Geum.ru

Отчет  по нир

Вид материалаОтчет

Содержание


Нижний Новгород
Материалы и методы исследования.
Результаты проведенных исследований.
Подобный материал:


   

 

 

ОТЧЕТ  по НИР

 по договору о сотрудничестве № 69 от 28 июня 2004г.

 с ООО  НПО «Источник долголетия»  "Клинико-лабораторная оценка эффективности биологической активной добавки  Астин  при лечении больных  ревматоидным артритом»

 

         


                                                                                

 

 

 

 

 

 
^

 

Нижний Новгород


 

 

Введение

К настоящему времени создано множество пищевых биодобавок, в состав которых входят соединения и, прежде всего, витамины, обладающие известными антиоксидантными свойствами.  Пищевые биодобавки как индивидуального, так и промышленного использования,  получили особенно широкое распространение в 90-е годы нашего столетия. БАД АСТИН изготовлен на основе морской микроводоросли Гематококкус (генетически немодифицированной). Указанная микроводоросль содержит природное целебное вещество астаксантин. Благодаря уникальному молекулярному строению астаксантин является эффективным антиоксидантом. Он в 10 – 12 раз  активнее бета- каротина и в 500- 550 раз витамина Е. Кроме того, микроводоросль Гематококкус содержит в себе заменимые и незаменимые аминокислоты, моно- и полиненасыщенные жирные кислоты :  омега –3 и омега – 6, комплекс витаминов группы В, витамин С, микро- и макроэлементы. В результате Астаксантин это вещество, надежно защищающее организм от разрушительного действия свободных радикалов, которые оказывают токсическое действие на клеточном уровне, нарушая строение жизненно важных молекул полиненасыщенных жирных кислот, белков, нуклеиновых кислот.

Свободно-радикальное окисление липидов непрерывно протекает в норме во всех тканях живых организмов, и свободно-радикальные процессы при их низкой интенсивности являются одним из типов нормальных метаболических реакций. (3,5). Основным субстратом для этих реакций являются  полиненасыщенные жирнокислотные остатки фосфолипидов биологических мембран и липопротеидных комплексов плазмы. В физиологических условиях  перекисям липидов принадлежит важная роль в клеточном метаболизме, постоянстве поддержания внутренней  среды организма и его адаптационных реакциях. Перекиси липидов являются необходимым промежуточным звеном в биосинтезе биологически активных веществ:  простагландинов, стероидных гормонов, тромбоксанов. Они участвуют в реакциях окислительного фосфорилирования, в процессах распространения возбуждения и торможения, в регуляции адреналовой системы. Смена про- и антиоксидантных состояний в клетке определяет  способность клеток к миграции, пролиферации, дифференцировке, адгезии.  За счет изменения липидного окружения в клеточной мембране они   могут не только активировать, но и ингибировать активность мембрановстроенных ферментов. Отдельные классы перекисей липидов выступают в роли аллостерических факторов ферментов, играют роль лимфатических ингибиторов. Активация свободно-радикального окисления способствует качественному изменению состава липидных фракций мембран, что вызывает изменение их физических свойств (эластичности, механической прочности, проницаемости).  В свою очередь, нарушение соотношений фосфолипидов мембраны приводит к изменению скорости различных ферментативных реакций.

Непременным условием протекания перекисного окисления липидов (ПОЛ) является наличие в организме активных форм кислорода.  Одним из источников их образования  являются реакции фагоцитоза, что лежит в  основе нарушения свободно-радикальных реакций при воспалительных заболеваниях. Функциональная активность фагоцитирующих клеток (нейтрофилов, моноцитов, макрофагов) в значительной степени обусловлена их способностью генерировать активные формы кислорода. Данное свойство доказано для бактерицидной активности этих клеток многими авторами (3,4).  Интенсивность ПОЛ является важнейшим фактором, регулирующим работу иммунной системы.  Известно, что направленность и интенсивность иммунологических реакций определяется изменением липидного бислоя клеточных  мембран. Установлена взаимосвязь между содержанием антиоксидантов и состоянием рецепторного аппарата эффекторных клеток.

В процессе ПОЛ последовательно образуется широкий спектр продуктов. К ним относятся свободнорадикальные интермедиаты, продукты начального этапа  окисления липидов (гидроперекиси, диеновые и триеновые конъюгаты, эндоперекиси), промежуточные или вторичные соединения (альдегиды и кетоны) и конечные продукты  - низкомолекулярные легколетучие углеводороды (этан, пентан) и флуоресцирующие продукты - основания Шиффа.  В нормальных условиях окисление липидов протекает на определенном стационарном  уровне, благодаря наличию взаимосвязанных систем, осуществляющих его регуляцию.

К факторам, защищающим органы и ткани от избыточного переокисления, относятся системы, характеризующиеся высокой специфичностью, клеточной и органной локализацией действия. Основными из них являются антиоксидантные ферменты — супероксиддисмутаза, каталаза и глутатионпероксидаза. Особую роль играет белок плазмы церуплазмин, являясь главным внеклеточным антиоксидантом, ингибирующим 50% активности всей активности ПОЛ сыворотки крови. 

К неферментативным веществам - ингибиторам, в крови относятся  жирорастворимые - витамины А,Е, убихиноны, стероидные гормоны, играющие главенствующую роль в защите основных структурных компонентов биологических мембран,  и водорастворимые - глутатион, аскорбиновая кислота, мочевая кислота, мочевина, билирубин, таурин, серосодержащие аминокислоты, пептиды и белки, никотинамид, липоевая кислота, серотонин, гистамин, соединения, проявляющие свое протекторное действие как на мембране, так и в  плазме крови.  Совокупная иерархия механизмов клеток, тканей, органов и систем,  направленных на сохранение и поддержание в пределах нормы окислительных реакций организма, получила название физиологической антиоксидантной системы (АОС). 

Под антиоксидантной активностью понимается  суммарная концентрация всех антиоксидантов  в организме,  включая ферменты и неферменты. Нарушение работы АОС, снижение ее буферной емкости может быть вызвано падением уровня  антиоксидантов, ингибированием  антиперекисных ферментов, блокированием  патологическими факторами процессов, поставляющих водород (в частности, в составе НАДН2 и НАДФН2) для восстановления окисленных антиоксидантов.

Постоянное функционирование различных звеньев АОС по принципу обратной связи обеспечивает поддержание постоянного уровня продуктов  ПОЛ и удерживает концентрацию активных форм кислорода на низком уровне. При встрече организма с чрезвычайным раздражителем,  экстремальным агентом про-оксидантно-антиоксидантное равновесие смещается в направлении доминирования ПОЛ. Антиоксидантные резервы буферных систем могут оказаться недостаточными для сохранения окислительного гомеостаза. Ответом на срочную потребность организма в пополнении антиоксидантных ресурсов является стрессорная активация нейрогуморальных систем регуляции, прежде всего, симптоадреномодулярной и гипоталамо-гипофизно-кортикоадреналовой, гормональные и медиаторные продукты которых прямо и опосредованно увеличивают антиоксидантный потенциал наряду с другими адаптационными функциями. Если же стрессорное воздействие оказывается очень сильным и продолжительным, наступает стадия истощения резервов антиоксидантной защиты.  Наблюдается вторичная вспышка ПОЛ, на фоне которой может развиться разнообразная патология, необратимые нарушения жизненных функций и гибель клеток тех или иных органов. Свободнорадикальный механизм повреждения плазматических,  митохондриальных  и ядерных мембран, генома, липопротеидов плазмы, обуславливающий нарушение целостности сосудов и гистогематических барьеров, играет важнейшую роль в патогенезе наиболее распространенных заболеваний, в том числе,  воспалительных, инфекционных и метаболических.

Для поддержания антиоксидантного статуса организма, особенно при неблагоприятных для него ситуациях широко применяются биодобавки, содержащие недостающие компоненты. .

В связи с этим представляется интересным оценить эффективность введения в диету современного человека БАД, содержащих антиоксиданты. Принципиально особое значение это имеет для больных, в патогенезе заболеваний которых одно из ведущих мест занимает нарушение баланса между активным свободнорадикальным  состоянием и уровнем  собственной антиоксидантной системы. К таким заболеваниям относят ревсматоидный артрит.

Учитывая весомое значение в патогенезе  интенсификации процессов ПОЛ и свободно радикальной активации в развитии ревматоидного артрита, представляется целесообразным назначение больным средств метаболической терапии с антиоксидантной активностью.

 

Целью данной научно-исследовательскоой работы явилось обоснование  эффективности   включения БАД Астин в терапию больных ревматоидным артритом..

Для достижения поставленной цели необходимо было провести:

1.     Анализ иммунологических показателей периферической крови больных, страдающих  ревматоидным артритом.

2.      Анализ биохимических показателей, характеризующих свободнорадикальное окисление.

 

^ Материалы и методы исследования.

Испытание  БАД Астин проводили в 3-ем терапевтическом отделении (ревматологическом) 1 Градской больницы  (главный врач - В.Я. Липатов) двойным слепым методом.

Общее количество больных, включенных в исследование  - 40 человек (20 человек - группа контроля, 20 человек- группа  испытания БАД Астин). Основной диагноз больных в обеих группах наблюдения - ревматоидный артрит (РА), у ряда больных имел место осложнение артрозом  с обнаруженными L- клетками. Средний возраст больных  45 лет (от  28 - до 83 лет). Больные,  включенные в контрольную группу, получали стандартную для их диагноза терапию (цитостатик метатрексат, внутрисуставное введение антибиотиков, физиолечение и лечебная физкультура). Среди больных, составивших группу испытания, 10 человек наряду с традиционной терапией получали в течение 30 дней  по 1 капсуле БАД  Астин (далее эта группа  обозначается как группа 1), 10 человек, помимо капсулы Астин  применяли  бальзам для суставов Астин  (группа 2).

При поступлении в стационар и через 30 дней, т.е. после окончания приема капсулы БАД Астин и бальзама Астин, больным и контрольной группы и  двух групп испытания БАД Астин проводили иммунологические тсследования  уровней ревматоидного фактора ( РФ ) с использованием латекс-теста фирмы Human,, циркулирующих иммунных комплексов ( ЦИК ),  методом Сидорчук при длине волны 450 нм, С- реактивного белка с использованием латекс-теста фирмы Human, нерастворимого белка сыворотки крови (НБСК) (методические рекомендации Зверевой К.В. и Гладковой Н.Д.). Данные анализы проводили в клинико-диагностической лаборатории 1 Градской больницы (зав. лабораторией  - Н.В.Семененко)

В нашей работе  для оценки интенсивности свободно-радикального окисления использовался скрининговый метод индуцированной хемилюминесценции (ХЛ) сыворотки крови с  измерением ряда параметров полученной хемилюминограммы на приборе БХЛ -о6 (разработка г.Нижний Новгород).  В результате такого подхода  за 30 секунд можно получить и измерить следующие показатели:

        показатель I max - максимальная интенсивность свечения - дает представление о потенциальной способности  биологического объекта, в том числе и сыворотки крови, к свободнорадикальному окислению липидов;

        S - светосумма за 30 секунд  - в относительной степени отражает содержание радикалов, соответствующих обрыву  цепи свободнорадикального окисления.  Эта величина обратно пропорциональна антиоксидантной активности пробы, зависит от относительного количества и физико- химических параметров каждого из биоантиоксидантов, имеющихся в анализируемой жидкости, их взаимного влияния друг на друга, от присутствия веществ, способных усиливать или ослаблять действие биоантиоксидантов (ЛПВП, церулоплазмин, трансферин, альбумин, серосодержащие  аминокислоты пептиды и белки,  мочевина, мочевая кислота. билирубин, эстрогены, таурин), а также поступающих с пищей (аскорбиновая и никотиновая кислоты, биофлавоноиды, селен и другие);

        tg 2  -  показатель, характеризующий скорость спада процессов свободнорадикального окисления, т.е. также дает представление об антиоксидантной системе

Оценку перекисного окисления липидов осуществляли за счет показателей молекулярных продуктов ПОЛ - первичных ДК и ТК, при  длине волны 233 нм и 275 нм, соответственно. Полученные результаты выражали в  единицах оптической плотности на мг общих липидов.

Уровень конечных продуктов – оснований Шиффа (ОШ)- методом флуоресценции на приборе РФ (г. Москва) в клинико-диагностической лаборатории Нижегородского областного клинического диагностического центра НОКДЦ Полученные результаты выражали в условных единицах на мг общих липидов.

 

^ Результаты проведенных исследований.

 

Полученные данные представлены в двух таблицах

 

 

Таблица 1

Иммунологические показатели крови больных

ревматоидным артритом

 

 
 
РФ МЕ/мл
ЦИК опт.ед
СР белок (мг/л)
НБСК (ед.)

Контроль
До
158 ± 9,1
90,9 ± 7,1
33 ± 1,7
19,4 ± 2,3

После
208 ± 8,4
77,8 ± 6,2
21 ± 1,9
16,6 ± 3,2

Группа испытания 1
До
294,8 ± 6,8
114,9 ± 10,1
33 ± 3,1
21,8 ± 3,9

После
225,7 ± 7,1*
85,5 ± 6,4
12 ± 1,7
16 ± 2,1

Группа испытания 2
До
 411,4 ± 10,1
105,9 ± 7,2
42,8 ± 3,8
22,2 ± 4,1

После
240,0 ± 6,2
88,6 ± 6,8
33,4 ± 2,9
16,2 ± 2,0

Норма
 
Отриц.
100
отриц.
16

 

 - достоверность различий по сравнению с группой больных до лечения,

     p  0,05

 

 

Таблица 2

Показатели свободнорадикального и перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты у  больных ревматоидным артритом

 

Группы
Показатели   хемилюминограммы и перекисного окисления липидов

Imax
S
tg2aльфа
ДК
ТК
ОШ

 Контроль

До лечения

 

После  лечения
1,89 ±

0,71

 
15,34±

1,42
-1,048 ±0,07
0,32 ±

   0,07
0,08± 0,002
23,32±

2,61

1,81±

0,60

 
16,01±

1,38
-0,94±

0,06
0,30± 0,05
0,07± 0,005
21,20± 2,50

Испытание:

группа 1

до лечения

 

после лечения

 

 

группа 2

до лечения

 

после лечения
 

 

1,68±

0,12

 

1,74± 0,31

 
 

 

14,06±

2,51

 

14,90±

1,95
 

 

-0,801±

0,051

 

-0,73±

0,069
 

 

0,305± 0,040

 

0,25± 0,06
 

 

0,056±

0,004

 

0,05±

0,003
 

 

19,39±

3,51

 

13,30±

2,41

 

 

1,49±

0,25

1,31±

0,11

 
 

18,71± 1,89

13,20±

1,05
 

-0,264±

0,062

-0,301±

0,059
 

0,28±

0,05

0,165±

0,04
 

0,068±

0,004

0,049±

0,001
 

22,59±2,31

 

15,42±1,95

 

 - достоверность различий по сравнению с группой больных до лечения,

     p  0,05

 

 

Прежде всего следует отметить хорошую переносимость больными как капсул Астин, так и бальзама Астин.  Аллергических реакций на БАД не замечалось. В отзывах на действие бальзама Астин реакции больных характеризуются только восторженными откликами, а реально вызывают уменьшение боли, отечности, увеличение подвижности суставов.

Исходно у больных и контрольной  группы и групп сравнения  отмечались  очень выраженные нарушения иммунологических показателей. Отмечались высокие уровни РФ, отрицательные значения этого показателя, характерные для нормы отмечались только у двух больных   В контрольной группе после проведения стандартного лечения  у больных отмечалось достоверное снижение  только  показателя  С - реактивного белка. Что касается других показателей , то наблюдается даже увеличение уровня РФ. Применение, наряду с традиционной терапией,  капсул Астин,  вызывало  достоверное снижение всех иммунологических показателей. Дополнительное введение бальзама Астин,  характеризовалось еще более выраженным улучшением иммунного статуса больных ревматоидным артритом, особенно это отразилось в показателе РФ ( отрицательные значения этого показателя наблюдались у 10 больных по сравнению с двумя в контроле )

     Как видно из таблицы 2 , исходно у больных ревматоидным артритом имеют место увеличение показателей конечных продуктов ПОЛ - оснований Шиффа ( ОШ ) и снижение уровня общей антиоксидантной активности, что отражается в показателе S. Стандартное лечение не способствовало активации собственной антиоксидантной системы и снижению уровней продуктов ПОЛ. Введение БАД Астин, особенно сочетание капсулы и бальзама вызывало достоверное увеличение показателей общей антиоксидантной активности, что сопровождалось снижением всех показателей ПОЛ, как первичных - ДК и ТК, что особенно важно, ОШ- конечных продуктов, вызывающих повреждение клеточных мембран и способствующих разобщению ферментных систем и нарушению метаболического и иммунного статуса.

 

ВЫВОДЫ

Таким образом, включение в терапию больным ревматоидным артритом БАД Астин  и в форме капсул и в форме бальзама Астин  вызывает выраженный корригирующий эффект, направленный на восстановление баланса про - и антиоксидантных систем по сравнению с контролем. Положительное влияние на антиоксидантную систему и процессы ПОЛ непосредственным образом связано с достоверным улучшением показателей иммунного статуса, что в целом определяет течение и степень тяжести заболевания.

БАД АСТИН в  виде капсул, а особенно сочетание   капсул и бальзама следует рекомендовать для включения  в терапию больных ревматоидным артритом.

Используемая литература

 

1. В. А. Барабой, Д.А. Сутковой. Окислительно- антиоксидантный гомеостаз в норме и патологии,Киев, Чернобыльинтерформ, 1997, ч.1,202 с.

2. В.А.Барабой, Д.А.Сутковой. окислительно-антиоксидантный гомеостаз в норме и патологии, Киев, Чернобыльинтерформ, 1997, ч.2, 219 с.

3. Н.К.Зенков, В.З.Ланкин, Е.Б.Меньшикова. Окислительный стресс,Маик, “Наука/ Интерпериодика”, 2001, 343 с

4. Ю.А. Зозуля. В.А. Барабой, Д.А.Сутковой. Свободнорадикальное окисление и антиоксидантная защита при патологии головного мозга,М.,”Знание-М”,2000, 344с.

5. К.Н.Конторщикова. Перекисное окисление липидов в норме и патологии, Н.Новгород,2000,

6. В.З. Ланкин, А.К.Тихазе, Ю.Н.Беленков. Свободнорадикальные процессы в норме и при патологических состояниях Пособие для врачей, М., 2001, 78 с.

7. В.А. Тутельян, В.А.Княжев, С.А.Хотимченко и др. Селен в организме человека.Метаболизм. Антиоксидантные свойства. Роль в канцерогенезе., М., 2002, 220 с.

8. В. Х. Хавинсон, В.А.Баринов, А.В.Арутюнян, В.В.Малинин. Свободнорадикальное окисление и старение. Санкт-Петербург,”Наука”, 2003, 327с.