Geum.ru

Экспериментальная фармакотерапия повреждений почек растительными лекарственными средствами 14. 00. 25 фармакология, клиническая фармакология

Вид материалаАвтореферат диссертации

Содержание


При постишемической нефропатии
Исследование фармакотерапевтической эффективности фитоуросепта при гепаторенальном синдроме
Исследования фармакотерапевтической эффективности эксабола
Исследование безопасности испытуемых средств
Обсуждение полученных результатов
Практические рекомендации
Список работ, опубликованных по теме диссертации
Подобный материал:
1   2   3   4

Таблица 8


Влияние фитоуросепта на функциональное состояние

почек при колибациллярном пиелонефрите у белых крыс

Показатели

Группы животных

Интактная
Контрольная (пиелонефрит)
Опытная 1 (пиелонефрит+

фитоуросепт)
Опытная 2 (пиелонефрит+отвар толокнянки)

7 сутки

Диурез, мл/100 г/ч
0,45±0,03
0,27±0,01
0,35±0,02*
0,35±0,03*

Na+ в моче, мг/мл
0,56±0,09
0,36±0,09
0,41±0,02
0,41±0,03

K+ в моче, мг/мл
2,1±0,35
1,9±0,12
1,9±0,09
1,9±0,09

Мочевина в сыворотке, ммоль/л
4,6±0,32
7,7±0,55
5,1±0,46*

5,3±0,38*

Креатинин в сыворотке, мкмоль/л
48,3±3,66

90,0±8,25
63,5± 5,80*
70,6±6,25

Белок в моче, г/л

0,6±0,04
1,3±0,09
0,9±0,06
1,1±0,06

МДА, мкмоль/мл мин
1,1+0,09
2,1±0,16
1,7±0,098*
1,9 ± 0,09

ДК, ед. ОП
1,2±0,15
3,8±0,28
3,2±0,24
3,2 ± 0,12

Каталаза, мкат/л
4,5 ± 0,35
2,7 ± 0,18
3,5 ± 0,26*
3,0 ± 0,25

14 сутки

Диурез, мл/100 г
0,32±0,02
0,21±0,02
0,31±0,02*
0,30±0,03*

Мочевина в сыворотке, ммоль/л
4,6±0,32
6,2±0,55
5,1±0,26

5,2±0,38

Креатинин в сыворотке, мкмоль/л
48,3±3,66

68,2±5,70
49,3± 2,80*
52,6±3,25*

Белок в моче, г/л
0,6±0,05
1,7±0,15
1,1±0,06
1,3±0,08

МДА, мкмоль/мл мин
1,1+0,09
3,5±0,14
2,5+0,18*
3,0 ± 0,31

ДК, ед. ОП
1,2+0,15
4,1±0,38
3,2+0,34*
3,5 ± 0,25

Каталаза, мкат/л
4,1 ± 0,33
2,5 ± 0,23
3,4 ± 0,26*
3,0 ± 0,23

21 сутки

Диурез мл/100 г
0,32±0,02
0,29±0,01
0,34±0,03
0,35±0,03

Мочевина в сыворотке, ммоль/л
4,6±0,32
5,1±0,32
4,9±0,32
4,9±0,38

Креатинин в сыворотке, мкмоль/л
48,3±3,66
51,9±2,12
46,9±2,11
50,8±2,82

Белок в моче, г/л

0,6±0,04
0,9±0,07
0,5±0,05
0,5±0,06

МДА, мкмоль/мл мин
1,1+0,09
2,1+0,13
1,1+0,15*
1,3 ± 0,01

ДК, ед. ОП
1,2±0,15
2,1±0,17
1,4+0,09*
1,4 ± 0,01*

Каталаза, мкат/л
4,1 ± 0,33
3,2 ± 0,32
3,9 ± 0,34
3,4 ± 0,25


Кроме того, введение испытуемого средства крысам оказывало выраженное антибактериальное действие, на что указывает снижение степени инфицированности левой почки у крыс опытной группы до 1×102 - 1×103 микробных тел на 1 см2 среза почки, правой до 1×102, причем в 2 случаях из 8 «высева» кишечной палочки не наблюдалось как в левой, так и в правой почках, тогда как в контроле инфицированность левой и правой почек составляла 1·105 и 1·104 микробных тел соответственно. На 21 сутки у крыс опытной группы лишь в одном случае отмечали рост бактерий, при этом в правой почке роста E. coli не отмечено ни в одном случае, тогда как в контрольной группе животных в 3 случаях отмечен рост колоний кишечной палочки.

^ При постишемической нефропатии у крыс установлено, что курсовое введение фитоуросепта в экспериментально-терапевтической дозе существенно уменьшало выраженность азотемии: концентрация креатинина в сыворотке крови опытных животных снижалась по сравнению с показателями у животных контрольной группы на 16%, содержание креатинина в моче повышалось на 34%. На 3 сутки наблюдения у животных, получавших испытуемый фитоэкстракт, концентрация креатинина в сыворотке крови снижалась на 40%, а на 7 сутки этот показатель соответствовал уровню физиологической нормы. Наряду с этим, введение животным фитоуросепта повышало диурез на 1 и 3 сутки опыта в среднем на 80 - 90 % по сравнению с данными у крыс контрольной группы. Установлено также, что введение испытуемого средства оказывало выраженное антиоксидантное действие, снижая концентрацию продуктов пероксидации липидов как в сыворотке крови, так и в гомогенате почек животных опытной группы: на 1 сутки исследования концентрации ДК и МДА в крови, а также МДА в гомогенате почек крыс, получавших испытуемый фитоэкстракт, были в среднем на 30% меньше, чем в контроле, к 7 суткам эксперимента у животных опытной группы наблюдалось снижение указанных показателей ПОЛ до уровня физиологической нормы. Наряду с этим, у животных опытной группы отмечалось повышение активности антиоксидантной системы организма, на что указывает усиление каталазной активности сыворотки крови в среднем на 40 % по сравнению с показателями у крыс контрольной группы на 1 сутки опыта и нормализация этого показателя на 3 сутки наблюдения.

^ Исследование фармакотерапевтической эффективности фитоуросепта при гепаторенальном синдроме у крыс показало, что его курсовое введение в экспериментально-терапевтической дозе оказывает благоприятное влияние на течение сочетанного повреждения печени и почек, оказывая как нефро- , так и гепатопротекторное действие. Так, введение фитоуросепта сопровождается достоверным снижением азотемии, повышением диуреза, салуреза, СКФ. Под его влиянием наблюдали нормализацию показателей функционального состояния печени. Гепатозащитная активность фитоуросепта обусловлена выраженным мембраностабилизирующим действием на ранних сроках патологического процесса благодаря уменьшению выраженности цитолиза, о чем можно судить по динамике изменения активности АсТ и АлТ в сыворотке крови крыс. Кроме того, исследуемое средство повышает холерез, а также стимулирует гликогенсинтетическую функцию печени. Введение фитоуросепта способствовало снижению активности свободнорадикальных процессов при данной патологии, что подтверждается снижением содержания продуктов пероксидации липидов в сыворотке крови, гомогенате почек, а также повышением активности каталазы.

^ Исследования фармакотерапевтической эффективности эксабола показали его выраженное нефропротекторное влияние при повреждениях почек у лабораторных животных ишемической, токсической, иммунной этиологии и при субтотальной нефрэктомии.

В таблице 10 представлены результаты исследования фармакотерапевтической эффективности эксабола при его курсовом интрагастральном введении крысам в дозе 100 мг/кг при хроническом гломерулонефрите у крыс. Как следует из приведенной таблицы, под влиянием антигенного комплекса у животных развивается картина классического гломерулонефрита: азотемия, олигурический синдром, выраженная протеинурия. Курсовое введение эксабола крысам приводит к улучшению показателей функционального состояния почек, что выражается в увеличении диуреза в 2,5 раза, СКФ в 2,6 раза, снижении содержания белка в моче на 55%. Под влиянием данного экстракта нормализовались показатели липидного состава крови, снижались содержания ОХ на 21%, ТГ и ЛПНП на 25 и 53%, соответственно, а ЛПОНП - на 23%, повышалось содержание ЛПВП на 34% со снижением атерогенности более чем в 2 раза по сравнению с аналогичными данными у животных контрольной группы. Введение эксабола оказывает также антиоксидантное действие, о чем свидетельствует снижение концентрации ТБК – активных продуктов в сыворотке крови и гомогенате ткани почек у животных опытной группы в 2,4 и 1,6 раза, повышение активности каталазы и содержания восстановленного глутатиона в крови в 4,9 и 3,3 раза, соответственно, по сравнению с данными в контроле.

Таблица 10

Влияние эксабола на течение гломерулонефрита у крыс

Показатели
Группы животных

Интактная
Контрольная (ХГН+Н2О)
Опытная 1 (ХГН+ эксабол)
Опытная 2 (ХГН+канефрон)

Креатинин, сыв.кр.мкМ/ мл
66,01,91
132,23,04
87,12,47
96,02,10

Мочевина, сыв. кр.мМ/мл
5,10,42
15,31,63
8,70,98
9,90,59

СКФ, мл/час 100 г
2,90,08
0,70,02
1,50,03
1,30,02

Белок в моче, г/л
1,20,03
4,60,05
2,10,04
2,50,01

Диурез, мл/100г/час
0,62±0,01
0,33±0,01
0,830,02
0,730,01

ОХ, мМ/л
2,180,10
2,900,13
2,300,09
2,210,11

ТГ, мМ/л
1,020,02
1,990,11
1,500,10
1,310,03

ЛПНП, мМ/л
1,010,06
1,670,10
0,800,02
0,880,11

ЛПОНП, мМ/л
0,160,002
0,490,020
0,380,003
0,340,020

ЛПВП, мМ/л
1,020,13
0,540,03
0,790,06
0,660,04

Коэфф. атерогенности
1,13
4,3
1,9
1,8

МДА в сыворотке крови, мкМ/мл
1,20,01
4,30,10
1,80,06
1,90,10

МДА в гомогенате почки, нМ/г
2,20,02
4,40,08
2,80,10
3,50,12

Каталаза, мкат/л
81,40,90
15,10,80
75,11,10
60,40,88

Восст. глут.,мМ/л
0,880,02
0,400,02
1,320,10
1,210,11

ЦИК, усл.ед.
25,301,16
38,902,05
25,671,14*
26,841,40


Установлено, что эксабол оказывает иммуномодулирующее действие, снижая количество циркулирующих иммунных комплексов на 36% по сравнению с данными у животных контрольной группы. При патоморфологическом исследовании на фоне введения эксабола отмечали сегментарную пролиферацию мезангиальных клеток, умеренное накопление мезангиального матрикса, что приводило к сегментарному расширению мезангия. Результаты морфометрических исследований показали, что на фоне введения эксабола площадь капилляров клубочка снижалась на 11%, количество мезангиальных клеток в клубочке – на 12% по сравнению с таковыми показателями у животных контрольной группы. Площадь полости почечного клубочка у животных опытной группы не имело значительных отличий от таковой у животных интактной группы.

Влияние экстракта сабельника на течение гломерулонефрита в фазу его острого течения показало аналогичное хроническому периоду нормализующее действие на показатели функционального состояния почек, липидного спектра крови и показатели активности окислительного стресса.

Исследование фармакотерапевтической эффективности экстракта сабельника при постишемической и токсической нефропатии показало, что испытуемое средство оказывает нефропротекторное влияние, нормализуя показатели функционального состояния почек животных на более ранних сроках.

Защитное влияние испытуемых средств на функциональное состояние почек у животных при нефропатиях было подтверждено патоморфологическими и морфометрическими данными, которые свидетельствуют, что под влиянием испытуемых фитосредств отмечаются менее выраженные повреждения структурных образований нефронов.

^ Исследование безопасности испытуемых средств

Длительное введение лабораторным животным испытуемых средств в экспериментально-терапевтических и субтоксических дозах не оказывает повреждающего влияния на морфофункциональное состояние жизненно важных органов и систем организма животных, не приводит к нарушению обменных процессов; они являются малокумулирующими веществами. Указанные растительные средства не обладают местнораздражающими, аллергогенными, мутагенными, эмбриотоксическими, тератогенными свойствами и не влияют негативно на постнатальное развитие потомства лабораторных животных. Материалы по исследованию безопасности испытуемых средств также включены в представленные отчеты в ФК Минздравсоцразвития РФ.


^ ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

Учитывая современные представления о том, что универсальным патогенетическим молекулярно-клеточным механизмом развития многочисленных патологических состояний является индукция процессов СРО биомакромолекул (Арчаков, 1983; Биленко, 1989; Зенков и соавт. 2001; Меньщикова и соавт., 2008; Hentse et all., 2003; Catler, Rodriges, 2003), особое значение приобретают полученные данные о том, что общим молекулярно-клеточным звеном в патогенезе нефропатий, независимо от природы повреждающих факторов, являются нарушения структурной и функциональной целостности биомембран клеток нефрона в результате индукции процессов СРО со снижением активности системы антиоксидантной защиты организма и последующим развитием каскада нарушений. При этом, если индукция процессов СРО при ишемических повреждениях органов, в том числе почек, не вызывает сомнений и подтверждена данными литературы (Биленко, 1989; Макаренко и соавт., 2000; Альдебель, Кириллова, 2002; Catler, Rodriges, 2003), то в отношении токсических, иммунных и инфекционных нефропатий у ряда исследователей нет единого мнения (Тареева, 2000; Рябов 2000).

Активация процессов СРО разной степени интенсивности наблюдается при нефропатиях токсической, иммунной и бактериальной этиологии и регистрируется раньше, чем функциональные нарушения почек. В частности, выраженная активация СРО с одновременным снижением мощности эндогенной антиоксидантной защиты организма наблюдалась при токсических поврждениях почек животных: при сулемовом некронефрозе и на фоне введения лекарственных препаратов с различными механизмами нефротоксического влияния. Выраженность окислительного стресса зависит от дозы и времени действия нефротоксических препаратов: действие больших (субтоксических) доз сопровождается выраженным повышением активности процессов СРО и угнетением АОС, что согласуется с данными литературы (Petric et all., 2003).

Повреждение почек иммунной этиологии также сопровождалось активацией процессов СРО. При этом отмечалось компенсаторное повышение содержания восстановленного глутатиона, что свидетельствует о состоятельности глутатионопосредованной антиоксидантной системы при данном виде повреждения. Заметное повышение активности процессов СРО наблюдали также при экспериментальном пиелонефрите и гепаторенальном синдроме у крыс. Дополнительным доказательством значимости активации СРО в патогенезе нефропатий является установленный факт депрессии функционального состояния почек животных, индуцированной введением в лоханку водорода перекиси (Шантанова, Кириллова, 2000). При этом показано, что индукция процессов СРО при повреждениях почек регистрируется раньше, чем нарушения их функциональной состоятельности. Одним из последствий активации СРО является развитие патологических изменений в мембранах клеток нефронов, в частности, транспортной функции канальцев, что является основой развития лекарственного нефрита (Макаренко и соавт., 2000).

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о том, что индукция процессов СРО является неспецифическим типовым пусковым механизмом при повреждениях почек независимо от природы повреждающих факторов и сопровождается снижением активности эндогенной АОС, играет ключевую роль в развитии и поддержании патологического процесса, коррелирует с тяжестью патологического процесса и влияет на его дальнейший прогноз и исход заболевания.

Введение животным разработанных фитосредств (нефрофит, фитоуросепт, эксабол) на фоне нефропатий различной этиологии сопровождается нормализацией морфофункционального состояния почек на более ранних сроках патологического процесса. В частности, под влиянием указанных фитоэкстрактов отмечалось повышение диуретической, салуретической, депурационной функций почек, увеличение СКФ, снижение протеинурии на фоне торможения процессов СРО и повышения активности эндогенной АОС организма. Полученные данные позволяют предположить, что одним из важнейших аспектов в механизме их нефропротекторного действия является наличие общей антиокислительной активности, что было подтверждено в отдельной серии экспериментов. С использованием витральных методов получены данные о выраженной антирадикальной активности испытуемых фитосредств. В частности, показано, что под их влиянием существенно снижатся скорость генерации супероксидного анион-радикала кислорода (·О2-) в модельной системе. Принимая во внимание, что O2- является пусковым звеном развития свободнорадикальных реакций (Зенков и соавт., 2001; Меньщикова и соавт., 2008), можно полагать, что указанные средства, обладая антирадикальной активностью по отношению к ·О2-, способствуют предотвращению инициации цепных реакций. Наряду с этим, в опытах с использованием хемилюминесцентного метода, позволяющего с высокой точностью оценить интенсивность свободнорадикальных реакций в биологических системах (Сергеев и соавт., 1992) было установлено, что испытуемые фитоэкстракты оказывают ингибирующее действие на кинетику ПОЛ, на что указывало уменьшение амплитуды «быстрой» вспышки и удлинение ее латентного периода. Испытуемые экстракты обладают высокой антирадикальной активностью по отношению к радикалам NO. и ДФПГ, а также инактивирующим Н2О2 -действием и высокой общей антиоксидантной емкостью. При этом их эффективность была сопоставима с эталонными препаратами: ионолом и аскорбиновой кислотой.

Установленная радикалперехватывающая активность испытуемых средств имеет важное значение для объяснения молекулярных механизмов их нефропротекторного влияния, поскольку известно, что повреждающее действие свободные радикалы реализуют посредством инициирования свободнорадикальных реакций в биологических мембранах с последующим нарушением их морфофункциональной целостности (Дурнев и соавт., 1996; Меньшикова и соавт., 1997). В основе антирадикального действия испытуемых средств, как показано нами, лежит непосредственная реакция ингибитора с образующимися свободными радикалами, поскольку для фенольных соединений, содержащихся в фитоэкстрактах, как и для классических антиоксидантов типа -токоферола, характерно наличие ароматических колец с ОН- группами, являющимися акцепторами электронов. Экспериментально установлены антиоксидантные (АО) свойства производных биофлавоноидов и дубильных веществ – эллаготанинов, которые проявлялись ингибированием ПОЛ, восстановлением функциональной активности элементов антиоксидантной системы, стабилизацией мембран клеток (Яковлева и соавт., 2001). Можно предположить, что антирадикальная активность, обнаруженная у испытуемых средств, обусловлена высоким содержанием фенольных соединений. Вместе с тем, нельзя исключить, что в ингибировании ПОЛ определенную роль играет установленная хелатирующая способность указанных фитоэкстрактов, поскольку фенольные соединения, содержащиеся в растениях, способны образовывать прочные комплексы с металлами переменной валентности (Теселкин и соавт., 1997; Cho E.J. et all. 2006) и, тем самым, предотвращать развитие процессов СРО.

Значительную роль в антиоксидантном действии испытуемых фитосредств играет их способность повышать активность системы глутатиона, о чем свидетельствуют полученные данные о повышении под их влиянием концентрации восстановленного глутатиона и активности глутатионпероксидазы. По данным последних лет восстановленному глутатиону отводится роль главного водорастворимого антиоксиданта, поскольку установлено, что в условиях окислительного стресса повышенная его концентрация защищает клеточные структуры и функциональные белки от повреждений, а также ускоряет инактивацию гидроперекисей и других токсичных продуктов (Зенков, Ланкин, Меньщикова 2001). Очевидно, что активация системы глутатиона под влиянием указанных фитосредств осуществляется посредством экспрессии антиоксидант-респонсивных элементов (АРЕ) – редоксчувствительных рецепторов клеток. Известно, что АРЕ экспрессируется фенолами природного происхождения: флавоноидами, полифенолами, каротиноидами (Ляхович и соавт., 2006). Наличие в испытуемых фитоэкстрактах указанных веществ, а также ингибирование процессов ПОЛ и увеличение активности ферментов АОЗ и содержания восстановленного глутатиона под их влиянием позволяют предположить, что реализация антиоксидантного эффекта испытуемых средств обеспечивается, в том числе, через активацию АРЕ. Наряду с этим, флавоноидные соединения, входящие в состав испытуемых фитоэкстрактов, оказывают опосредованное антиоксидантное действие, выражающееся в способности защищать от окислительной деструкции важнейшие эндогенные антиоксиданты: аскорбиновую кислоту, адреналин, способствуя, тем самым, усилению и пролонгированию их эффекта (Барабой, Сутковой, 1997). Подтверждением антирадикального механизма и стабилизации клеточных мембран под влиянием растительных средств служат также полученные данные о снижении перекисного гемолиза эритроцитов, вызываемого реактивом Фентона. Наблюдаемое снижение гемолиза, очевидно, обусловлено ингибированием гидроксильных радикалов, образующихся в реакции Фентона, благодаря чему предотвращается инициация СРО и повышается устойчивость эритроцитарных мембран к окислительным процессам.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что общим молекулярно-клеточным механизмом нефропротекторного действия испытуемых фитоэкстрактов является наличие выраженной общей антиоксидантной активности, связанной как с прямым радикалперехватывающим действием фенольных соединений, входящих в их состав, так и опосредованным, связанным с хелатирующей активностью и активацией эндогенной антиоксидантной системы организма. Установленный общий молекулярно-клеточный механизм в действии испытуемых фитосредств лежит и в основе предотвращения нарушений функций митохондрий и ядерного аппарата клеток нефронов при повреждениях почек различного генеза. Так, нами установлено, что при ишемии почек пул АТФ в гомогенате почек снижается в 4 раза по сравнению с таковым у интактных животных, что определяет развитие тканевой гипоксии. При этом курсовое введение нефрофита сопровождалось повышением данного показателя на 60% по сравнению с таковыми в контроле. В условиях ишемии уменьшение энергодефицита под влиянием указанного фитоэкстракта обеспечивается почти двукратным повышением активности пируваткиназы – одного из ключевых ферментов тканевого дыхания. Увеличение «поставки» пирувата как в цикл Кребса, так и для анаэробного гликолиза сопровождается активацией ресинтеза АТФ, что, в конечном итоге, приводит к повышению выживаемости клеток в условиях ишемии. Другим механизмом, обеспечивающим состоятельность клеток нефронов в условиях энергодефицита, является установленная нами способность нефрофита ингибировать активность Na, K-АТФазы, поскольку известно, что до 80 % АТФ клеток канальцев расходуется на перенос натрия против градиента концентрации (Наточин, 1993). Подтверждением данного положения является повышение морфофункциональной состоятельности почек при их ишемии/реперфузии. В связи с имеющимися данными о том, что некроз развивается при уменьшении пула АТФ менее чем на 75 % от исходного уровня (Ермоленко, 2000; Liberthal, 1998), можно полагать, что ингибирование наиболее энергоемкого процесса активного транспорта Nа+ под влиянием нефрофита обеспечивает энергетические потребности клетки для ее жизнедеятельности, в результате чего предотвращается развитие индуцированного апоптоза. Очевидно, что указанный эффект обусловлен флавоноидными соединениями, являющимися ингибиторами транспортных АТФаз, что согласуется с данными ряда авторов (Мирсалихова, Пакудина, 1997; Мuгасаmi et а1., 1992). Известно, что флавоноиды, в частности, дигидрокверцетин, ингибируя образование супероксида и цепное (перекисное) окисление липидов, препятствуют выходу цитохрома С из митохондрий и запуску апоптотического каскада (Владимиров и соавт., 2009). Подтверждением ингибирования раннего апоптоза под влиянием испытуемых фитосредств служат полученные нами экспериментальные данные о существенном снижении активности каспазы–3 в гомогенате коркового слоя почек крыс при их ишемии/реперфузии. Поскольку известно, что клетки, находящиеся в стадии апоптоза, прекращают физиологические функции (Ortiz et al., 2000), можно полагать, что предупреждение раннего апоптоза в нефронах под влиянием фитоэкстактов вносит достаточно весомый вклад в их нефропротекторное влияние. Благодаря антиоксидантным свойствам испытуемые фитосредства препятствуют окислению ЛПНП плазмы крови, способствуя уменьшению выраженности склерозирования почечных сосудов и базальной мембраны клубочков, тем самым, нормализуя функциональное состояние почек при гломерулонефрите.

Не вызывает сомнения значимость иммунной системы в патогенезе заболеваний почек, особенно гломеруло- и пиелонефрита. В исследованиях, посвященных иммунопатологии при хроническом пиелонефрите, отмечена значимость нарушений в составе фагоцитарного звена иммунитета, обусловленных как генетическими факторами иммунного ответа, так и воздействием микробных токсинов (Дадабаева, Гадаев, Ибрагимов, 2000; Мазо и соавт., 2007). Нами установлено, что нефрофит ингибирует спонтанную пролиферацию и конканавалин – А (Кон А) -стимулированных лимфоцитов, а также их бласттрансформацию. В то же время, исследуемый фитоэкстракт повышает цитотоксическую активность мононуклеарных клеток крови, что имеет важное значение в профилактике аутоиммунных повреждений почек. Данный механизм, очевидно, связан с тем, что флавоноиды, входящие в состав нефрофита, нормализуют Т-иммунорегуляторные дефекты, что соответствует данным литературы (Ansorge et all., 2002). Под влиянием фитосредств повышается фагоцитарная активность макрофагов, что имеет существенное значение для лечения и профилактики заболеваний почек инфекционной этиологии, которые характеризуются угнетением фагоцитоза и незавершенностью макрофагального звена иммунитета (Синюхин и соавт., 2002). Установлено, что испытуемые фитоэкстракты оказывают выраженное иммунопротективное действие при экспериментальной азатиоприновой иммуносупрессии, что также свидетельствует о наличии у них значительного иммуномодулирующего потенциала.

Определенное значение имеют выявленные выраженные антибактериальные свойства фитоэкстрактов, поскольку участие микрофлоры в патогенезе пиело- и гломерулонефрита не вызывает в настоящее время сомнений (Тареева, 2000; Лоран и соавт., 2004; Мазо и соавт., 2007; Carballido et al., 2003). Испытуемые фитоэкстракты показали выраженную антибактериальную активность (бактериостатическую и бактерицидную) к музейным штаммам микроорганизмов, наиболее часто вызывающих инфекционные заболевания почек, что обусловлено значительным содержанием в экстрактах фенольных соединений, в частности - дубильных веществ, обладающих выраженными противомикробными свойствами (Головкин и соавт., 2001). При этом для фитоуросепта выявлен синергизм с антибиотиками, применяемыми в практике нефроурологии, что имеет определенное значение для сокращения сроков антибиотикотерапии и/или снижения их доз.

Важным фактором в реализации нефрозащитного эффекта испытуемых экстрактов является наличие у них выраженной противовоспалительной активности. Учитывая имеющиеся данные литературы о том, что синтез простаноидов циклооксигеназы–2 ингибируется в присутствии глутатиона (Сергеева, Варфаломеева, 2006), можно полагать, что механизм противовоспалительного действия испытуемых средств связан с ингибированием данного фермента, поскольку нами получены данные о повышении активности системы глутатиона. Механизм противовоспалительной активности фитосредств также связан с их способностью блокировать высвобождение провоспалительных агентов (гистамина и др.) из тканевых базофилов, о чем свидетельствуют полученные нами данные о снижении дегрануляции тучных клеток при асептическом перитоните. Испытуемые фитоэкстракты обладают выраженным сосудоукрепляющим действием, что обеспечивает их нормализующее влияние на почечную микроциркуляцию. Дополнительным фактором улучшения микроциркуляции являются полученные нами данные о наличии у экстрактов фибринолитических свойств, поскольку известно, что при многих заболеваниях почек наблюдается отложение фибрина, вызывающего спазм клубочковых капилляров, нарушение ультрафильтрации, микроциркуляции и повышение проницаемости сосудов вплоть до развития неселективной протеинурии (Кухарчук, 1989; Левин и соавт., 1989). Очевидно, что реализация указанного вида фармакологической активности фитоэкстрактов обеспечивается содержащимися в их составе флавоноидными соединениями, для которых характерны Р-витаминные эффекты (Барабой, 1993; Brasseur, 1989), способность связываться с мембранами сосудов, снижая их проницаемость (Иванов и соавт. 1992). Кроме того, капилляроукрепляющее действие этих средств обеспечивается, в том числе, и за счет органически связанного кремния, входящего в состав горца птичьего, являющегося аккумулятором этого микроэлемента (Головкин и соавт., 2001).

Установлено, что механизм диуретического действия нефропротекторных средств связан с их способностью ингибировать активность Nа+,К+-АТФазы и, тем самым, уменьшать канальцевую реабсорбцию натрия и воды, что способствует повышению гидростатического давления в канальцах, препятствует их коллапсированию и отеку эндотелия, а также увеличению количества ультрафильтрата в канальцах (Дубищев, 1991). Кроме того, механизм диуретического действия фитоэкстрактов обусловлен наличием в их составе флавоноидов (мезоинозида и др.), диуретический эффект которых связан с дилатацией почечных сосудов и увеличением фильтрации первичной мочи по типу теофиллина (Виноградова и соавт., 2001).

Патоморфологическое исследование почек показало, что введение растительных средств на фоне нефропатий сопровождается менее тяжелыми дистрофическими изменениями структуры нефронов, а регенерация поврежденных тканей происходит на более ранних сроках патологического процесса. При этом установлено, что структурной основой нормализации функциональной активности почек под их влиянием являются процессы репаративной регенерации почечного эпителия, а также процессы гиперплазии клеток нефронов. Указанные процессы в равной мере обеспечивают восстановление нарушенных функций почек, что согласуется с данными литературы (Саркисов, 1987). Очевидно, что указанное своеобразие репаративной регенерации в почках заключается в невозможности формирования новых нефронов после их гибели, в результате чего оставшиеся нефроны гипертрофируются, принимая на себя большую функциональную нагрузку. Такая регенерационная гипертрофия, как нами установлено, проявляется в увеличении размеров клубочков, вследствие гиперплазии клеток капилляров и удлинения их; одновременно с этим увеличивается диаметр и длина канальцев в результате гиперплазии эпителиальных клеток и увеличения их размера. По данным литературы, в механизме восстановления клеток проксимальных и дистальных канальцев ведущую роль играет внутриклеточный тип регенерации: при выраженной дистрофии и парциальном некрозе обычно наблюдается сохранность ядра и части цитоплазмы, расположенной у базальной мембраны, которая и является источником внутриклеточной регенерации (Пермяков, Зимина, 1982). В сохранившихся ядрах происходит увеличение размера ядрышек, свидетельствующее об увеличении синтеза РНК и связанной с этим активации внутриклеточных регенерационных процессов (Андреев, Пальцын, 1990). В пользу указанного пути репарационной регенерации под влиянием испытуемых фитопрепаратов свидетельствуют полученные нами данные о гиперплазии оставшейся после односторонней нефрэктомии почки и повышении в ней концентрации общего белка и РНК.

Таким образом, испытуемые средства оказывают выраженное фармакотерапевтическое влияние при повреждениях почек у животных токсической, ишемической, лекарственной, бактериальной и иммунной этиологии, оказывая мочегонное, гипоазотемическое, антибактериальное, противовоспалительное, капилляроукрепляющее, стресс-протективное, антиоксидантное, мембраностабилизирующее, иммуномодулирующее, гиполипидемическое, энергосберегающее, спазмолитическое действие. Указанные свойства фитоэкстрактов способствуют нормализации морфофункционального состояния почек животных при их экспериментальных повреждениях на более ранних сроках патологического процесса.


ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Повреждения почек животных ишемической, токсической, лекарственной, иммунной, бактериальной этиологии вызывают развитие единого симптомокомплекса: снижение диуреза, салуреза, скорости клубочковой фильтрации, азотемию, протеинурию на фоне индукции процессов свободнорадикального окисления биомолекул вне зависимости от природы повреждающего фактора, что было подтверждено фактами увеличения концентрации продуктов СРО в гомогенате почек и сыворотке крови животных при нефропатиях. При этом наблюдается угнетение эндогенной антиоксидантной системы, обусловленное снижением активности основных ее ферментов – супероксиддисмутазы, каталазы, а также глутатионопосредованной системы. Улучшение показателей морфофункционального состояния почек, снижение содержания продуктов СРО и повышение активности эндогенной АОС под влиянием испытуемых средств в опытах in vivo, а также в сериях экспериментов in vitro, позволяют утверждать, что базисным механизмом нефропротекторного влияния нефрофита, фитоуросепта и эксабола является их способность ингибировать процессы свободнорадикального окисления и повышать активность эндогенной антиоксидантной системы организма. Установленные фармакологические свойства испытуемых средств: мочегонное, противовоспалительное, антибактериальное, гипоазотемическое, иммуномодулирующее, фибринолитическое, гиполипидемическое, а также их способность положительно влиять на процессы регенерации и энергетического обмена клеток обеспечивают защитный эффект при действии повреждающих агентов и более раннее восстановление функционального состояния почек при нефропатиях. Введение фитоэкстрактов животным оказывало выраженное фармакотерапевтическое влияние при повреждениях почек у животных, о чем свидетельствует увеличение диуреза, салуреза, СКФ, снижение азотемии и протеинурии, что подтверждается морфологическими, морфометрическими и гистохимическими исследованиями. Показано, что функциональная состоятельность почек крыс при их повреждениях также обусловлена ингибированием раннего апоптоза клеток нефрона, что подтверждается снижением активности каспазы-3 под влиянием нефрофита и фитоуросепта. Ингибирование процессов индуцированного апоптоза обусловлено увеличением пула АТФ в почках за счет повышения активности пируваткиназы, ингибирования транспортных АТФаз под влиянием фитосредств.

Установлены особенности фармакотерапевтического действия фитосредств. Так, нефрофит оказывает более выраженную эффективность при ишемических и токсических повреждениях почек; фитоуросепт - при нефропатии инфекционно-воспалительного генеза, что обьясняется его выраженной антибактериальной активностью и синергидным действием с антибиотиками, а также иммуностимулирующим действием; эксабол более показан при иммунных нарушениях, как средство, препятствующее пролиферации лимфоцитов, образованию иммунных комплексов, нормализующее липидный состав крови.

Фармакотерапевтическая эффективность исследуемых средств превосходит таковую препаратов сравнения – леспенефрила и канефрона, что может способствовать ограничению импорта аналогов и их большей доступности для широких слоев населения.

Все испытуемые средства являются не токсичными веществами, не вызывают нежелательных побочных реакций при их длительном введении лабораторным животным в терапевтических и субтоксических дозах, не обладают мутагенным, тератогенным, аллергизирующим действием и не оказывают негативного влияния на постнатальное развитие потомства животных.


ВЫВОДЫ
  1. Ведущим молекулярно-клеточным механизмом в нефропротекторном влиянии фитосредств является их способность ингибировать процессы свободнорадикального окисления и повышать активность эндогенной антиоксидантной системы организма при повреждениях почек ишемической, токсической, лекарственной, иммунной, бактериальной этиологии, для которых индукция свободнорадикального окисления является общим патогенетическим звеном;
  2. Средства растительного происхождения (нефрофит, фитоуросепт, эксабол) обладают широким спектром фармакологических свойств: гипоазотемическим, диуретическим, противовоспалительным, спазмолитическим, антибактериальным, фибринолитическим, стресспротективным, гиполипидемическим, иммуномодулирующим, мембраностабилизирующим; стимулируют процессы репаративной регенерации и энергетического обмена;
  3. Курсовое введение животным растительных средств в экспериментальнотерапевтических дозах при нефропатиях различной этиологии оказывает выраженное фармакотерапевтическое влияние, нормализуя морфофункциональное состояние почек животных на более ранних сроках патологического процесса;
  4. Функциональная состоятельность почек под влиянием фитосредств обусловлена их способностью предупреждать структурные нарушения клеток нефронов: дистрофию, ранний апоптоз и некроз;
  5. Отличительной особенностью указанных фитосредств является их выраженная фармакотерапевтическая эффективность при повреждениях почек: нефрофита - при ишемических и токсических, эксабола - иммунноопосредованных, фитоуросепта - инфекционно-воспалительных.
  6. Фармакотерапевтическая эффективность исследуемых средств превосходит таковую препаратов сравнения – леспенефрила и канефрона.
  7. Нефрофит относится к группе не токсичных, а фитоуросепт и эксабол - малотоксичных веществ, при их длительном введении лабораторным животным не вызывают развития нежелательных побочных реакций.


^ ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
  1. При фармакотерапии нефропатий следует учитывать степень выраженности окислительного стресса.
  2. При фармакотерапии заболеваний почек следует отдавать предпочтение средствам, обладающим антиоксидантным, мочегонным, гипоазотемическим, противовоспалительным, иммуномодулирующим, репаративным действием с учетом их влияния на иммунную систему организма, безвредности, удобства применения.



^ СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
        1. Шантанова Л.Н. Противовоспалительная активность сухого экстракта из Desmodium canadense DS / Л.Н. Шантанова, А.Г. Мондодоев, Т.Т. Бадашкеева, С.М. Николаев, В.П. Янулис, В.И. Глызин // Растит. ресурсы. – 1992. – Вып. 2. – С. 69-73.
        2. Мондодоев А.Г. Фармакологическая активность сухого экстракта горца птичьего / А.Г. Мондодоев, С.М. Николаев, Л.Н. Шантанова, Г.В. Ратникова // Фитотерапия и рефлексотерапия заболеваний. – Улан-Удэ, 1992. – С. 18-20.
        3. Шантанова Л.Н. Гипоазотемическая активность сухого экстракта из десмодиума канадского / Л.Н. Шантанова, А.Г. Мондодоев, Т.А. Бадашкеева, С.М. Николаев, В.П. Янулис, В.И. Глызин // Растит. ресурсы. – 1993. – Вып. 1 – С. 46-51.
        4. Мондодоев А.Г. Фармакотерапевтическая эффективность нефрофита при острой почечной недостаточности / А.Г. Мондодоев, Л.Н. Шантанова, Т.А. Ажунова // Сб. научных трудов ВСГТУ. Серия: Химия и биологически активные вещества. – Улан-Удэ, 1995. – Вып. 2. – С. 67-71.
        5. Лоншакова К.С. Экспериментальная фармакотерапия нефрозов / К.С. Лоншакова, Л.Н. Шантанова, А.Г. Мондодоев // Сб. научных трудов ВСГТУ. Серия: Химия и биологически активные вещества. – Улан-Удэ, 1995. – Вып. 2. – С. 20-29.
        6. Николаев С.М. Фармакологическая активность сухого экстракта из надземной части Desmodium canadense (L.) DS. при токсическом поражении почек / С.М. Николаев, В.И. Глызин, Л.Н. Шантанова, А.Г. Мондодоев, Б.И. Хамаев // Растит. ресурсы. – 1996. – Вып. 3. – С. 113-118.
        7. Николаев С.М. Фармакологическая активность сухого экстракта из листьев Аrctostaphylos uva-ursi L. при экспериментальном пиелонефрите / С.М. Николаев, Л.Н. Шантанова, А.Г. Мондодоев, М.Ц. Ракшаина, К.С. Лоншакова, В.И. Глызин // Растит. ресурсы. – 1996. – Вып. 3. – С. 118-123.
        8. Николаев С.М. Фармакотерапевтическая эффективность нефрофита при ишемии почек / С.М. Николаев, А.Г. Мондодоев, Л.Н. Шантанова, В.И. Глызин, Т.А. Ажунова // Растит. ресурсы. – 1996. – Вып. 1-2. – С.117-121.
        9. Шантанова Л.Н. Фармакотерапевтическая эффективность растительного полиэкстракта нефрофита при сулемовом некронефрозе / Л.Н. Шантанова, А.Г. Мондодоев, К.С. Лоншакова, С.М. Николаев // Растит. ресурсы. – 1996. – Вып. 1-2. –С. 110-117.
        10. Шантанова Л.Н. Влияние препарата нефрофита на функциональное состояние печени и почек при интоксикации тетрахлорметаном / Л.Н. Шантанова, С.М. Николаев, А.Г. Мондодоев // Растит. ресурсы. – 1997. – Вып. 3. – С. 76-81.
        11. Николаев С.М. Иммуномодулирующее действие многокомпонентных фитосредств в условиях вторичного иммунодефицита / С.М. Николаев, В.Б. Хобракова, А.Г. Мондодоев // Практическая фитотерапия. – 2002. – №4. – С. 9-12.
        12. Абгалдаева Е.А. Нефропротекторные свойства «нефрофита» при экспериментальной канамициновой нефропатии / Е.А. Абгалдаева, А.Г. Мондодоев, Т.А. Ажунова // Тез. докл. Х Росс. национ. конгресса «Человек и лекарство». – М., 2003. – С. 685-686.
        13. Абгалдаева Е.А. Сравнительный анализ нефротоксичности нестероидных противовоспалительных препаратов / Е.А. Абгалдаева, А.Г. Мондодоев, Т.А. Ажунова // Мат. научно-практ. конф. «Биологически активные добавки в профилактической медицине». – Улан-Удэ, 2003. – С. 106.
        14. Мондодоев А.Г. Современные принципы фитопрофилактики и фитотерапии заболеваний почек и мочевыводящих путей / А.Г. Мондодоев, И.Э. Матханов // Мат. научно-практ. конф. «Биологически активные добавки в профилактической медицине». – Улан-Удэ, 2003. – С. 19.
        15. Мондодоев А.Г. Противовоспалительная активность сухого экстракта горца птичьего / А.Г. Мондодоев, Л.Н. Шантанова, И.Э. Матханов, З.Г. Жамбалов // Мат. научно-практ. конф. «Биологически активные добавки в профилактической медицине». – Улан-Удэ, 2003. – С. 104.
        16. Абгалдаева Е.А. Нефропротекторное действие нефрофита при экспериментальной канамициновой нефропатии / Е.А. Абгалдаева, А.Г. Мондодоев, Т.А. Ажунова // Вестник БГУ. Серия: Медицина. – 2003. – Вып. 3. – С. 109-115.
        17. Мондодоев А.Г. Фитотерапия и фитопрофилактика нефропатий / А.Г. Мондодоев, Е.А. Абгалдаева, С.Д. Батоев // Мат. Всеросс. конф. «Байкальские чтения-1. Разгрузочно-диетическая терапия и традиционная медицина». – СПб., 2003. – С. 217-221.
        18. Абгалдаева Е.А. Нефропротекторное действие «нефрофита» при экспериментальной лекарственной нефропатии, вызванной туберкулостатиками / Е.А. Абгалдаева, А.Г. Мондодоев, Т.А. Ажунова // Мат. научно-практ. конф. «Развитие традиционной медицины в России». – Улан-Удэ, 2003. – С. 5.
        19. Югдурова Е.Д. Перспективы поиска и разработки биологически активных добавок для больных с патологией органов мочевыделительной системы. / Е.Д. Югдурова, А.А. Маркарян, А.Г. Мондодоев // Мат. межд. научно-практ. конф. – Сухэ–Батор, 2003. – С. 57-58.
        20. Абгалдаева Е.А. Нефропротекторное действие «нефрофита» при экспериментальной лекарственной нефропатии / Е.А. Абгалдаева, А.Г. Мондодоев, Т.Д. Могнонова // Мат. III Межрег. конф. «Медицина завтрашнего дня». – Чита, 2004. – С.4.
        21. Маркарян А.А. Антиоксидантная активность нового растительного сухого экстракта нефрофит / А.А. Маркарян, Т.Д. Даргаева, А.Г. Мондодоев //Бюллетень эксперим. биол. и мед. – 2004. – Т. 137, №1. – С. 39-41.
        22. Маркарян А.А. Аминокислотный состав нового комплексного растительного препарата нефрофит и его возможная роль в коррекции сулемовой острой почечной недостаточности у крыс / А.А. Маркарян, Р.Н. Аляутдин, А.Г. Мондодоев //Бюллетень эксперим. биол. и мед. – 2004. – Т. 137, №2. – С. 190-193.
        23. Шагтанова Л.Н. Противовоспалительная активность средства растительного происхождения / Л.Н. Шантанова, А.Г. Мондодоев, Ю.Л. Башкуева, Е.Д. Югдурова, Г.Г. Николаева // Вестник БГУ. Серия: Медицина. – 2004. – Вып.4. – С. 64-71.
        24. Шантанова Л.Н. Диуретическое и спазмолитическое действие сухого экстракта ортосифона тычиночного / Л.Н. Шантанова, А.Г. Мондодоев, И.П. Леднева, Ю.Б. Эрдынеев // Вестник БГУ. Серия: Медицина. – 2004. –Вып.4. – С.71-75.
        25. Башкуева Ю.Л. Иммуномодулирующие свойства сухого экстракта «Байкальский-6» / Ю.Л. Башкуева, В.Б. Хобракова, Л.Н. Шантанова, А.Г. Мондодоев // Забайкальский медицинский вестник. – 2004. – №4. – С. 37-40.
        26. Башкуева Ю.Л. Разработка и антибактериальные свойства нового уросептического средства / Ю.Л. Башкуева, Л.Н. Шантанова, А.Г. Мондодоев, С.Ч. Гончикова, Г.Г. Николаева, О.А. Бардаханова, А.А. Ербахаева // Забайкальский медицинский вестник. – 2004. – №4. – С. 15-18.
        27. Югдурова Е.Д. Стандартизация сухого экстракта «Байкальский-6» / Е.Д. Югдурова, Г.Г. Николаева, А.А. Маркарян, Т.Д. Даргаева, Л.А. Нагаслаева, Ю.Л. Башкуева, А.Г. Мондодоев // Мат. VI симпозиума по фенольным соединениям. – М., 2004. – С.110.
        28. Башкуева Ю.Л. Антибактериальные свойства нового уросептического средства / Ю.Л. Башкуева, Л.Н. Шантанова, А.Г. Мондодоев, С.Ч. Гончикова // Мат. научно-практ. конф. «Развитие традиционной медицины в России». – Улан-Удэ, 2004. – С. 80-81.
        29. Башкуева Ю.Л. Механизмы антибактериальной активности фитоуросепта / Ю.Л. Башкуева, Л.Н. Шантанова, А.Г. Мондодоев, А.А. Маркарян // Мат. научно-практ. конф. «Развитие традиционной медицины в России». – Улан-Удэ, 2004. – С. 84.
        30. Эрдынеев Ю.Б. Исследование безопасности экстракта ортосифона тычиночного / Ю.Б. Эрдынеев, А.Г. Мондодоев, Л.Н. Шантанова, К.С. Лоншакова // Мат. научно-практ. конф. «Развитие традиционной медицины в России». – Улан-Удэ, 2004. – С. 44.
        31. Абгалдаева Е.А. Нефропротекторное действие нефрофита при экспериментальной лекарственной нефропатии / Е.А. Абгалдаева, А.Г. Мондодоев, Т.А. Ажунова // Мат. научно-практ. конф. «Развитие традиционной медицины в России». – Улан-Удэ, 2004. – С. 42.
        32. Эрдынеев Ю.Б. Влияние экстракта ортосифона тычиночного на течение сулемового некронефроза / Ю.Б. Эрдынеев, А.Г. Мондодоев, Л.Н. Шантанов, Т.Д. Даргаева // Мат. научно-практ. конф. «Развитие традиционной медицины в России». – Улан-Удэ, 2004. – С. 81-82.