Функциональные свойства эритроцитов при хронических рецидивирующих воспалительных заболеваниях
Информация - Медицина, физкультура, здравоохранение
Другие материалы по предмету Медицина, физкультура, здравоохранение
жести, частота обострений до 5 раз в год. С диагнозами хронический синусит и хронический ларингит - 3 больных; и один больной с диагнозов ЧДБ. Показатель СОЭ был в пределах нормы. Все больные на момент исследования находились в состоянии ремиссии.
Контрольную группу составили 12 здоровых доноров сопоставимого возраста со станции переливания крови.
Оценка агрегационной способности эритроцитов проводилась фотометрическим методом. В качестве стандартного агрегирующего агента использовался алциановый голубой в концентрации 0,2%. Для этого утром натощак из локтевой вены в пластиковую пробирку брали 5 мл крови, которую стабилизировали 3,8% раствором цитрата натрия в соотношении 9:1. Для приготовления клеточной суспензии эритроцитов полученную пробу отстаивали в течение 30 минут (при 200 С), отбирали плазму, затем трижды отмывали в 10 мл физиологического раствора. Осаждали эритроциты при центрифугировании со скоростью 1000 об/мин в течение 10 минут.
Ход измерения:
Предварительно прибор калибровали по двум точкам. При этом светопропускание образца эритроцитарной суспензии принимали за 0%, а светопропускание индуктора в физиологическом растворе - за 100%. Для оценки агрегации в кювету прибора последовательно вносили 380 мкл суспензии отмытых эритроцитов, стандартизованной по оптической плотности, и магнитную мешалку. Скорость вращения мешалки 700 оборотов в минуту. Кювету предварительно термостатировали в течение 5 минут при 370С. На десятой секунде в кювету добавляли 80 мкл 0,2% раствора алцианового голубого. Запись показателей агрегации эритроцитов проводили в течение 10 минут, через каждые 30 секунд.
Для оценки агрегации эритроцитов использовали следующие раiетные показатели:
1.V - скорость агрегации за первые 60 секунд после добавления индуктора (%/мин.).
V = степень агрегации на первой минуте после добавления индуктора Ч 100/ максимальная степень агрегации.
2.MAX - максимальная степень агрегации (%).
.Т - время, соответствующее максимальной степени агрегации (с).
Статистическую обработку данных проводили с использованием пакета статистических программ Statistica 6.0.
Глава 3. Результаты собственных исследований
На первом этапе работы нами проведен подбор оптимальной концентрации индуктора агрегации эритроцитов (альциановый голубой). По данным литературы альциановый синий является катионным красителем фталоцианиновой группы и обладает способностью связываться с гликолипидами, гликопротеидами и кислыми мукополисахаридами мембраны эритроцитов и тем самым вызывать их агрегацию. В низкой концентрации алциановый голубой не повреждает клетки, не проникает в цитоплазму, но сорбируется в количестве, пропорциональном содержанию белков и углеводов в гликокаликсе [21]. Данный индуктор используется для определения агрегационных свойств эритроцитов в концентрации 0,05% - 0,4%.
Мы проанализировали агрегацию эритроцитов здоровых лиц с использованием раствора альцианового синего в концентрации от 0,05% до 0,4%. При этом выявлено дозозависимое увеличение агрегации эритроцитов под действием данного индуктора. При концентрации 0,05% агрегация эритроцитов практически не наблюдалась, при 0,1% - слабовыраженная агрегация, при 0,2% - выраженная агрегация, при 0,4% - максимально выраженная агрегация эритроцитов, уже на первой минуте наблюдалось 100% светопропускание в пробе. На рисунке 3.1. представлены данные об изменении степени агрегации эритроцитов при различных концентрациях альцианового голубого.
Рисунок 3.1. - Степень агрегации эритроцитов на первой минуте, в зависимости от концентрации индуктора (альциановый голубой).
Значения показателей агрегации эритроцитов у обследованных пациентов и здоровых лиц при использовании в качестве индуктора агрегации 0,2% раствор альцианового голубого представлены в таблице 3.1.
Таблица 3.1 - Показатели агрегации эритроцитов у обследованных пациентов и здоровых лиц
Показатели агрегации Доноры (n=12)Больные хроническими рецидивирующими воспалительными заболеваниями (n=23)Хронический рецидивирующий фурункулез (n=16)V, %/мин28,81,737,32,2*38,82,8*MAX, ,82,770,01,9*70,42,4*Т, мин8,30,38,20,28,00,2
Примечание. * - различия достоверны при сравнении с группой здоровых лиц (р < 0,05). Индуктор - 0,2% раствор алцианового голубого.
Как видно из таблицы 3.1., у больных хроническими рецидивирующими воспалительными заболеваниями по сравнению со здоровыми лицами отмечается увеличение скорости агрегации эритроцитов (37,32,2%/мин. - у больных, 28,81,7%/мин. - у здоровых, р<0,0136). Изменение данного показателя может быть связано с нарушением структуры и функциональных свойств мембран эритроцитов. Основным звеном конформационных изменений эритроцитарной мембраны является активация процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) и белков с накоплением высокотоксичных первичных и вторичных продуктов обмена веществ, что влечет за собой повышение вязкости цитозоля, особенно в примембранных слоях - гликокаликсе. Кроме того, длительное влияние аномальных продуктов метаболизма, приводит к конформации белково-фосфолипидного бислоя мембраны эритроцитов, уплотнению их с резким снижением трансмембранной транспортной функции, формированием, так называемой, жесткой мембраны. С другой стороны, под действием мембраноповреждающих агентов (например, бактериальных токсинов) происходит образование дополнительных каналов проницаемости - кластеров, что влечет за собой увеличение диффу