят от молекулярной массы полиэтиленгликолей.
.Изучение молекулярных взаимодействий белков сывороток крови с различными полиэтиленгликолями (ПЭГ-1000, ПЭГ-4000, ПЭГ-6000, ПЭГ-8000 и ПЭГ-20000) в преципитационном диапазоне концентраций полиэтиленгликолей 3 11% позволило выбрать в качестве оптимального ПЭГ-6000 с концентрацией 6 8% для препаративного выделения и анализа модифицированных ЛП.
.Показано, что полиэтиленгликоли ПЭГ-4000 и ПЭГ-8000, хотя и дают близкие результаты, но не удовлетворяют методическим условиям: требуются высокие концентрации полиэтиленгликолей и происходит неполное отделение модифицированных от общих ЛП. Полиэтиленгликоли с молекулярными массами 1000 и 20000 Д из-за концентрационных и гидродинамических эффектов вообще не могут использоваться для целей препаративного выделения модифицированных ЛП.
Список литературы
1.Канская Н.В., Карпов Р.С. Способ определения модифицированных липопротеидов крови. А.С. №1720015А1. МКИ G01N 33/92. Приоритет от 25.10.89. Опубл. 15.03.92 г. Бюлл. №10.
2.Канская Н.В., Карпов Р.С. Способ выявления лиц с фактором риска ишемической болезни сердца. А.С. №1327007, МКИ G01N 33/564, Приоритет от 26.07.85, Опубл. 30.07.87 г., Бюлл. №28.
.Карпов Р.С., Канская Н.В., Осипов С.Г. Роль иммунной системы в развитии гиперлипопротеидемий. Томск: Изд-во Томского Университета, 1990, 165.
.Климов А.Н., Никульчева Н.Г. Обмен липидов и липопротеидов и его нарушения. Руководство для врачей. М., Харьков, Минск: Изд-во Питер, 1999, 505.
.Марри Р., Греннер Д., Мейес П., Родуэлл В. Биохимия человека. М.: Мир, 1993, 1, 225-298.
.Холодова Ю.Д., Чаяло П.П. Липопротеины крови. Киев: Наукова думка, 1990, 208.
7.Tardieu A., Mateu L., Sardet C., Weiss B., Luzzati V., Aggerbeck L., Scanu A.M. Structure of human serum lipoproteins in solution. //J. Mol. Biol. 1976. V.101. P.129-153.
.Laggner P., Muller K.W. The structure of serum lipoproteins as analysed by x-ray small-angle scattering. //Quarterly Rev. of Biophys., 1978. V.11. №3. P.371-425.
.Mills G.L., Lane P.A., Weech P.K. Laboratory techniques in biochemistry and molecular biology. A guidebook to lipoprotein technique. //Elsevier. 1984. V.14. 512p.
.Климов А.Н., Никульчева Н.Г. Липопротеиды, дислипопротеинемии и атеросклероз. Л: Медицина. 1984. С. 1-168.
11.Gotto A.M., Pownal H.J., Havel R.J. Plasma lipoproteins. //Methods in Enzimology. 1986. V.128. Part A.P.3-122.
.Bellamy M.F., Nealis A.S., Aitken J.W., Bruckdorfer K.R., Perkins S.J. Structural changes in oxidised low-density lipoproteins and of the effect of the anti-atherosclerotic drug probucol observed by synchrotron X-ray and neutron solution scattering. //Eur.J. Biochem. 1989. V.183. P.321-329.
.Shen B., Scanu A.M., Kezdy F.J. Structure of human serum lipoproteins inferred from compositional analysis. //Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1977. V.74. №3. P.837-841.
14.Cвергун Д.И., Фейгин Л.А. Рентгеновское и нейтронное малоугловое рассеяние. М.: Наука, 1986, 280 с.
.Кантор Ч., Шиммел П. Биофизическая химия. М.: Мир, 1984. Т.2. С. 309-429.
.Тузиков Ф.В., Тузикова Н.А., Мистюрин Ю.Н. Способ анализа липопротеидов в плазме крови методом малоуглового рентгеновского рассеяния. Патент РФ №2099693, МКИ G01N 33/53, Приоритет от 22.12.93 г., Опубл. 20.12.97 г., Бюлл. №35.
.Тузиков Ф.В., Тузикова Н.А., Панин Л.Е., Никитин Ю.П., Крылова И.Н. Определение фракционного состава липопротеинов крови методом малоуглового рентгеновского рассеяния. Биологические мембраны, 1998, 15 (4), 421-433.
.Тузиков Ф.В., Тузикова Н.А., Панин Л.Е., Никитин Ю.П. Новый метод диагностики нарушений липидного обмена. Вестник РАМН, 1998, 3, 42-47.
.Тузиков Ф.В., Рагино Ю.И., Тузикова Н.А., Иванова М.В., Галимов Р.В., Никитин Ю.П. Определение фракционного и субфракционного составов липопротеинов крови методом малоуглового рентгеновского рассеяния. Сравнение с биохимическим методом. // Вопросы медицинской химии. 2002. Т.48. №1. С. 84-93.
20.Tuzikov F.V., Tuzikova N.A., Galimov R.V., Panin L.E., Nevinsky G.A. General model to describe the structure and dynamic balance between different human serum lipoproteins and its practical application. //Med. Sci. Monit. 2002. V.8 (6). №6. P.79-88.
21