Авторефераты по всем темам >>
Авторефераты по биологии
Диагностика респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота и особенности проявления болезни в современных условиях ведения животноводства
Автореферат докторской диссертации по биологии
|
Страницы: | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | |
СКАЧАТЬ ОРИГИНАЛ ДОКУМЕНТА2.2.8.3. Частота выделения возбудителей смешанных вирусных
инфекций и бактерий семейства Pasteurellaceaeот больных телят в молочных хозяйствах, неблагополучных по респираторным болезням
Целью настоящего раздела было изучение частоты выявления респираторно-синцитиального вируса в ассоциациях с вирусами ИРТ, ВД-БС и бактериями семейства Pasteurellaceaeв крупных молочных хозяйствах, стационарно неблагополучных пореспираторным болезням КРС.
Из данных таблицы 10 видно, что количество проб, содержащих вирус ИРТ в моноварианте, составляло 30%, ВД-БС КРС - 18%; ассоциации этих вирусов - 71,7%. Высокий процент выявления положительных проб свидетельствует о широком распространении этих инфекций среди восприимчивого поголовья и, возможно, ведущей роли вирусов в инфекционном процессе. Культуры пастерелл изолировали в 33,3% случаев; при этом они относились к видама P. multocida (20%)а иа M. haemolytica (13,3%).
Таблица 10 - Частота выделения вирусов ВД-БС, ИРТ, РСИ КРС и бактерий семейства Pasteurellaceaeот больных телят в хозяйствах, стационарно неблагополучных по респираторным болезням (2001-2010 гг.)
n=998
№ п/п |
Наименование возбудителя, ассоциации возбудителей |
Количество положительных проб |
Выявлено положительных проб от числа исследованных, % |
1 |
Вирус ИРТ КРС |
299 |
30 |
2 |
Вирус ВД-БС КРС |
180 |
18 |
3 |
Бактерии семейства Pasteurellaceae: а) M. haemolytica |
133 |
13,3 |
б) P. multocida (A и D) |
200 |
20 |
|
4 |
Вирус ИРТ КРС и ВД-БС |
716 |
71,7 |
5 |
Вирус ИРТ КРС и Pasteurella spp. |
200 |
20 |
6 |
Вирус ВД-БС КРС и Pasteurella spp. |
519 |
52,9 |
7 |
Вирус РСИ КРС |
123 |
11,0 |
8 |
Вирус ИРТ, ВД-БС и РСИ КРС |
89 |
10,0 |
9 |
Вирус РСИ КРС и Pasteurella spp. |
123 |
20,0 |
10 |
Вирус ИРТ, ВД-БС и РСИ КРС и Pasteurella spp. |
235 |
15,0 |
Сочетание вирусов ИРТ и ВД-БС чаще всего выявляли в легких (37,8%), трахеальном и бронхиальном экссудате (16,5%), слизистой носа (10,2%) и трахеи (9,82%). Вирусно-бактериальные ассоциации - в легких:а вирус ИРТ и бактерии семейства Pasteurellaceae - в 20,0%, а вирус ВД-БС КРС и бактерии этого семейства в 52,9%а исследованных проб.
Количество проб биоматериала, содержащих вирус ВД-БС КРС и Р. multocida сероваров А и D, составило 6,8% в легочных лимфоузлах, 11,2% в бронхах, 3,4% в трахеальном и бронхиальном экссудатах. Число проб, содержащих этот вирус и M. haemolytica, составило 3,6% в легочных лимфоузлах и 9,9% в легких. Ассоциацию вирусов ИРТ, ВД-БС и бактерий семейства Pasteurellaceae выявляли также в легких (43,1%).
Количество проб, содержащих РСВ КРС в моноварианте, составило 11,0%, ИРТ, ВД-БС и РСВ КРС -10,0%, РСВ КРС и бактерии семейства Pasteurellaceae - 20,0%, а вирус ИРТ, ВД-БС и РСВ КРС в сочетании с бактериями этого семейства в 15,0% случаев. При этом РСВ КРС чаще выявляли в легких и бронхах (35,0%), носовых выделениях и органах верхнего респираторного тракта (11,0%).
Результаты исследований показали, что спектр микроорганизмов,а вызывающих патологию респираторной системы крупного рогатого скота достаточно широк. Бактериальные заболевания часто являются вторичными, но могут протекатьа как сопутствующие или самостоятельные. Это зависит от концентрации животных, наличия или отсутствия специфической профилактики вирусных и бактериальных болезней, а также хозяйственных факторов.
В таких случаях смешанного течения респираторных инфекций изолировать возбудители вирусной природы обычными вирусологическими методами сложно и часто их первичная этиологическая роль остается не установленной вследствие постановки диагноза на бактериальные инфекции.
В связи с этим при планировании противоэпизоотических мероприятий крайне необходимо проводить весь комплекс диагностических исследований (вирусологических, бактериологических) с целью расшифровки этиологической структуры конкретной вспышки респираторных заболеваний и выяснения этиологической роли каждого инфекционного агента.
3.ВЫВОДЫ
1. Оптимальными параметрами выделения РСВ КРС являлись: отбор проб биоматериала от животных на ранних стадиях инфекции, транспортировка в охлажденном виде или в транспортной среде в течение суток в лабораторию с последующей немедленной обработкой и заражением культур клеток в день доставки. Выделение вируса эффективно в двухсуточной первично-трипсинизированной культуре клеток ТБ с адсорбцией в течение часа и добавлением 2% сыворотки плода крупного рогатого скота при 37оС с проведением не менее 8 лслепых пассажей. Эффективность выделения повышалась при отсутствии стадии центрифугирования суспензии биоматериала или при адсорбции вируса на клетках в течение часа при +20С с добавлением 1% димексида. Пригодной для выделения и культивирования вируса являлась также перевиваемая линия культуры клеток ТЭБ, обеспечивающая его накопление в титре не ниже 103,5 ТЦД50/мл. аКонтроль выделения, накопления, а также типирование вируса в зараженных культурах клеток необходимо осуществлять при помощи ОТ-ПЦР путем исследования вируссодержащей суспензии каждого пассажа.
2. При изучении чувствительности 18 культур клеток к двум штаммам вируса (РС-Б и К-18) установлено, что цитопатогенное действие вирусаа имело лштаммовый характер. Наиболее чувствительной к штамму РС-Б оказались первично-трипсинизированная культура клеток ЛЭК и перевиваемая линия клеток FLK, титр вируса в которых составлял 3,74+0,12 lgТЦД50/мла и 3,360,17 lgТЦД50/мл , а к штамму К-18 - ТБ и ТЭБ, обеспечивавшие его накопление в титре 4,830,07 lg ТЦД 50/мла и 4,580,07 lg ТЦД 50/мл.
3. Размножение штаммов вируса в инфицированных культурах клеток не всегда сопровождалось развитием видимого ЦПД. Для контроля его репликации и определения инфекционной активности эффективными были методы бляшкообразующих единиц и окрашенных фокусов, электронная микроскопия, цитоморфологические исследования и ОТ-ПЦР. Более эффективным методом титрования вируса являлся метод БОЕ, наиболее простым - метод ФОЕ, а наиболее специфичным - метод ОТ-ПЦР.
4. Оптимальными условиями культивирования штамма РС-Б вируса с целью получения эритроцитарного антигена являлись: возраст культуры клеток 3-5 суток; множественность заражения 0,1 ТЦД50/клетка; адсорбция 1,5 часа; поддерживающие, питательные среды - Игла MEM,а Игла и RPMI -1640 в соотношении 2:1 с добавлением 2% фетальной сыворотки крупного рогатого скота, сыворотки северных оленей или сыворотки цыплят; рН 7,4-7,8; инкубирование в стационарных или роллерных условиях при температуре 37С; культивирование в течение 5-6 суток до выраженного ЦПД. Добавление 1% ДМСО и ДЭАЭ - декстрана 50 мкг на 1 мл положительно влияло на проявление ЦПД и повышало титр вируса на 0,5 и 1 lgТЦД50/мл. Оптимальными условиями культивирования штамма К-18 были: использование 2-3 суточных культур клеток ТЭБ и ТБс предварительным 3-х кратным отмыванием монослоя клеток от ростовой среды с 10% коммерческой сыворотки крови крупного рогатого скота или телят. При использовании сыворотки эмбриона коровы необходимость отмывания монослоя клеток отпадала.
5. Активность эритроцитарных антигенов зависела от титра вируса в чувствительной культуре клеток. Наиболее активные антигены, титры которых со специфической к вирусу сывороткой составляли от 7,920,22 до 10,150,09 lg2, были получены из вируссодержащей суспензии, накопленной в культурах клеток Л5Э и П5Э, FLK и ЛЭК, а после адаптации и в перевиваемых линиях клеток Т-1 и ПТ. Штамм РС-Б обладал слабой антигенной активностью в отношении белых мышей линии BALB/c и морских свинок. Активность гипериммунных сывороток, использованных для положительного контроля набора, полученных на кроликах и баранах в реакции нейтрализации составила 5,380,16 - 6,080,09 lg2. Производственные испытания опытных серий специфических эритроцитарных антигенов в РНГА показали их высокую специфичность и активность.
6. С помощью РНГА выявлено наличие антител к вирусу респираторно-синцитиальной инфекции у 71,9% молодняка в возрасте 4-6 месяцев; 69,2% - в возрасте 2-4 месяца; 55,9% - в возрасте 6-9 месяцев и у 50,8% крупного рогатого скота в 16 регионах Российской Федерации, в том числе у 33,01% овец и 87,76% коз. Сероконверсию к вирусу устанавливали у телят в возрасте: 4-6 месяцев в 52,6% случаев; 7-9 месяцев - 50,0%; 3-4 месяца - 37,5%, что свидетельствовало о переболевании животных в эти возрастные периоды. Диагностический прирост титров антител к вирусу у телят в возрасте 1-3 месяца устанавливали редко: в 4,0 и 6,7% случаев, соответственно 1 месяц (4,0%). Уровень инфицированности и частота проявления клинических признаков болезни зависели от концентрации животных на единицу площади, уровня молочной продуктивности коров и частоты ввода новых животных. Средние показатели инфицированности крупного рогатого скота различались по регионам и варьировали от 30,8% в регионах с низкой плотностью скота до 66,6% в регионах с высокой плотностью и наличием завозного скота. В крупных хозяйствах циркуляция вируса могла быть непрерывной за счет транзитной инфекции у коров и телят, что обеспечивало постоянный риск возникновения повторных вспышек болезни.
7. По данным метода ОТ-ПЦР к инфицированию вирусом восприимчивы все половозрастные группы животных. В среднем вирус присутствовал в 15,4%а исследованных проб биоматериала, полученных от крупного рогатого скота при вспышках болезни. Частота выявления генома вируса от телят до 6-месячного возраста составила 19,7%, а от коров - 16,1% при наличии признаков острых респираторных заболеваний. Выявление вируса в 4,5% проб биоматериала от телят до 10-дневного возраста свидетельствовало о вовлечении их в аинфекционный процесс.
8. В крупных молочных комплексах частота проявления РСИ КРС зависела от уровня инфицированности животных вирусом ВД-БС КРС, а также наличия в стадах животных, персистентно инфицированных этим вирусом. При уровне инфицированности животных вирусом ВД-БС КРС от 78,02 до 90,3% и наличии в стадах крупного рогатого скота не менее 3,13% ПИ вирусоносителей инцидентность РСИ КРС повышалась и сопровождалась выявлением возбудителя и сероконверсией к нему у животных различных половозрастных групп, включая коров и телят до 6-месячного возраста.
9. Этиологическая структура респираторных болезней на молочных комплексах носила полиэтиологический характер. Количество проб, содержащих вирус ИРТ в моноварианте в среднем, составляло 30%,а ВД-БС КРС - 18%; ассоциации этих вирусов - 71,7%. Сочетание этих вирусов выявляли в легких (37,8%), трахеальном и бронхиальном экссудате (16,5%), слизистой носа (10,2%) иа трахеи (9,82%). Количество проб, содержащих РСВ в моноварианте, составило 11,0%, его выявляли в 35,0% проб легких и бронхов, 11,0% проб носовых выделений и органов верхнего респираторного тракта. В 10,0% проб выявляли три вируса одновременно.
10. Вирусно-бактериальные ассоциации выявляли в легких: вируса ИРТ и бактерии семейства Pasteurellaceae - в 20,0%, а вирус ВД-БС КРС и бактерии этого семейства в 52,9% исследованных проб. РСВ КРС и бактерии семейства Pasteurellaceae - 20,0%, а сочетание трех вирусов и пастерелл - 15,0% случаев. Культуры пастерелл в моноварианте изолировали в 33,3% от общего числа исследованных проб, при этом они относились к видам P. multocida (20,0%) иа M. haemolytica (13,3%). Патогенность их варьировала от низкой до высокой. M. haemolyticaвыделяли от животных всех половозрастных групп с острой формой легочного пастереллеза при завозе импортированного скота, а P. multocida от молодняка до 6-месяцев при энзоотическом проявлении болезни.
11. Результаты разработки и апробации комплекса диагностических исследований открывают возможность проведения мониторинга РСИ КРС в молочных хозяйствах различного профиля с наличием или отсутствием импортированных животных, а также послужат основой стратегии диагностических исследований для объективной оценки эпизоотической ситуации и установления роли вируса в этиологии массовых респираторных болезней, протекающих с участием этого патогена и других вирусов и бактерий, создавая перспективы оптимизации противоэпизоотических мероприятий, в том числе схем специфической профилактики болезни.
|
Страницы: | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | |
Авторефераты по всем темам >>
Авторефераты по биологии